2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Mikrobiologia

Бактериофаги используют в диагностике инфекций при внутривидовой идентификации бактерий. Для этого применяют метод фаготипирования, основанный на строгой специфичности действия фагов: на чашку с плотной питательной средой, засеянной чистой культурой возбудителя, наносят капли различных диагностических типоспецифических фагов. Фаговар бактерии определяется тем типом фага, который вызвал ее лизис (образование пятна, «бляшки», или «негативной колонии», фага); Методику фаготипирования используют для выявления источника и путей распространения инфекции (эпидеми-

ологическое маркирование). Выделение бактерий одного фаговара от разных больных указывает на общий источник их заражения; По содержанию бактериофагов в объектах окружающей среды (например, в воде) можно судить о присутствии в них

соответствующих патогенных бактерий. Подобные исследования проводят при эпидемиологическом анализе вспышек инфекционных болезней; Фаги применяют также для лечения и профилактики ряда бактериальных инфекций. Производят брюшнотифозный,

сальмонеллезный, дизентерийный, синегнойный, стафилококковый, стрептококковый фаги и комбинированные препараты (колипротейный, пиобактериофаги и др). Бактериофаги назначают по показаниям перорально, парентерально или местно в виде жидких, таблети-рованных форм, свечей или аэрозолей.

Бактериофаги широко применяют в генной инженерии и биотехнологии в качестве векторов для получения рекомбинантных ДНК;

30-31.Методы культивирования облигатных внутриклеточных паразитов./Методы культивирования вирусов. Методы индикации и идентификации вирусов.

1.Методы культивирования вирусов:

–вирусы культивируют на 3-ех биологических моделях: в организме лабораторных животных, в развивающихся эмбрионах птиц и культурах клеток; 1.1.Опыты на лабораторных животных:

–их заражают исследуемым вируссодержащим материалом. Использование животных для культивирования вирусов в диагностических целях весьма ограничено из-за видовой невосприимчивости животных ко многим вирусам человека. О репродукции вирусов в организме животных судят по развитию у них видимых клинических проявлений заболевания, патологических изменениям органов и тканей, а также на основании реакции гемагглютинации (РГА) с суспензией из органов, содержащих вирусы. РГА основана н способности вирусов вызывать склеивание эритроцитов в результате взаимодействия вирусных белков с рецепторами эритроцитов; 1.2.Опыты на куриных эмбрионах:

–их заражают путем введения исследуемого материала в различные полости и ткани зародыша. Таким образом можно культивировать вирусы гриппа, герпеса, натуральной оспы и др. О репродукции вирусов в куриных эмбрионах свидетельствуют: специфические поражения оболочек и тела эмбриона; гибель эмбриона; положительная РГА с вируссодержащей жидкостью, полученной из полостей зараженного зародыша;

–многие вирусы не размножаются в эмбрионах птиц; почти неограниченные возможности для культивирования вирусов появились после открытия метода культур клеток; 1.3.Опыты на культурах клеток (тканей):

–часто применяют для культивирования вирусов. Клетки, полученные из различных органов и тканей размножают вне организма на искусственных питательных средах. При выращивании культур клеток необходимо выполнение ряда условий:

1.Соблюдение правил асептики;

2.Использование лабораторной посуды из нейтрального стекла; 3.Использование сложных питательных сред, содержащих минеральные соли, аминокислоты, витамины, глюкозу,

сыворотку крови животных или человека и буферные растворы, стабилизирующие рН; 4.Добавление антибиотиков к питательной среде для подавления роста посторонних микробов;

5.Соблюдение оптимальной температуры (36-38,5°С) роста клеток;

–о репродукции вирусов в культуре клеток, зараженных вируссодержащим материалом, можно судить на основании следующих феноменов: цитопатогенного действия вирусов, или цитопатического эффекта, образования внутриклеточных включений; образования «бляшек»; реакций гемадсорбции и гемагглютинации; «цветной» реакции; 1.3.1.Цитопатогенное действие (ЦПД):

