3 курс / Фармакология / Диссертация_Ромодановский_Д_П_Разработка_требований_для_оценки_фармакокинетики

биологических лекарственных препаратов [29].

3.3. Алгоритм оценки гендерных различий по результатам исследований

биоэквивалентности воспроизведённых лекарственных препаратов

Результаты исследований БЭ воспроизведённых препаратов можно использовать для выявления и оценки возможных гендерных различий ФК параметров AUC и Сmax. Могут быть определены остаточная вариабельность (внутрииндивидуальную вариабельность) отдельно для мужчин и женщин; различия в зависимости от формы дозирования; а также при отсутствии необходимой информации в инструкциях референтных препаратов, популяционные гендерные различия.

Алгоритм анализа различий, обусловленных влиянием пола и формы дозирования

(«sex-by-formulation interactions») (см. рисунок 15):

•Полученные результаты параметров Cmax и AUC для каждого субъекта всей популяции исследования разделить на значения, полученные у мужчин и у женщин, и

распределить их по группам исследуемого и референтного препаратов.

•Рассчитать геометрические средние параметров Сmax и AUC у мужчин и женщин для исследуемого и референтного препаратов.

•Рассчитать отношение геометрических средних исследуемого и референтного препаратов (T/R) у мужчин и у женщин для каждого из ФК параметров.

•Рассчитать разницу между отношением геометрических средних исследуемого и референтного препаратов (T/R) у мужчин и у женщин для Сmax и AUC. В случае если разница будет больше и равна 0,2 (20%) можно предположить наличие меж-половых различий,

обусловленных формой дозирования, что говорит о том, что референтный и воспроизведённый препарат могут быть не взаимозаменяемы во всей популяции пациентов, включающую субъектов обоего пола.

Алгоритм оценки остаточной вариабельности для каждого пола (рисунки 16 и 17):

Исходные значения оценки Cmax и AUC у мужчин и женщин для исследуемого и референтного препаратов, полученные ранее (см. «Алгоритм анализа популяционных гендерных различий и различий, обусловленных влиянием пола и формы дозирования»), трансформировать с помощью функции логарифмирования.

Логарифмированные значения проанализировать с помощью дисперсионного анализа

ANOVA. В анализ включить в качестве фиксированных факторов, вносящих вклад в вариацию данных – последовательность, субъект (в последовательности), период, препарат.

Рисунок 15. Схема математической оценки параметров Cmax и AUC для каждого пола.

101

Примечание: Cmax – максимальная концентрация в крови; AUC – площадь под кривой «концентрация-время»; М – мужчины; Ж – женщины; Mean – среднее; GMean – геометрическое среднее; ФК – фармакокинетика; Test – исследуемый препарат; Reference – референтный препарат.

Полученные значения остаточной вариации MSE (среднеквадратичная ошибка) перевести в коэффициент внутрииндивидуальной вариабельности:

= √[ − 1] × 100

Сравнить полученные значения внутрииндивидуальной вариабельности между полами с помощью F теста (при уровне значимости 0,05).

Рисунок 16. Схема оценки остаточной вариабельности параметра Cmax для мужчин и женщин.

Примечание: Test – исследуемый препарат; Reference – референтный препарат; Cmax – максимальная концентрация в крови; М – мужчины; Ж – женщины; ln – логарифмирование исходных данных для дальнейшего дисперсионного анализа; ANOVA – дисперсионный анализ; MSE – остаточная вариация (среднеквадратичная ошибка); CVintra – коэффициент внутрииндивидуальной вариабельности.

Рисунок 17. Схема оценки остаточной вариабельности параметра AUC для мужчин и женщин.

102

Примечание: Test – исследуемый препарат; Reference – референтный препарат; AUC – площадь под кривой «концентрация-время»; М – мужчины; Ж – женщины; ln – логарифмирование исходных данных для дальнейшего дисперсионного анализа; ANOVA – дисперсионный анализ; MSE – остаточная вариация (среднеквадратичная ошибка); CVintra – коэффициент внутрииндивидуальной вариабельности.

