Рекомендации по оформлению протокола. Методы индикации вирусов
Выявление цитопатогенного действия вирусов (ЦПД) в культуре клеток.
ЦПД - это дегенеративные изменения в клетках, которые проявляются в результате репродукции в них вирусов
|
Тип ЦПД |
Вирусы, вызывающие ЦПД | |
|
Полная дегенерация |
Полиовирус Вирусы Коксаки Вирусы ЕСНО | |
|
Частичная дегенерация |
По типу гроздьеобразования |
Аденовирусы |
|
По типу очаговой деструкции |
Вирус оспы Вирус гриппа | |
|
По типу симпластообразования |
Вирус кори Вирус паротита Вирус парагриппа РС-вирус Вирус герпеса | |
|
Пролиферация |
Онкогенные вирусы | |
2. Появление внутриядерных включений, выявляемых при окраске по Романовскому-Гимзе, при люминесцентной и электронной микроскопии.
3. Бляшкообразование под бентонитовым покрытием.
4. Реакция гемагглютинации (рга).
5. Реакция гемадсорбции.
6. Цветная проба. В результате жизнедеятельности клеток в питательной среде накапливаются кислые продукты, которые приводят к соответствующему изменению рН среды (желтый). При заражении культуры клеток цитопатогенными вирусами подавляется метаболизм клеток и рН среды не изменяется (среда остается красной).
7. Выявление размножения вирусов в куриных эмбрионах.
|
Часть эмбриона |
Вирусы |
Признак размножения |
|
Желточный мешок |
Вирус простого герпеса |
Гибель зародыша |
|
Хорион |
Вирус простого герпеса Поксвирусы Вирус саркомы Рауса |
Бляшки |
|
Аллантоис |
Вирус гриппа
|
Задержка развития заро-дыша и капилляроток- сикоз. Гемагглютинация |
|
Вирус паротита |
Гибель зародыша | |
|
Амнион |
Вирус гриппа |
Гемагглютинация |
|
Вирус паротита |
Гибель зародыша |
Задание 1. Научиться выявлять вирусную репродукцию в культурах клеток по цитопатогенному действию.
Студенты оценивают монослой культуры клеток, инфицированной на предыдущем занятии, выявляют цитопатогенное действие, анализируют его и зарисовывают в протоколах.
Задание 2. Изучить различные виды ЦПД вирусов на демонстрационных препаратах
|
Тип ЦПД |
Вирусы, вызывающие ЦПД |
Вид ЦПД |
|
Полная дегенерация |
Вирусы полиомиелита, вирусы Коксаки, вирусы ЕСНО |
|
|
По типу гроздьеобразования |
Аденовирусы |
|
|
По типу симпластообразования |
Вирус кори, вирус паротита, вирус парагриппа, РС - вирус, вирус герпеса |
|
Задание 3. Осуществить учет реакции гемагглютинации с целью выявления вирусов гриппа в хорион-аллантоисной жидкости.
РГА - это склеивание эритроцитов под действием вирусов.
1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 КЭ
Разведения вируссодержащей жидкости.
КЭ-контроль эритроцитов.
7. Вопросы для самоконтроля.
После инфицирования клеточных культур с последующим инкубированием пробирок в термостате наблюдается помутнение среды поддержки. О чем это свидетельствует?
Какие биологические признаки характерны для репродукции вируса в курином эмбрионе?
Как и когда можно использовать реакцию гемагглютинации (РГА) для индикации вирусов?
Каковы признаки репродукции вируса при культивировании вируса в лабораторных животных?
Культивируя вирус кори в культуре клеток, можно выявить большие многоядерные клетки. Как можно назвать такие изменения в пораженных клетках? Какие еще типы ЦПД могут вызывать вирусы в культуре клеток?
Могут ли размножаться вирусы в культуре клеток без появления ЦПД? Если да, то каким образом можно выявить репродукцию таких вирусов?