Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
31 - Ферменты. Тематический зачёт..doc
Скачиваний:
14
Добавлен:
06.11.2018
Размер:
448.51 Кб
Скачать

Определение активности АсАт в сыворотке крови методом Райтмана-Френкеля. Проведение анализа.

Реактивы

Опытная проба, мл

Контроль для опытной пробы, мл

Калибровочная проба, мл

Контроль для калибровочной пробы, мл

Буфер-субстратная смесь

0,25

0,25

0,25

0,3

Сыворотка крови

0,05

-

-

-

Калибратор – пируват натрия

-

-

0,05

-

Инкубация 60 минут при температуре 37°С.

2,4-ДНФГ

0,25

0,25

0,25

0,25

Сыворотка крови

-

0,05

-

-

Тщательно перемешать все пробирки. Инкуюация 20 минут при t 18-25°С.

Раствор NаОН 0,4 моль/л

2,5

2,5

2,5

2,5

Все пробирки перемешать. Инкуюация 5 минут при t 18-25°С.

Длина волны 540 нм (500 – 560) нм; кювета – 1 см. Измерить оптическую плотность пробы (Епр) и калибратора (Екал) против соответствующих контролей.

Определение активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови. Процедура анализа.

Поместить в пробирки

Опытная проба, мл

Контроль на реактивы для опытной пробы, мл

Калибратор, мл

Контроль на реактивы для калибратора, мл

Рабочий реагент

0,2

0,2

-

-

Сыворотка крови

0,02

-

-

-

Смешать и инкубировать в водяной бане при 37°С 30 минут.

NаОН, 20 ммоль/л

2,0

2,0

1,62

2,2

Сыворотка крови

-

0,02

-

-

Калибратор

-

-

0,6

-

Смешать. Измерить оптическую плотность пробы (Епр) и калибратора (Екалибр.) против соответствующих контролей на реактивы при длине волны 405 (400 – 420) нм и d = 1 см.

Влияние температуры на скорость ферментативной реакции. Ход определения.

В 2 пробирки вносят по 10 капель раствора крахмала. В одну из них добавляют 5 капель раствора слюны, в другую – такое же количество предварительно прокипяченной слюны. Пробирки встряхивают, помещают в термостат на 15 минут при температуре 37°С. Охлаждают и проделывают реакции с раствором йода и реакцию Троммера.

Результаты записывают в виде таблицы и делают выводы.

пробирки

Субстрат

Фермент

Темпера-тура, °С

Реакции

С йодом

Троммера

1

Крахмал

Амилаза

37°С

2

Крахмал

Амилаза (прокипяченная)

100°С