Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
31 - Ферменты. Тематический зачёт..doc
Скачиваний:
14
Добавлен:
06.11.2018
Размер:
448.51 Кб
Скачать

Опыт 2: Специфичность действия амилазы.

Ход определения.

пробирки

Что делаем

Реакции

С йодом

Троммера

1

10 капель раствора крахмала + 4 капли раствора слюны

2

10 капель раствора сахарозы + 4 капли раствора слюны

Пробирки помещают в термостат при температуре 37°С. С содержимым каждой пробирки выполняют реакции с йодом и Троммера. Результаты записывают в таблицу.

Определение общей активности α-амилазы в сыворотке крови методом «конечной точки». Проведение анализа.

Длина волны 590 нм, кювета 1 см.

Реактивы

Опытная проба

Холостая проба

В центрифужные пробирки внести:

1. Буфер – субстрат

1 мл

1 мл

Инкубировать 5 минут при температуре 37°С.

2. Сыворотка крови (моча)

100 мкл

или 50 мкл мочи

3. Дистиллированная вода

100 мкл или 50 мкл

(для исследования мочи)

Включить секундомер! Перемешать в течение 5 секунд и поставить в термостат на 15 минут.

4. Осаждающий раствор (реактив № 3)

2 мл

2 мл

Перемешать! Выдержать пробирки при комнатной температуре 15 минут. При срочном анализе этот этап можно исключить. Центрифугировать 5 минут при 1500-3000 об/мин. Перенести надосадочную жидкость с помощью чистой пипетки в кювету.

Измерить оптическую плотность при длине волны 590 нм против холостой пробы.

Определение активности γ-глутамилтрансферазы в сыворотке крови унифицированным методом по „конечной точке”.

Проведение анализа.

Реактивы

Опытная проба, мл

Калибровочная проба, мл

Контроль для опытной пробы, мл

Контроль для калибровочной пробы, мл

Рабочий реагент

0,5

-

0,5

-

Сыворотка крови

0,05

-

-

-

Калибровочный раствор

-

0,05

-

-

Дистиллированная вода

-

0,5

-

0,55

Инкубация 15 минут при температуре 37°С.

Уксусная кислота, 5,6 моль/л

1,0

1,0

1,0

1,0

Дистиллированная вода

2

2

2

2

Сыворотка крови

-

-

0,05

-

Все пробирки тщательно перемешать.

Измерить оптическую плотность пробы (Епр) и калибратора (Екал) против соответствующих контролей на пробы.