- •Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
- •1.1. Регистр больных как инструмент контроля и оптимизации фармакотерапии у больных муковисцидозом
- •1.1.2. Общая характеристика Сибирского Федерального округа. Численность пациентов с МВ по данным регистров 2011–2019 гг.
- •1.2. Антибактериальная терапия при муковисцидозе
- •1.2.1. Особенности антибактериальной терапии при муковисцидозе у детей и подростков
- •1.2.2. Препараты амоксициллина в терапии муковисцидоза
- •1.2.3. Ципрофлоксацин в терапии муковисцидоза
- •1.2.2. Фармакокинетика антибактериальных препаратов при муковисцидозе
- •1.2.5. Фармакогенетика антибактериальных препаратов
- •1.3. Муколитическая терапия при муковисцидозе
- •1.3.1. Особенности муколитической терапия. Обзор препаратов
- •1.3.2. Фармакокинетика дорназы альфа
- •Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
- •2.2. Объекты исследования фармакокинетики антибактериальных препаратов
- •2.4. Объекты исследования фармакокинетики муколитического препарата дорназы альфа
- •2.2. Методы исследования
- •2.3.1. Молекулярно-генетические исследования
- •2.2.2. Потовый тест
- •2.3.3. Оценка антропометрических данных
- •2.3.4. Исследование функции внешнего дыхания
- •2.3.5. Микробиологический метод
- •2.3.6. Фармакокинетические исследования
- •А. Определение концентрации антибактериальных препаратов
- •В. Выделение внеклеточной ДНК
- •2.4. Статистический анализ
- •2.4.1. Статическая обработка данных Регистра пациентов с МВ СФО
- •2.4.2. Статистический анализ результатов исследования фармакокинетики антибактериальных препаратов
- •2.4.3. Определение взаимосвязи между наличием определенных генотипов полиморфизмов генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков 1-й и 2-й фаз и фармакокинетическими параметрами АБП
- •2.4.4. Статистическая обработка данных исследования фармакокинетики дорназы альфа
- •2.5. Объём исследования
- •Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
- •3.1. Клинико-эпидемиологические характеристики больных муковисцидозом, проживающих на территории Сибирского федерального округа, по данным национального регистра 2017 года
- •3.2. Изучение фармакокинетики амоксициллина у детей и подростков, больных муковисцидозом
- •3.3. Изучение фармакокинетики ципрофлоксацина у детей и подростков, больных муковисцидозом
- •3.4. Изучение влияния генотипа ферментов биотрансформации ксенобиотиков 1-й и 2-й фаз на фармакокинетические параметры ципрофлоксацина у детей и подростков
- •3.3. Фармакокинетика муколитического препарата дорназа альфа
- •Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ
- •4.1. Фармакокинетика ципрофлоксацина и амоксициллина у больных муковисцидозом детского и подросткового возраста
- •4.2. Фармакогенетика ципрофлоксацина у больных муковисцидозом детского и подросткового возраста
- •4.4. Фармакокинетика муколитического препарата дорназа альфа у пациентов с муковисцидозом детского и подросткового возраста
- •Выводы
- •Практические рекомендации
- •СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
- •СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
68
олигонуклеотидом, содержащим на 5’-конце флуоресцентную группу (5(6)-
карбоксиродамин), а на 3’-конце тушитель флуоресценции (BHQ1, “Синтол”,
Москва, РФ). При эндонуклеазном гидролизе наблюдается увеличение флуоресценции красителя. Для калибровки использовали стандартный раствор ДНКазы 1. Калибровочная кривая связывает величину разгорания флуоресценции красителя с концентрацией ДНКазы 1 в растворе. Результат приводится в единицах ДНКазной активности (ед. акт.) 1 единица соответствует активности ДНКазы1, взятой в концентрации 1 нг/мл (1 час, 37 °С). Относительная стандартная ошибка метода – 5%» [293].
В. Выделение внеклеточной ДНК
Образцы крови собирали в вакутейнеры с гепарином, инкубировали при температуре окружающей среды в течение 30 мин, центрифугировали при
4000 об/мин, затем 2 мл и более плазмы переносили в пробирку и хранили при минус 18 °С – минус 20 °С до проведения анализа. «ВкДНК экстрагировали методом фенольной экстракцией. Концентрацию вкДНК измеряли методом флуоресценции с интеркалирующим красителем PicoGreen (Invitrogen).
Клетки удаляли из крови центрифугированием с последующим смешиванием 3 мл плазмы с 0,3 мл раствора, содержащего 1%-й
лауроилсаркозинат натрия, 0,02 М ЭДТА и 75 мкг/мл РНКазы А (Sigma-Aldrich;
Merck KGaA, Дармштадт, Германия), инкубация в течение 45 мин с воздействием протеиназы К (200 мкг/мл, Promega Corporation, Мэдисон, Висконсин, США) в
течение 24 часов при 37 °С.
После двух циклов очистки насыщенным раствором фенола фрагменты ДНК осаждали добавлением двух объемов этанола в присутствии 2М ацетата аммония. Затем осадок дважды промывали 75%-м этанолом, сушили и растворяли в воде. Концентрацию вкДНК определяли путем измерения интенсивности флуоресценции на 'LS 55' (PerkinElmer, Inc., Уолтем, Массачусетс, США) после окрашивания ДНК PicoGreen (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, Inc., Уолтем).
Относительная стандартная ошибка составила 10±4%» [294].
Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/