Расчет симуляционных 90% доверительных интервалов у мужчин и у женщин.

• Для логарифмированных значений Сmax и AUC рассчитать GMean для исследуемого и референтного препарата у мужчин и женщин.

• Для каждого из ФК параметров (Сmax и AUC) рассчитать симуляционные доверительные интервалы согласно следующим уравнениям:

где L и U – нижняя и верхняя граница доверительных интервалов; exp – функция экспонирования значения; ln – функция логарифмирования значения; T – исследуемый препарат;

R – референтный препарат; – значение квантиля распределения Стьюдента,

соответствующее степени свободы (df=n-2) и α=0,05; MSE – остаточная вариация

(среднеквадратичная ошибка); n - количество субъектов (для расчетов - количество субъектов масштабировано к исходному значению размера выборки - n=nМ+nЖ).

Прикладное значение для выявления гендерных различий на данном этапе научной оценки вопроса может иметь оценка внутрииндивидуальной вариабельности у мужчин и женщин, а также оценка влияния формы дозирования на гендерные различия путем сравнения точечных оценок T/R у мужчин и женщин. В случае отсутствия достаточной информации по наличию гендерных отличий ФК у референтного препарата (оригинального), возможно

103

проведение ориентировочного популяционного анализа.

Таким образом, гендерные различия у мужчин и женщин могут оказывать значимое влияние на ФК ЛП, что в рамках исследований БЭ у субъектов только одного пола может привести к выходу на фармацевтический рынок препаратов не эквивалентных у популяции другого пола. Помимо факторов, обусловленных анатомо-физиологическими особенностями мужчин и женщин, данные различия могут быть обусловлены особенностями формой дозирования воспроизведенных лекарств. Т.е., другими словами, воспроизведенный препарат может быть биоэквивалентен референтному у мужчин, но не биоэквивалентен у женщин,

например, из-за состава вспомогательных веществ.

Исследования БЭ следует проводить с включением субъектов мужского и женского пола в пропорциональном соотношении, что следует отразить в регуляторных документах Российской Федерации и Евразийского экономического союза. Включение в дизайн исследования возможность проведения отдельного анализа по полу, будет иметь преимущество с точки зрения оценки риска потребителей.

Целесообразно провести научный анализ завершённых исследований БЭ на предмет выявления гендерных различий и анализ возможного влияния формы дозирования на эти различия.

При оценке результатов не завершенных и будущих исследований БЭ следует дополнительно проводить анализ по выявлению гендерных различий и анализ возможного влияния формы дозирования на эти различия.

Результаты анализа по выявлению соответствующих гендерных различий дадут полезную информацию, которую в дальнейшем можно будет обобщить и при необходимости включать в инструкции по медицинскому применению [52].

Вцелом вопрос выбора методики проведения подобного анализа требует дальнейшего обсуждения, т.к. также возможно включение в оценку дисперсионного анализа дополнительных факторов, таких как - пол, вес тела, взаимодействие «пол*препарат», которые могут дать дополнительную информацию.

Вкачестве примера анализа следует использовать алгоритм, приведенный выше.

104

3.4. Оценка результатов исследований биоэквивалентности

воспроизведенных лекарственных препаратов

3.4.1 Препараты с высокой внутрииндивидуальной вариабельностью

3.4.1.1. Оценка внутрииндивидуальной вариабельности ингибиторов ГМГ-КоА-редуктазы.

Аторвастатин.

Аторвастатин – селективный конкурентный ингибитор ГМГ-КоА-редуктазы, синтетическое гиполипидемическое средство. Время достижения максимальной концентрации составляет 1-2 часа, период полувыведения составляет около 14 часов [40]. У женщин максимальная концентрация выше, чем у мужчин, площадь под кривой «концентрация-время» наоборот14.

