Практическое занятие №17 Тема: "Культивирование вирусов. Индикация вирусной репродукции (2 занятие)"

1. Актуальность темы:

Диагностика вирусных инфекций в большинстве случаев базируется на выделении вируса из инфекционного материала и его дальнейшей идентификации. Правильное взятие материала для исследования, своевременная доставка его в лабораторию с соблюдением условий для сохранения возбудителя, верный выбор методов культивирования и идентификации вирусов позволяет своевременно установить диагноз вирусного заболевания.

Целью данного занятия является научиться определять вирусную репродукцию. Для достижения этой цели необходимо уметь:

выявлять вирусы в различных чувствительных системах (клеточных культурах, куриных эмбрионах, чувствительных лабораторных животных);

различать различные виды ЦПД в культуре клеток;

знать методику постановки реакций бляшкообразования под агаровым и бентонитовым покрытием;

проводить учет "цветной пробы", поставленной с целью индикации вирусов в культуре клеток, учет реакции гемадсорбции и реакции гемагглютинации.

На практическом занятии студенты могут ознакомиться с различными методами индикации вирусов, учатся интерпретировать полученные результаты.

2. Конкретные цели:

1. Трактовать морфологию и ультраструктуру вирусов.

2. Анализировать особенности взаимодействия вирусов с живыми системами.

3. Оценивать результаты размножения вирусов в живых системах.

4. Изучить методы культивирования вирусов в лабораторных условиях.

3. Базовые знания, умения, навыки, необходимые для изучения темы (междисциплинарная интеграция). Смотри практическое занятие №16.

4. Задания для самостоятельной работы во время подготовки к занятию.

1. Перечень основных терминов, параметров, характеристик, которые должен усвоить студент при подготовке к занятию:

Термин	Определение
1	2
Цитопатическое действие вируса (ЦПД)	ЦПД - видимые под микроскопом морфологические изменения клеток, возникающие в результате внутриклеточной репродукции вирусов.
1	2
Включения	Включения - скопления вирионов или отдельных их компонентов в цитоплазме или ядре клеток, выявляемые под микроскопом специальными методами окраски. Вирус натуральной оспы образует цитоплазматические включения - тельца Гварниери. Вирусы герпеса и аденовирусы образуют внутриядерные включения.
Бляшки	Бляшки – ограниченные участки разрушенных вирусами клеток, культивируемых на питательной среде под агаровым или бентонитовым покрытием, которые выглядят как светлые пятна на фоне окрашенных живых клеток. Одна бляшка – это клетки, разрушенные потомством одного вируса.
Реакция гемагглютинации	Реакция гемагглютинации (РГА) основана на способности некоторых вирусов вызывать агглютинацию (склеивание) эритроцитов за счет вирусных гликопротеиновых шипов - гемагглютининов.
Реакция гемадсорбции	Реакция гемадсорбции - способность культур клеток, инфицированных гемагглютинирующими вирусами, адсорбировать на своей поверхности эритроциты.
Цветная проба	Цветная проба оценивается по изменению цвета индикатора в питательной среде клеток. Если вирусы не размножаются в культуре клеток, живые клетки в процессе метаболизма выделяют кислые продукты, что приводит к изменению рН среды, а соответственно и цвета индикатора. При репродукции вируса нормальный метаболизм клеток нарушается, в результате чего клетки погибают, а среда сохраняет свой первоначальный цвет.

2. Теоретические вопросы к занятию:

• Методы изучения вирусов, их оценка.

• Особенности взятия, обработки и транспортировки материала для вирусологических исследований.

• Методика подготовки вируссодержащего материала и техника инфицирования чувствительных к вирусам систем.

• Методы культивирования вирусов, их оценка.

• Реакции вирусной гемагглютинации и гемадсорбции. Механизм, практическое значение, использование, диагностическая ценность.

• Цитопатическое действие вирусов (ЦПД). Классификация ЦПД вирусов.

3. Практические задания, выполняемые на занятии:

1. Поставить реакцию гемагглютинации (РГА) с целью выявления вируса в аллантоисной жидкости куриного эмбриона, определить титр вируса.

2. Выявить вирусную репродукцию в клеточных культурах по цитопатогенному действию (ЦПД), бляшкообразованию, "цветной" пробе, реакции гемадсорбции.

3. Изучить различные виды ЦПД вирусов.

4. Содержание темы:

На практическом занятии студенты:

знакомятся с методами выявления вирусов в различных чувствительных системах (клеточных культурах, куриных эмбрионах, чувствительных лабораторных животных);

учатся выявлять вирус в культуре клеток по цитопатогенному действию;

изучают различные виды ЦПД в культуре клеток; знакомятся с методикой постановки реакций бляшкообразования под агаровым и бентонитовым покрытием;

изучают вирусные бляшки в культуре клеток под агаровым и бентонитовым покрытием;

осуществляют учет "цветной пробы", поставленной с целью индикации вирусов в культуре клеток;

осуществляют учет реакции гемадсорбции, поставленной с целью индикации вирусов в культуре клеток;

осуществляют учет реакции гемагглютинации, поставленной с целью индикации вирусов в хорион-аллантоисной жидкости куриного эмбриона.

Выполненные задания студенты записывают в протокол и подписывают его у преподавателя.