–патологические изменения морфологии клеток, возникающие в результате репродукции вирусов. В зависимости от особенностей репродуцирующихся вирусов ЦПД может отличаться. В одних случаях быстро вакуолизируется цитоплазма, разрушаются митохондрии, округляются и гибнут клетки, а в других – формируются гигантские многоядерные клетки (так называемые симпласты), или наблюдается явление клеточной пролиферации, которое в итоге заканчивается деструкцией клеток. Таким образом, характер ЦПД позволяет использовать этот феномен для индикации вирусов и для их ориентировочной идентификации в культуре клеток;

2.Методы индикации и идентификации вирусов:

–выращенные вирусы определяют с помощью методов индикации и идентификации. Индикация вирусов, т.е. обнаружение факта их репродукции, основана на выявлении различных биологических свойств вирусов и особенностей их взаимодействия с чувствительными клетками. Идентификация (определение вида, типа) вирусов осуществляется в основном с помощью иммунологических реакций, основанных на взаимодействии антигенов вирусов и соответст-вующих им антител;

§4.ЭКОЛОГИЯ МИКРОБОВ. ВЛИЯНИЕ НА МИКРОБЫ ФАКТОРОВ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ. 32.Нормальная микрофлора организма человека и ее функции.

–человек заселен 1000 видами микробов, составляющими его нормальную микрофлору, в виде сообщества микробиоценоза. Микробы находятся в состоянии равновесия (эубиоза) друг с другом и организмом человека. Большинство из них являются комменсалами, не причиняющими вреда человеку;

–микрофлора колонизирует поверхность тела и полости, сообщающиеся с окружающей средой. В норме микробы отсутствуют в легких, матке и внутренних органах. Различают:

1.Постоянная микрофлора (резидентная, индигенная, или автохтонная):

–представлена микробами, постоянно присутствующими в организме; 2.Транзиторная микрофлора (непостоянная, или аллохтонная):

–не способна к длительному существованию в организме;

1.Кожа:

–на коже и в ее более глубоких слоях (волосяных мешочках, протоках сальных и потовых желез) анаэробов больше, чем аэробов;

–кожу колонизируют грам(+) бактерии (эпидермальные стафилококки, микрококки, стрептококки), некоторые грам(–) бактерии (рода Acinetobacter и др.) и дрожжеподобные грибы рода Malassezia;

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- -----------------------

2.Конъюнктивы:

–содержат небольшое количество коринеформных бактерий и стафилококков из-за действия лизоцима и других бактерицидных факторов слезной жидкости;

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- -----------------------

3.Верхние дыхательные пути:

–содержат коринеформные бактерии, гемофильные палочки, лактобактерии, стафилококки, стрептококки, пептококки, пептострептококки и др. Трахея, бронхи и альвеолы обычно стерильны;

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

4.Рот:

–ассоцианты микрофлоры и продукты их жизнедеятельности образуют зубной налет (бляшки). В 1 мл слюны обитает более 100 видов бактерий, чему способствуют остатки пищи во рту, благоприятная температура и щелочная реакция среды. Преобладают бактерии: бактероиды, превотеллы, порфиромонады, бифидобактерии, эубактерии, фузобактерии, лактобактерии, актиномицеты, гемофильные палочки, лептотрихии, нейссерии, стрептококки, стафилококки, пептококки, пептострептококки, вейлонеллы, спирохеты и др.;

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- -----------------------

5.Пищевод:

–практически не содержит микроорганизмы;

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- -----------------------

6.Желудок:

–содержит лактобациллы, дрожжи, единичные кокки и грамотрицательные бактерии;

–концентрация бактерий 100 клеток на 1 мл, т.к. желудочный сок имеет низкое значение рН, неблагоприятное для многих микробов;

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- -----------------------

7.Тонкая кишка:

–содержит 104 –107 микробов на 1 мл содержимого. Здесь обнаруживаются бифидобактерии, лактобактерии, клостридии, эубактерии, энтерококки, анаэробные кокки, порфиромонады, превотеллы;

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- -----------------------

8.Толстая кишка:

–содержит больше бактерий (1010–1012 на 1 г фекалий), чем тонкая кишка. Около 95% всех видов микробов составляют анаэробные бактерии. Основными представителями микрофлоры толстой кишки являются:

анаэробные грамположительные палочки (бифидобактерии, лактобациллы, эубактерии);

грамположительные спорообразующие анаэробные палочки (Clostridium perfringens и др.);

энтерококки;

анаэробные грамположительные и грамотрицательные кокки;

анаэробные грамотрицательные палочки (бактероиды, превотеллы, порфиромонады);

факультативно-анаэробные грамотрицательные палочки (кишечные палочки и сходные с ними бактерии);

метанококки и другие метанопродуцирующие археи (архебактерии);

на эпителии успешно растут спирохеты;

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- -----------------------

9.Мочеполовой тракт:

–почки, мочеточники, мочевой пузырь, матка, простата обычно стерильны. Микрофлора наружных гениталий представлена эпидермальными стафилококками, коринеформными бактериями, зеленящими стрептококками, сапрофитическими микобактериями (Mycobacterium smegmatis), кандидами и энтеробактериями;

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- -----------------------

10.Влагалище:

–включает лактобактерии, бифидобактерии, бактероиды, пропионибактерии, порфириномонады, превотеллы, пептострептококки, коринеформные бактерии и др.;

33.Дисбиозы. Дисбактериозы. Препараты для восстановления нормальной микрофлоры: пробиотики, пребиотики, синбиотики.

1.Дисбактериоз и дисбиоз:

–состояния, развивающиеся в результате утраты нормальных функций микрофлоры;

–проявляются из-за влияния внешних факторов, стрессовых воздействий, бесконтрольного применения антимикробных препаратов, лучевой терапии и химиотерапии, нерационального питания, оперативных вмешательств и т.д.; 1.1.При дисбактериозе:

–происходят количественные и качественные изменения бактерий, входящих в состав нормальной микрофлоры; 1.2.При дисбиозе:

–изменения происходят и среди других групп микроорганизмов (вирусов, грибов и др.);

–классифицируются по этиологии (грибковый, стафилококковый и др.) и по локализации (дисбиоз рта, кишки и т.д.);

Нарушения нормальной микрофлоры человека определяются следующим образом:

1.Выявление видового и количественного состава представителей микробиоценоза определенного биотопа (кишки, рта, кожи и т.д.) – путем высева из разведений исследуемого материала или путем отпечатков, смыва на соответствующие питательные среды:

среда Блаурокка – для бифидобактерий;

среда МРС-2 – для лактобактерий;

анаэробный кровяной агар – для бактероидов;

среда Левина или Эндо – для энтеробактерий;

желчно-кровяной агар – для энтерококков;

кровяной агар – для стрептококков и гемофилов;

мясопептонный агар с фурагином – для синегнойной палочки;

среда Сабуро – для грибов;

2.Определение в исследуемом материале микробных метаболитов – маркеров дисбиоза (жирных, гидроксижирных к-т, жирнокислотных альдегидов, ферментов и др.). Например, обнаружение в фекалиях β-аспартил-глицина и β-ас- партиллизина свидетельствует о нарушении кишечного микробиоценоза, т.к. в норме эти дипептиды метаболизируются кишечной анаэробной микрофлорой; *----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- --------------------*

2.Препараты для восстановления нормальной микрофлоры:

–для восстановления нормальной микрофлоры проводят селективную деконтаминацию и назначают per os (Пероральный приём лекарственных средств) различные препараты:

2.1.Пребиотики:

–в-ва немикробного происхождения или компоненты микробов, стимулирующие рост нормальной микрофлоры человека;

–основой служат низкомолекулярные углеводы (олигосахариды, фруктоолигосахариды), содержащиеся в грудном молоке и в некоторых пищевых продуктах; 2.2.Пробиотики (эубиотики):

–препараты, содержащие живые бактерии, представителей нормальной микрофлоры кишечника, оказывающие нормализирующее действие на организм человека и его микрофлору: бифидобактерии (бифидумбактерин), кишечные палочки (колибактерин), лактобактерии (лактобактерин) и др.; 2.3.Синбиотики:

–комбинированные препараты, состоящие из пробиотиков и пребиотиков; 2.4.Энтеросорбенты:

–препараты, удаляющие из кишечника токсичные метаболиты и условно-патогенные бактерии (активированный уголь, энтеросгель и др.);

34.Действие физических и химических факторов на микроорганизмы. Понятие о стерилизации, дезинфекции, асептике и антисептике. Методы дезинфекции.