Проведенный анализ 34 исследований БЭ показал, что во всех рассмотренных исследованиях был выбран стандартный простой перекрёстный дизайн. Препаратом сравнения во всех исследованиях был оригинальный препарат Липримар®, изучались различные дозы аторвастатина от 20 до 80 мг. Период отмывки более чем в половине исследований составил 7 дней, длительность отбора и количество временных точек отбора значительно варьировало в различных исследованиях. Количество субъектов, включённых в статистический анализ параметров ФК, варьировало от 18 до 77 добровольцев (Приложение №1). По 18 и 24 субъекта включалось в основном в исследования отечественных препаратов и препаратов из Индии. Более 30 субъектов включались в исследования препаратов из стран ЕС и стран с высокоуровневой регуляторной системой обращения ЛП (например, Израиль, Исландия).

Преимущественно во всех исследованиях в крови определяли исходное вещество – аторвастатин, однако в 8 исследованиях из 34 определяли дополнительно метаболит 2-OH-

аторвастатин. В качестве биоаналитического метода определения аналитов в большинстве исследований использовали высокоэффективную жидкостную хроматографию с масс-

спектрометрической или тандемной масс-спектрометрической детекцией аналитов. Нижний предел количественного определения (НПКО) варьировал в диапазоне 0,1 – 50 нг/мл

(Приложение №1). В одном случае использовался биоаналитический метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовой детекцией (ВЭЖХ УФ) с НПКО 500 нг/мл, который в сравнении с остальными методиками можно считать недостаточно точным и рекомендовать не использовать его в дальнейшем.

В результате анализа значений концентраций аторвастатина и его метаболита были рассчитаны ФК параметры Cmax, AUC0-t, Tmax и их внутрииндивидуальная вариабельность (см.

14 Липримар®. Инструкция по медицинскому применению [Электронный ресурс] // Государственный реестр лекарственных средств. URL: https://grls.rosminzdrav.ru/InstrImg/0001454472/0000593884/%D0%9F_N014014_01[2019]_2.pdf (дата обращения:

11.05.2020).

105

таблицы 18, 19). На рисунках 18 и 19 представлены усредненные ФК профили аторвастатина и

его активного метаболита.

Таблица 18.

Усредненные фармакокинетические параметры аторвастатина.

Примечание: Cmax – максимальная концентрация в крови; AUC0-t – площадь под кривой «концентрация время» в интервале времени от 0 до момента t отбора последней пробы крови; tmax – время достижения максимальной концентрации; T – исследуемый препарат; R – референтный препарат; Mean – среднее арифметическое; SD – стандартное отклонение; * - использована аналитическая методика с ультрафиолетовой детекцией и низкой чувствительностью (НПКО 500 нг/мл); ** - расчеты средних значений и стандартного отклонения проведены без учета результатов исследования №32.

106

Рисунок 18.

Усредненные фармакокинетические профили аторвастатина.

а

б

Примечание: а) фармакокинетические профили воспроизведенных препаратов; б) фармакокинетические профили препаратов сравнения; Т1-Т34 и R1-R34 – нумерация исследований биоэквивалентности, вошедших в анализ; фармакокинетические профили исследуемого и референтного препаратов из исследования №32 не включены в связи с крайне высокими значениями концентраций.

Полученные результаты позволяют судить о том, что tmax аторвастатина находиться в районе 0,6-2,4 часов после приема внутрь. Средние значения Cmax находились на уровне 38 (±31)

нг/мл, в зависимости от принимаемой дозировки (20-80 мг) и аналитической методики.

Аналитическую методику определения аторвастатина следует планировать с учетом ожидаемой максимальной концентрации и имеющегося оборудования – например, НПКО при ВЭЖХ исходя из полученных максимальных концентраций должен быть менее 1,9 (±1,5) нг/мл.

В проанализированных исследованиях НПКО варьировал в диапазоне 0,1 – 50 нг/мл, таким образом, правило 5% от Cmax было соблюдено не во всех исследованиях.

