Рекомендации по оформлению протокола Классификация культур тканей и клеток, применяемых в вирусологии

Тканевые или органные культуры
Ткани зародышевого органа или его части, которые поддерживаются in vitro и сохраняют дифференциацию клеток и их функции
Клеточные культуры
Характеристики	Первично-трип-синизированные культуры клеток	Перевиваемые культуры клеток	Диплоидные культуры клеток
Морфология клеток по сравнению с исходной тканью	Не отличается	Отличается	Отличается
Набор хромосом	Диплоидный	Гетероплоидный	Диплоидный
Продолжительность жизни	Ограничена 1-3 пассажами	Не ограничена количеством пассажей	Ограничена 20-100 пассажами
Рост в суспензии	Невозможен	Возможен	Невозможен
Признаки малигнизации	Отсутствуют	Всегда есть	Отсутствуют
Период генерации	3-7 дней	2/3-1 день	1-15 дней
Контактная ингибиция при выращивании на стекле	Есть	Отсутствует	Есть
Примеры	1. Культура кле-ток почек обезьян 2. Культура клеток фибро-бластов эмбриона человека 3. Культура кле-ток фибробластов куриного эмбриона	1.HeLa (из карци-номы шейки матки) 2. KB (из карци-номы ротовой полости человека) 3.HЕp-2 (карцинома гортани человека) 4. Vero (из почки зеленой обезьяны)	Линии клеток фибробластов эмбриона человека (WI - 38, MRC - 5, MRC - 9, IMR - 90), коров, свиней, овец

Классификация питательных сред для культур клеток

Естественные	Ферментативные гидролизаты	Синтетические
Среда Эндерса: 85-90% коровьей амниотической жид-кости; 5-10% коровь-его эмбрионного экс-тракта, 5% конской сыворотки	Аминопептид Гемогидролизат Гидролизат лактальбумина	Сбалансированные солевые растворы: Эрла, Хэнкса, Дульбекко и Фогта 2. Поддерживающие среды: 199, Игла, ДМЕМ (среда Игла, модифицированная Дульбекко), МЕМ (среда Мельника-Игла)

Среды для культур клеток, применяемые в вирусологии, делят на 2 основных категории, - роста и поддержки.

Ростовые среды (РС), благодаря высокому содержанию сыворотки, способствуют быстрому клеточному росту. После формирования монослоя и перед инокуляцией вируса ростовую среду удаляют и заменяют средой поддержки. Для приготовления ростовой среды к питательной среде (например, ДМЕМ), добавляют 5-10% сыворотки крупного рогатого скота (ВРХ) или эмбрионной телячьей сыворотки (ЕТС) и антибиотики (пенициллин и стрептомицин).

Среды поддержки с низким содержанием сыворотки позволяют сохранить культуры клеток в состоянии медленного стойкого метаболизма в период размножения вируса.

Задание №1. На демонстрационных препаратах ознакомиться с разными видами культур клеток, которые используются в вирусологии, зарисовать в протокол.

Задание №2. Ознакомиться и записать в протокол методику подготовки материала для вирусологических исследований.

Задание №3. Осуществить инфицирование культур клеток вируссодержащим материалом.

4. Вопросы для самоконтроля

• Какие признаки положены в основу современной классификации вирусов?

• Свойством всего живого является способность к самовоспроизведению. Для вирусов существует один тип размножения. Как он называется? В чем его суть?

• Какие особенности репродукции РНК- и ДНК-геномных вирусов? В чем заключается роль обратной транскриптазы при репродукции ретровирусов?

• Вирусы являются достаточно устойчивыми в окружающей среде, к действию стерилизующих и дезинфицирующих факторов и средств. Какие особенности структуры вирусов обеспечивают их стойкость и способствуют развитию вирусных эпидемий и пандемий?

• Первичной моделью для культивирования вирусов были лабораторные животные. Назовите их, укажите преимущества и ограничения их использования.

• Вирусы относительно просто можно получить в большом количестве одним из методов культивирования. О какой системе культивирования вирусов идет речь? Почему ее нельзя считать универсальной?

• Вирусы являются особыми паразитами клеток человека, животных и растений. Как эта особенность вирусов была использована для культивирования вирусов in vitro?

• Как отличается действие умеренных и вирулентных бактериофагов? Каково их практическое использование?