1.Действие физических факторов:

1.1.Влияние температуры:

–представители различных групп микроорганизмов развиваются в определенных диапазонах температур. Бактерии, растущие при низкой температуре, называют психрофилами; при средней (около 37 °С) – мезофилами; при высокой

– термофилами;

А)Психрофилы:

–растут при температуре –10-40 °С;

–температурный оптимум колеблется 15-40 °С, приближаясь к температурному оптимуму мезофильных бактерий;

–относятся большая группа сапрофитов – обитателей почвы, морей, пресных водоемов и сточных вод (железобактерии, светящиеся бактерии, бациллы);

Б)Мезофилы:

–растут в диапазоне температур 10-47 °С, оптимум роста около 37 °С;

–включают в себя основную группу патогенных и условно-патогенных бактерий;

В)Термофилы:

–существуют при более высоких температурах (40-90 °С);

–обитают в горячих источниках, участвуют в процессах самонагревания навоза, зерна, сена; 1.2.Высушивание:

–обезвоживание вызывает нарушение функций большинства микроорганизмов;

–чувствительны к высушиванию возбудители гонореи, менингита, холеры, брюшного тифа, дизентерии и другие патогенные микроорганизмы; Более устойчивы микроорганизмы, защищенные слизью мокроты. Так, бактерии туберкулеза в мокроте выдержива-

ют высушивание до 90 дней. Устойчивы к высушиванию некоторые капсуло- и слизеобразующие бактерии. Особой устойчивостью обладают споры бактерий. Например, споры возбудителя сибирской язвы могут сохраняться в почве столетиями. Для продления жизнеспособности при консервировании микроорганизмов используют высушивание под вакуумом из замороженного состояния; 1.3.Действие излучения:

–ионизирующее излучение применяют для стерилизации одноразовой пластиковой микробиологической посуды, питательных сред, перевязочных материалов, лекарственных препаратов и др.;

2.Действие химических факторов:

–химические вещества могут оказывать различное действие на микроорганизмы: служить источниками питания; не оказывать какого-либо влияния; стимулировать или подавлять рост, вызывать гибель;

–антимикробные химические в-ва используются в качестве антисептических и дезинфицирующих средств, т.к. обладают бактерицидным, вирулицидным, фунгицидным действием и т.д. Химические в-ва, используемые для дезинфекции, относятся к различным группам, среди которых наиболее широко представлены Cl, I и Br–содержащие соединения;

3.Стерилизация:

–полное уничтожение микробов или полное их удаление (элиминация) из объекта;

–различают тепловую, химическую, лучевую стерилизацию и стерилизацию фильтрованием: 3.1.Тепловая стерилизация:

–основана на чувствительности микробов к высокой тем-ре. При 60°С вегетативные формы микробов погибают, а споры, содержащие воду и обладающие плотными оболочками, инактивируются при 160-170 °С;

–применяют в основном сухой жар и пар под давлением;

–производят в воздушных стерилизаторах при 180 °С – 60 мин; 160°С – 150 мин. Сухим жаром стерилизуют лабораторную посуду, инструменты, силиконовую резину и другие объекты, которые не теряют своих качеств при высокой температуре. Возможны и другие режимы: 180°С – 40 мин, 200 °С – 30 мин. Предметы, не выдерживающие подобной обработки, обеззараживают в паровых стерилизаторах; 3.2.Дробная стерилизация (тиндализация):

–проводится при нагревании объектов 70-80 °С в течение 30-60 мин для уничтожения вегетативных форм микробов. Процедуру повторяют три дня подряд, причем после каждого прогревания объект выдерживают в термостате для прорастания спор. Метод применяют для обработки материалов, не выдерживающих температуру выше 100 °С, например питательных сред с углеводами; 3.3.Химическая стерилизация:

–основана на использовании токсичных газов: оксида этилена, смеси ОБ (смеси оксида этилена и бромистого метила) и формальдегида. Эти вещества являются алкилирующими агентами, инактивирующими активные группы в ферментах, других белках, а также нуклеиновые кислоты, что приводит к гибели микроорганизмов; 3.4.Лучевая стерилизация:

–позволяет обрабатывать сразу большое кол-во предметов (например, одноразовых шприцев, инструментов, систем для переливания крови и т.д.);

–основана на использовании J-излучения (источник – радиоактивные изотопы) или ускоренных электронов. Гибель микробов под действием J-лучей и ускоренных электронов происходит в результате повреждения нуклеиновых кислот; 3.5.Стерилизация фильтрованием:

–осуществляется с помощью различных фильтров (нитроцеллюлозных, керамических, асбестовых, стеклянных);

4.Дезинфекция:

–уничтожение и удаление возбудителей инфекции (патогенов) из объектов окружающей среды. При дезинфекции погибает большая часть микробов, но споры бактерий могут остаться в жизнеспособном состоянии. Различают профилактическую дезинфекцию; текущую дезинфекцию; заключительную дезинфекцию;

–существуют три основных метода дезинфекции: тепловой, химический и УФ-облучение, выбор которых зависит от дезинфицируемого материала:

4.1.Тепловая дезинфекция:

–эффективно действие горячей воды и насыщенного пара$ 4.2.Ультрафиолетовое облучение (УФ-лучи с длиной волны 250–280 нм):

–осуществляется с помощью специальных бактерицидных ламп для обеззараживания воздуха, различных поверхностей в операционных, перевязочных, микробиологических лабораториях, предприятиях пищевой промышленности и т.д. УФ-лучи разрушают ДНК микробов в результате образования тиминовых димеров; 4.3.Химическая дезинфекция:

–проводится с помощью различных дезинфицирующих веществ, которые растворяют липиды мембран (детергенты) или разрушают белки и нуклеиновые кислоты (денатураты, оксиданты) микробов;

5.Асептика:

–предотвращение загрязнения объектов или ран микробами;

–направлена на предупреждение попадания возбудителя инфекции в рану, органы больного при операциях, лечебных и диагностических процедурах;

–предусматривает меры защиты от микробов путем сохранения стерильности перевязочного материала, операционного белья, перчаток, инструментов, материала для обработки раны, а также дезинфекцию рук врача, операционного поля, аппаратуры, операционной и других помещений, применение масок и специальной одежды

6.Антисептика:

– мероприятия, направленные на уничтожение микробов в патологическом очаге, ране или в другом объекте;

–включает различные методы или комплекс этих методов: механические (удаление инфицированных некротизированных тканей, инородных тел и т.д.); физические (дренирование ран, введение тампонов, наложение гигроскопических повязок); биологические (применение ферментов для лизиса нежизнеспособных клеток, бактериофагов и антибиотиков); химические, основанные на применении антимикробных веществ — антисептиков, которые резко снижают численность микробов в ране, на поверхности организма;

–по химическому составу различают следующие антисептики:

галогены – препараты I2 (спиртовой раствор йода, йодоформ, йодинол, йодопирин), Cl2 (хлорамины, хлориты);

окислители (H2O2, KMnO4, обладающие, как и галогены, окислительными свойствами);

кислоты и их соли (уксусная, борная, салициловая, тетраборат натрия)$

щелочи (аммиак и его соли, бура);

спирты (70-80% этанол и др.);

альдегиды (формальдегид, гексаметилен-тетрамин, E-пропиолактон);

детергенты (декамин, хлоргексидин. этоний и др.);

производные 8-оксихинолина (хинозол, интестопан, нитроксолин), 4-хинолона (оксолиновая кислота), хиноксалина (хиноксидин, диоксидин);

производные нитрофурана (фурацилин, фурагин, фуразолидон);

производные фенолов (резорцин, трикрезол, фенил-резорцин, фенилсалицилат), дегти (деготь березовый и др.);

красители (бриллиантовый зеленый, метиленовый синий, этакридина лактат);

соединения тяжелых металлов (дихлорид и оксицианид ртути, нитрат серебра, колларгол, протаргол, сульфат цинка, сульфат меди, окись цинка);

35.Методы стерилизации, аппаратура.