Период полувыведения аторвастатина составляет 14 часов [40], поэтому при выборе точек забора образцов крови для ФК анализа препаратов с немедленным высвобождением следует

107

учитывать общую длительность 72 ч. Более частый отбор образцов крови следует планировать в диапазоне времени достижения Сmах около 0,6-2,4 часа. Период отмывки с учетом длительности периода полувыведения должен быть 7 дней (общепринятый минимальный период отмывки в исследованиях БЭ).

Таблица 19. Усредненные фармакокинетические параметры 2-OH-аторвастатина.

Примечание: Cmax – максимальная концентрация в крови; AUC0-t – площадь под кривой «концентрация время» в интервале времени от 0 до момента t отбора последней пробы крови; tmax – время достижения максимальной концентрации; T – исследуемый препарат; R – референтный препарат; Mean – среднее арифметическое; SD – стандартное отклонение.

Рисунок 19. Усредненные фармакокинетические профили 2-OH-аторвастатина.

а

108

б

Примечание: а) фармакокинетические профили воспроизведенных препаратов; б) фармакокинетические профили препаратов сравнения; Т1-Т34 и R1-R34 – нумерация исследований биоэквивалентности, вошедших в анализ.

Полученные результаты позволяют судить о том, что tmax 2-OH-аторвастатина находиться в районе 1,3-1,8 часов после приема внутрь. Средние значения Cmax находились на уровне 24 (±10)

нг/мл, в зависимости от принимаемой дозировки и аналитической методики.

Аналитическую методику определения 2-OH-аторвастатина следует планировать с учетом ожидаемой максимальной концентрации и имеющегося оборудования – например, НПКО при ВЭЖХ исходя из полученных максимальных концентраций должен быть менее 1,2 (±0,5)

нг/мл.

При выборе точек забора образцов крови для определения 2-OH-аторвастатина следует учитывать общую длительность 72 ч, т.к. к этому времени происходит снижение значений концентраций к исходному уровню (см. рисунок 18). Более частый отбор образцов крови следует планировать в диапазоне времени достижения Сmах около 1,3-1,8 часа. Период отмывки 7 дней может считаться достаточным.

Результаты анализа внутрииндивидуальной вариабельности представлены в таблице 20 [59], и демонстрируют, что в 12 исследованиях из 34 была обнаружена высокая вариабельность хотя бы одного из ФК параметров аторвастатина. В 4 исследованиях из 8, в которых определялись концентрации метаболита аторвастатина, также выявлена высокая внутри индивидуальная вариабельность. Стоит отметить, что из 12 исследований, продемонстрировавших высокую вариабельность аторвастатина, в 7 исследованиях были изучены препараты из стран ЕС и стран с высокоуровневой регуляторной системой обращения ЛП. Причем в этих 7 исследованиях в статистический анализ было включено 357 субъектов. В то время как в остальных 22

исследованиях в анализ было включено 649 субъекта. Т.е. усреднённое значение количества субъектов в 7 исследованиях составило 51, в остальных 22 исследованиях - 29. Выявленная

109

диспропорция говорит о различных подходах к проведению исследований аторвастатина в разных странах. Можно сделать предположение что, в странах с высокоуровневой регуляторной системой обращения ЛП аторвастатин считают высоковариабельным препаратом.

В руководстве FDA для исследований БЭ аторвастатина также указано на высокую вариабельность аторвастатина15. Наш анализ подтверждает, что препараты аторвастатина могут быть отнесены к высоковариабельным ЛП.

Таблица 20. Коэффициенты внутрииндивидуальной вариабельности аторвастатина и 2-OH-

аторвастатина.

15 Product-Specific Draft Guidance on Atorvastatin. [Электронный ресурс] // United States Food and Drug Administration. URL: https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/psg/Atorvastatin_tabs_20702_RC5-08.pdf (дата обращения: 08.05.2020).

110