1.Стерилизация:

–полное уничтожение микробов или полное их удаление (элиминация) из объекта;

–различают тепловую, химическую, лучевую стерилизацию и стерилизацию фильтрованием: 1.1.Тепловая стерилизация:

–основана на чувствительности микробов к высокой тем-ре. При 60°С вегетативные формы микробов погибают, а споры, содержащие воду и обладающие плотными оболочками, инактивируются при 160-170 °С;

–применяют в основном сухой жар и пар под давлением;

–производят в воздушных стерилизаторах при 180 °С – 60 мин; 160°С – 150 мин. Сухим жаром стерилизуют лабораторную посуду, инструменты, силиконовую резину и другие объекты, которые не теряют своих качеств при высокой температуре. Возможны и другие режимы: 180°С – 40 мин, 200 °С – 30 мин. Предметы, не выдерживающие подобной обработки, обеззараживают в паровых стерилизаторах; 1.2.Дробная стерилизация (тиндализация):

–проводится при нагревании объектов 70-80 °С в течение 30-60 мин для уничтожения вегетативных форм микробов. Процедуру повторяют три дня подряд, причем после каждого прогревания объект выдерживают в термостате для прорастания спор. Метод применяют для обработки материалов, не выдерживающих температуру выше 100 °С, например питательных сред с углеводами; 1.3.Химическая стерилизация:

–основана на использовании токсичных газов: оксида этилена, смеси ОБ (смеси оксида этилена и бромистого метила) и формальдегида. Эти вещества являются алкилирующими агентами, инактивирующими активные группы в ферментах, других белках, а также нуклеиновые кислоты, что приводит к гибели микроорганизмов; 1.4.Лучевая стерилизация:

–позволяет обрабатывать сразу большое кол-во предметов (например, одноразовых шприцев, инструментов, систем для переливания крови и т.д.);

–основана на использовании J-излучения (источник – радиоактивные изотопы) или ускоренных электронов. Гибель микробов под действием J-лучей и ускоренных электронов происходит в результате повреждения нуклеиновых кислот;

1.5.Стерилизация фильтрованием:

–осуществляется с помощью различных фильтров (нитроцеллюлозных, керамических, асбестовых, стеклянных); В настоящее время все более широкое применение находят современные методы стерилизации, созданные на основе новых технологий, с использованием плазмы, озона;

36.Понятие о санитарно-показательных микроорганизмах.

1.Понятие о санитарно-показательных микроорганизмах:

–к санитарно-показательным микроорганизмам (СПМ) относят представителей облигатной микрофлоры организма человека и теплокровных животных, обитающих в кишечнике или в дыхательных путях;

–для того, чтобы микроорганизм мог рассматриваться как СПМ он должен соответствовать ряду свойств: 1.1.Микроорганизм должен постоянно обитать в естественных полостях человека и животных и постоянно выделяться во внешнюю среду в количествах, относительно редко подвергающихся колебаниям;

1.2.Микроорганизм не должен размножаться во внешней среде (за исключением пищевых продуктов) или размножаться незначительно и короткое время. Это одно из самых важных свойств СПМ;

1.3.Длительность сохранения жизнеспособности СПМ во внешней среде должна несколько превосходить по времени длительность выживания в той же среде патогенных микробов, выделяемых из организма теми же путями;

1.4.Устойчивость СПМ к естественным и искусственным воздействиям должна быть не ниже, а по возможности несколько выше устойчивости соответствующих патогеннных микроорганизмов;

1.5.У микроорганизма не должно быть аналогов-сапрофитов во внешней среде, сходство с которыми потребовало бы сложных или длительных по времени приемов дифференциальной диагностики;

1.6.Микроорганизм не должен значительно изменять свои биологические свойства в окружающей среде;

1.7.Методы обнаружения, идентификации и количественного учета должны быть современными, простыми и легко доступными;

–присутствие таких микроорганизмов в исследуемом водном объекте будет свидетельствовать и о присутствии в нем выделений человека и животных, а кол-во обнаруженных СПМ будет прямо пропорционально степени такого биогенного загрязнения;

–самым первым микроорганизмом, предложенным в качестве санитарно-показательного, была Escherichia coli (кишечная палочка). Она и сейчас сохраняет ведущие позиции как показатель фекального загрязнения. В последующем список санитарно-показательных микроорганизмов расширялся, в него были включены фекальные стрептококки (энтерококки), споры сульфитредуцирующих клостридий, протеи, термофильные микроорганизмы, колифаги (вирусы бактерий) и ряд других. Таким образом, обнаружение СПМ и некоторых патогенных микроорганизмов в пробе исследуемого водного объекта и определение их количества лежит в основе определения санитарного показателя;

37.Микрофлора воды, цели и методы ее исследования.

*Бактерии группы кишечной палочки – БГКП*;

1.Загрязненность воды:

–определяется по общей микробной обсемененности и обнаружению санитарно-показательных микроорганизмов — индикаторов наличия выделений человека или животных. В воде регистрируют кишечную палочку, БГКП (колиформные палочки), энтерококк, стафилококки;

–на основании количественного выявления этих санитарно-показательных бактерий вычисляются индекс БГКП (число БГКП в 1 л воды), перфрингенс-титр, титр энтерококка и т.д. Так, например, титр энтерококка воды – это наименьшее кол-во воды, в котором определяется энтерококк;

2.К бактериям группы кишечной палочки:

–относят грам(–) палочки, сбраживающие с образованием кислоты и газа лактозу или глюкозу при температуре 37°С в течение 24-48 ч и не обладающие оксидазной активностью. Наиболее часто этот показатель применяют как индикатор фекального загрязнения воды. Другой сходный показатель фекального загрязнения – общие колиформные бактерии: грамотрицательные, оксидаза-отрицательные палочки;

–при бактериальном загрязнении воды свыше допустимых норм следует провести дополнительное исследование на наличие бактерий — показателей свежего фекального загрязнения. К таким бактериям относят термотолерантные колиформные бактерии, фекальные кишечные палочки, ферментирующие лактозу до к-ты и газа при температуре 44 °С в течение 24 часов и не растущие на нитратной среде. О свежем фекальном загрязнении свидетельствует также выявление энтерококка. На давнее фекальное загрязнение указывают отсутствие БГКП и наличие определенного количества клостридш перфрингенс, т. е. наиболее устойчивых споро-образующих бактерий; В соответствии с нормативными документами регламентируются следующие нормативы микробиологических показателей питьевой воды при централизованном водоснабжении:

1.Общее микробное число воды не должно превышать 100 микробов в 1 мл исследуемой воды; 2.Общие колиформные бактерии должны отсутствовать в 100 мл исследуемой воды; 3.Термотолерантные колиформные бактерии должны отсутстовать в 100 мл исследуемой воды;

4.Колифаги не должны определяться в 100 мл исследуемой воды (учет по бляшкооб-разующим единицам); 5.Споры сульфитредуцирующих клостридий не должны определяться в 20 мл исследуемой воды; 6.Цисты лямблий не должны определяться в 50 мл исследуемой воды.

Кроме того, загрязненность воды оценивается по обнаружению патогенных микробов с фекально-оральным механизмом передачи (энтеровирусы, энтеробактерии, холерные вибрионы и др.);

38.Микрофлора воздуха и методы ее исследования.

1.Микробиологический контроль воздуха:

–осуществляется с помощью методов естественной или принудительной седиментации микробов: 1.1.Естественная седиментация (по методу Коха):

–проводится в течение 5-10 мин путем осаждения микробов на поверхность твёрдой пит-ной среды в чашке Петри; 1.2.Принудительная седиментация:

–осуществляется посевом проб воздуха на питательные среды с помощью специальных приборов (импакторов, импинджеров, фильтров);

А)Импакторы:

–приборы для принудительного осаждения микробов из воздуха на поверхность питательной среды (прибор Кротова, пробоотборник аэрозоля бактериологический и др.);

Б)Импинджеры:

–приборы, с помощью которых воздух проходит через жидкую питательную среду или изотонический р-р NaCl;

–санитарно-гигиеническое состояние воздуха определяется по следующим микробиологическим показателям: 1.Общее количество микроорганизмов в 1 м3 воздуха:

–общее микробное число, или обсемененность воздуха – кол-во колоний микроорганизмов, выросших при посеве воздуха на питательном агаре в чашке Петри в течение 24 ч при 37 °С, выраженное в КОЕ; 2.Индекс санитарно-показательных микробов:

–количество золотистого стафилококка и гемолитических стрептококков в 1 м3 воздуха. Эти бактерии являются представителями микрофлоры верхних дыхательных путей и имеют общий путь выделения с патогенными микроорганизмами, передающимися воздушно-капельным путем;

–появление в воздухе спорообразующих бактерий – показатель загрязненности воздуха микроорганизмами почвы, а появление грам(–) бактерий – показатель возможного антисанитарного состояния. Для оценки воздуха лечебных учреждений можно использовать данные из нормативных документов;

§5.ГЕНЕТИКА БАКТЕРИЙ. ОСНОВЫ БИОТЕХНОЛОГИИ.

39.Строение генома бактерий. Понятие о генотипе и фенотипе. Виды изменчивости. Подвижные генетические элементы, их роль в эволюции бактерий.

1.Строение генома бактерий:

–наследственная информация хранится у бактерий в форме последовательности нуклеотидов ДНК, которые определяют последовательность АМК-т в белке. Каждому белку соответствует свой ген, т.е. участок на ДНК, отличающийся числом и специфичностью последовательности нуклеотидов. Совокупность всех генов бактерий называется геномом. Бактериальный геном состоит из генетических элементов, способных к самостоятельной репликации (воспроизведению), т.е. репликонов – хромосома и плазмиды; 1.1.Бактериальная хромосома:

–состоит из одной двухцепочечной молекулы ДНК, которая может быть кольцевой и линейной формы. Некоторые бактерии, в частности бруцеллы, имеют по две хромосомы. Бактериальная хромосома обладает гаплоидным набором генов, кодирующих жизненно важные для бактериальной клетки функции. Она формирует компактный нуклеоид бактериальной клетки; 1.2.Плазмиды:

–представляют собой двухцепочечные молекулы ДНК. Они могут быть кольцевой формой и линейными;

–кодируют не основные для жизнедеятельности бактериальной клетки ф-и, но придающие бактерии преимущества при попадании в неблагоприятные условия существования. Среди фенотипических признаков, сообщаемых бактериальной клетке плазмидами, можно выделить следующие:

устойчивость к антибиотикам;

продукцию факторов патогенности;

способность к синтезу антибиотических веществ;

образование колицинов;

расщепление сложных органических веществ;

образование ферментов рестрикции и модификации; 1.2.1.Виды плазмидов:

А)Интегративные (Эписоны):

–некоторые плазмиды могут обратимо встраиваться в бактериальную хромосому и функционировать в виде единого репликона;

Б)Трансмиссивные:

–ряд бактериальных плазмид способны передаваться из одной клетки в другую, иногда даже принадлежащую иной таксономической единице;

–трансмиссивность присуща лишь крупным плазмидам, имеющим tra-оперон, в который объединены гены, ответственные за перенос плазмиды. Эти гены кодируют половые пили, которые образуют мостик с клеткой, не содержащей трансмиссивную плазмиду, по которой плазмидная ДНК передается в новую клетку. Этот процесс называется конъюгацией.

В)Мобилизуемые:

–мелкие плазмиды, не несущие tra-гены, не могут передаваться сами по себе, но способны к передаче при наличии трансмиссивных плазмид, используя их аппарат конъюгации называются мобилизуемыми, а сам процесс – мобилизацией нетрансмиссивной плазмиды;

Г)R-плазмиды (от англ. resistance – противодействие):

–содержат гены, детерминирующие синтез ферментов, разрушающих антибактериальные препараты (антибиотики);

–имеют особое значение в медицинской микробиологии т.к. обеспечивают устойчивость бактерий к антибиотикам;

Е)Патогенные плазмиды: