2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Mikrobiologia

–к достоинствам этого метода можно отнести возможность культивирования некоторых микробов, для которых не удалось подобрать питательной среды (возбудители лепры, сифилиса и др.) и высокую чувствительность, а к недостаткам – невосприимчивость животных к большинству возбудителей антропонозных инфекций, высокую стоимость и необходимость содержания вивария;

5.Аллергологический метод:

–используют в качестве вспомогательного при небольшой группе инфекционных заболеваний. Присутствие в организме возбудителя заболевания или вакцинного штамма приводит к сенсибилизации организма и развитию ГЗТ (реакции IV типа по Джеллу и Кумбсу), которую можно выявить постановкой кожно-аллергической пробы с соответствующим аллергеном;

–пример:внутрикожные пробы с туберкулином (туберкулез, проба Манту), бруцеллином (бруцеллез, проба Бюрне), тулярином (туляремия), токсоплазмином (токсоплазмоз), малеином (сап), антраксином (сибирская язва), пестином (чума), орнитином (орнитоз) и др.;

–инфекционные диагностические аллергены чаще всего вводят внутрикожно в среднюю треть сгибательной поверхности предплечья, реже накожно путем втирания в царапины (скарификационная проба). Через 48-72 ч учитывают наличие и размер инфильтрата (папулы);

–аллергия к условно-патогенным и непатогенным микробам является важным звеном в патогенезе хронических болезней дыхательных путей, почек, печени, ЖКТ, кожи, суставов. Для установления вида этих аллергизующих микроорганизмов применяют постановку кожных проб;

159.Методы экспресс-диагностики инфекционных болезней.

1.Микроскопический метод:

–материал, полученный от больного, исследуют под микроскопом. При этом возможно использование различных микроскопических техник: световой, фа зово-контрастной, темнопольной, люминесцентной и электронной. Световая микроскопия применяется наиболее часто. С помощью микроскопического метода можно определить морфологические признаки возбудителей, а также установить факт наличия или отсутствия микроорганизмов в изучаемых образцах;

–к достоинствам можно отнести простоту, экономичность и быстроту (получение результата в тот же день). Ложноположительные или ложноотрицательные результаты микроскопического метода могут быть связаны с субъективностью оценки результатов и низкой концентрацией возбудителя в клиническом материале;

2.Бактериоскопический метод:

–при микроскопии бактерий их окрашивают и изучают морфологические и тинкториальные св-ва. При этом определяют форму, размер и взаимное расположение бактериальных клеток (например, кокки могут располагаться цепочками (стрептококки), в виде виноградной грозди (стафилококки), парами (диплококки) и др.). Используя различные методы окраски, выявляют тинкториальные особенности и отдельные структуры бактериальной клетки (при окраске по Граму – св-ва клеточных стенок, по Бурри-Гинсу – наличие капсулы, по Ауески – споры, при серебрении по Морозову и окраске по Леффлеру – жгутики, по Нейссеру – зерна волютина и др.);

–использование метода возможно только при высокой концентрации микробов в исследуемом материале (чувствительность метода – более 1.000-100.000 клеток/мл). К тому же в связи с тем, что многие бактерии имеют сходную морфологию и тинкториальные св-ва, метод не позволяет точно идентифицировать возбудитель и в большинстве случаев его результат носит лишь ориентировочный характер;

–данный метод обладает диагностической значимостью лишь в том случае, если бактерия имеет специфические морфологические особенности и вызывает появление характерной клинической картины. Его можно использовать для диагностики туберкулеза (обнаружение кислотоустойчивых палочек), гонореи (присутствие в мазках гноя диплококков в цитоплазме нейтрофилов), ранней диагностики лептоспироза (микроскопия крови или осадка мочи в темном поле и выявление извитых микробов) и др. Специфичность метода всего 20-80%;

3.Вирусоскопический метод:

–при микроскопии вирусов чаще используют электронный микроскоп. Световая микроскопия из-за малых размеров вирусов практически не применяется. Она может быть использована лишь для обнаружения крупных вирусов, размер которых превышает 200 нм, применяя окраску серебрением по Морозову (вирус натуральной оспы). С помощью светового микроскопа можно выявить цитопатическое действие вируса и внутриклеточные включения, образующиеся в пораженных клетках при некоторых вирусных инфекциях;

4.Паразитоскопический метод:

–микроскопический метод наиболее эффективен при паразитарных заболеваниях. Простейшие и гельминты имеют крупное строение и обладают характерными морфологическими особенностями, на основании которых может быть поставлен точный диагноз;

–микроскопическое исследование патологического материала заключается в приготовлении нативных препаратов и мазков, окрашенных по методу Романовского–Гимзы;

5.Микроскопия грибов:

–грибы микроскопируют как в нативном, так и в окрашенном состоянии. Довольно часто при микозах используют гистологический метод, заключающийся в обнаружении элементов гриба (гифы, споры и т.п.) в органах и тканях, пораженных грибами;

6.Биологический метод:

–основан на заражении исследуемым материалом чувствительных лабораторных животных (мышей, крыс, морских свинок, кроликов и др.). Материал можно вводить перорально, в дыхательные пути, внутрибрюшинно, внутривенно, внутримышечно, внутрикожно и подкожно, в переднюю камеру глаза, через трепанационное отверстие черепа, субокципитально (в большую цистерну головного мозга). Выбор животного и способ введения зависит от био-особен- ностей возбудителя;

–метод используют для выделения возбудителя, определения вирулентности микроорганизмов, типа токсина, воспроизведения клинической картины заболевания, изучения иммунного ответа, активности антимикробных и биологических препаратов;

–к достоинствам этого метода можно отнести возможность культивирования некоторых микробов, для которых не удалось подобрать питательной среды (возбудители лепры, сифилиса и др.) и высокую чувствительность, а к недостаткам – невосприимчивость животных к большинству возбудителей антропонозных инфекций, высокую стоимость и необходимость содержания вивария;

7.Серологический метод:

–заключается в определении титров специфических антител или антигенов в сыворотке крови. Для этого используют реакцию агглютинации (РА), реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА), реакцию торможения гемагтлютинации (РТГА), реакцию связывания комплемента (РСК), реакцию нейтрализации (РН), реакцию преципитации (РП), радиоиммунный анализ (РИА), иммуноферментный анализ (ИФА) и другие реакции иммунитета;

–при выявлении антител определяют нарастание их титра, для этого исследуют парные сыворотки. Первую сыворотку берут у больного в острый период в начале болезни, а вторую – через 10-14 дней. Сыворотки исследуют одномоментно. О болезни свидетельствует сероконверсия, т.е. нарастание титра антител во второй сыворотке по отношению к первой в 4 раза и выше;

8.Аллергологический метод:

–используют в качестве вспомогательного при небольшой группе инфекционных заболеваний. Присутствие в организме возбудителя заболевания или вакцинного штамма приводит к сенсибилизации организма и развитию ГЗТ (реакции IV типа по Джеллу и Кумбсу), которую можно выявить постановкой кожно-аллергической пробы с соответствующим аллергеном;

–пример:внутрикожные пробы с туберкулином (туберкулез, проба Манту), бруцеллином (бруцеллез, проба Бюрне), тулярином (туляремия), токсоплазмином (токсоплазмоз), малеином (сап), антраксином (сибирская язва), пестином (чума), орнитином (орнитоз) и др.;

–инфекционные диагностические аллергены чаще всего вводят внутрикожно в среднюю треть сгибательной поверхности предплечья, реже накожно путем втирания в царапины (скарификационная проба). Через 48-72 ч учитывают наличие и размер инфильтрата (папулы);

–аллергия к условно-патогенным и непатогенным микробам является важным звеном в патогенезе хронических болезней дыхательных путей, почек, печени, ЖКТ, кожи, суставов. Для установления вида этих аллергизующих микроорганизмов применяют постановку кожных проб;

9.Молекулярно-генетический метод:

–базируется на выявлении специфичных нуклеотидных последовательностей ДНК и РНК возбудителей непосредственно в патологическом материале. К молекулярно-генетическим методам относят: полимеразную цепную реакцию (ПЦР), обратно транскриптазную полимеразную цепную реакцию (ОТ-ПЦР), рестрикционный анализ, секвенирование, саузерн-блоттинг, определение плазмидного профиля и др.;

–наиболее часто применяется ПЦР. С помощью этого метода находят небольшой фрагмент ДНК (мишень), строго специфичный для конкретного возбудителя;

–позволяет выявлять некультивируемые формы патогенов;

10.Физико-химические методы:

–относятся газожидкостная хроматография и лазерная флюоресценция: 10.1.Газожидкостная хроматография:

–используется для экспресс-диагностики анаэробной инфекции;

–основана на хроматографическом определении в исследуемом материале специфических продуктов метаболизма анаэробов – летучих жирных к-т, служащих метаболическими маркерами наличия анаэробов; 10.2.Лазерно-флюоресцентный экспресс-метод:

–используется для диагностики и прогнозирования эффективности лечения у больных с гнойно-воспалительными заболеваниями, дисбиозами, кариесом, пародонтитом и другой патологией микробной природы;

–основан на регистрации флюоресценции материала при возбуждении его лазерным излучением. На исследуемый материал направляют пучок лазера и анализируют спектр аутофлюоресценции. Большинство микробов и продуктов их жизнедеятельности имеет свой спектр свечения, расшифровав который можно идентифицировать микроб. Специфичность метода низкая;

160.Особенности противовирусного, противобактериального, противогрибкового, противоопухолевого, трансплантационного иммунитета.

1.Противовирусный иммунитет:

1.1.Вступление:

–первым барьером, с которым сталкиваются вирусы – кожные покровы и слизистые оболочки организма. В случае нарушения их целостности активируются механизмы врожденного иммунитета. На этом этапе инфекции вирусу противостоят секреторные компоненты врожденного иммунитета, в частности компоненты системы комплемента и антимикробные пептиды (D-дефенсины ингибируют репродукцию некоторых вирусов, а кателицидин и другие разрушают оболочки вирусов);

–если вирусы проникли в клетки, происходит выработка инфицированными клетками интерферонов первого типа (IFN-α и IFN-β). Гибель инфицированных клеток сопровождается выделением эффекторных молекул (цитокинов, медиаторов воспаления), хемокинов и антигенов, вызывающих миграцию в очаг первичной инфекции клеток врожденного иммунитета;

–первыми мигрируют нейтрофилы, далее – макрофаги, дендритные клетки, NK-клетки. Особое значение для сдерживания вирусов (в первые дни после заражения) имеет вируцидная ф-я NK-клеток и активированных макрофагов. Интерфероны усиливают противовирусную резистентность, индуцируя в клетках синтез ферментов, подавляющих образование НК-т и белков вирусов. Кроме этого, интерфероны оказывают иммуномодулирующее действие, усиливают в клетках экспрессию антигенов MHC (HLA);

–важными участниками являются дендритные клетки, способные продуцировать при вирусной инфекции большое кол-во интерферонов первого типа. Интерфероны первого типа действуют неизбирательно, блокируя синтез не только вирусных, но и клеточных РНК и белков, что способствует гибели зараженной клетки. Интерферон второго типа (IFN-γ) активирует NK-клетки, макрофаги и ЦТЛ, способствуя более эффективному уничтожению вирусинфицированных клеток и запуская микробоцидные механизмы макрофагов, вызывающие гибель внутриклеточных патогенов;

–если компоненты врожденного иммунитета не справляются с вирусной инфекцией, то происходит развитие клеточного и гуморального звеньев адаптивного иммунитета (появление ЦТЛ и противовирусных антител). 1.2.Механизмы противовирусной защиты:

–включают цитотоксическое действие CD8+ Т-лимфоцитов (ЦТЛ), распознающих вирусные пептиды в комплексе с MHC I класса на поверхности инфицированных вирусом клеток. ЦТЛ представляют собой основные клетки для осуществления в организме противовирусного иммунологического надзора. При большинстве вирусных инфекций специфические ЦТЛ появляются через 3-4 дня после инфицирования, а пик их кол-ва наблюдается к 7-10-му дню. ЦТЛ скапливаются в очагах размножения вирусов и разрушают инфицированные клетки. В месте взаимодействия с клеткой-мишенью, посредством экзоцитоза продуцируются перфорины и гранзимы. Перфорины на поверхности клетки-мишени формируют поры, через которые в клетку устремляется вода, в результате чего клетка гипергидратируется и гибнет. Через образовавшиеся поры в клетку-мишень также поступают гранзимы, вызывающие фрагментацию ДНК клетки и деградацию вирусной ДНК; 1.3.Защитные механизмы вирусов:

–развитие вирусной инфекции сопряжено с подавлением защитных механизмов. Так, иногда макрофаги становятся клетками, в которых происходит размножение вирусов и их распространение по организму. Многие вирусы способны ингибировать факторы защиты организма. Например, вирус простого герпеса ингибирует презентацию собственных антигенов на инфицированных клетках. Аденовирусы в борьбе с защитными силами организма используют молекулярные механизмы подавления экспрессии молекул MHC I класса на поверхности инфицированных клеток;

–ряд вирусов могут подавлять систему комплемента. Так, вирус коровьей оспы секретирует белки, соединяющиеся с С4b-компонентом комплемента, ингибируя классический путь активации комплемента; вирус простого герпеса содержит гликопротеин,соединяющийся с С3b-компонентом комплемента, ингибируя классический и альтернативный пути активации комплемента;

–многие вирусы избегают иммунной атаки в результате высокой антигенной изменчивости (результат мутаций), что присуще вирусам гриппа, риновирусам и ВИЧ;

–вирусы могут уклоняться от иммунных механизмов путем встраивания своего генома в геном клетки-хозяина, без экспрессии на поверхности инфицированных клеток своих антигенов. Это делает вирус иммунологически невидимым и позволяет ему персистировать в организме. Вирусы гепатита В, герпес-вирусы могут находиться в латентном состоянии годы и только при определенных ситуациях вызывать соответствующую симптоматику;

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- -----------------------

2.Противобактериальный иммунитет:

2.1.Общие сведения:

–при бактериальной инфекции возбудители проникают через кожу или через слизистые оболочки и распознаются сигнальными рецепторами (TLR, NOD1, NOD2 и др.) врожденного иммунитета, в результате чего вырабатываются эффекторные молекулы (провоспалительные цитокины, хемокины);

–антимикробные пептиды (лизоцим, дефенсины, кателицидин) разрушают оболочку бактерий. Фагоциты перемещаются к объекту фагоцитоза, реагируя на хемоаттрактанты: в-ва микробов, активированные компоненты комплемента (С5a, C3a) и цитокины;

2.2.Глобальная инфекция:

–если данных механизмов недостаточно, то бактериальные клетки проникают в кровоток, что может вызвать генерализацию инфекции. Основное значение в противобактериальном иммунитете имеет гуморальное звено адаптивного иммунитета (выработка антител плазматическими клетками);

–антитела, образующиеся против бактериальных экзотоксинов, нейтрализуют их, препятствуя повреждению тканей. Они связывают бактериальные клетки и посредством фагоцитов (макрофагов, нейтрофилов) или системы комплемента приводят к разрушению патогена и его элиминации из организма;

2.2.1.Механизм:

–секреторные IgA, взаимодействуя с бактериями, препятствуют их адгезии на эпителиоцитах. Антитела и комплемент (С3b, iС3b) обволакивают бактерии и «приклеивают» их к Fc-, СR1-, CR3-, CR4-рецепторам фагоцитов, исполняя роль опсонинов вместе с другими белками, усиливающими фагоцитоз (C-реактивным белком, маннозосвязывающим лектином и др.);

–дефект синтеза антител, особенно IgG1, IgG3, а также С3-компонента комплемента и нарушение фагоцитоза значительно снижают антибактериальный эффект. Фагоциты уничтожают бактерии с помощью активных форм кислорода, NO, катионных антимикробных пептидов (включая дефенсины) и других механизмов;

–внутриклеточные возбудители (микобактерии туберкулеза, лепры и др.) могут выживать в фагоцитах с недостаточной антибактериальной активностью. Тогда включается механизм клеточного иммунитета с активацией TH1, ЦТЛ и макрофагов. Бактерии способны игнорировать механизмы иммунитета, что приводит к хронизации процесса;

--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- -------------------------

3.Противогрибковый иммунитет:

–грибы имеют многослойную, толстую клеточную стенку, состоящую из нескольких типов полисахаридов (глюканов, целлюлозы, хитина), а также белка и липидов. Эти структуры распознают клеточные рецепторы (TLR2, TLR4, дектин-1 и др.) врожденного иммунитета, в котором большое значение имеют также барьерные ф-и кожи, слизистых оболочек и их секреты (секреты сальных и потовых желез, антимикробные пептиды), нормальная микрофлора, вступающая в конкурентные взаимоотношения с грибами, и др.; 3.1.Механизмы, ответственные за защиту от грибковых инфекций:

–связаны с Т-клеточным иммунитетом. Антитела (IgM, IgG) при микозах имеют меньшее значение, чем клеточный иммунитет. В тканях происходит фагоцитоз, развивается эпителиоидная гранулематозная реакция, иногда тромбоз кровеносных сосудов. Микозы, особенно оппортунистические, часто манифестируют после длительной антибактериальной терапии и при иммунодефицитах. Они сопровождаются ГЗТ. Возможно развитие аллергических заболеваний после сенсибилизации фрагментами условно-патогенных грибов родов Aspergillus, Penicillium, Mucor, Fusarium и др. В этом случае выявляются IgE-антитела против антигенов грибов. У больных диагностируют ГЗТ и ГНТ с помощью кожных проб на аллергены;

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- -----------------------

4.Противоопухолевый иммунитет:

–особенностью противоопухолевого иммунитета является низкая иммуногенность раковых клеток, их слабые антигенные отличия от нормальных клеток;

–опухольассоциированные антигены представлены раково-эмбриональными антигенами, продуктами онкогенов, особыми вирусными антигенами, гиперпродуцируемыми нормальными белками; 4.1.Механизм:

–угнетают противоопухолевый иммунитет TH2, стимулированные опухольассоциированными антигенпредставляющими клетками, и миелоидными клетками-супрессорами;

–увеличение и активация регуляторных T-лимфоцитов (TReg) среди опухольинфильтрующих лимфоцитов (TIL – tu- mor-infiltrating lymphocytes) также угнетает противоопухолевый иммунитет. Вместе эти типы клеток генерируют в опухолевое окружение такие иммуносупрессорные цитокины, как трансформирующий фактор роста-E (ТФР-E), интерлейкины (IL-10) и др.;

–антитела, соединяясь с антигенными детерминантами на опухолевых клетках, экранируют их от цитопатогенного действия иммунных лимфоцитов. Основную роль в противоопухолевом иммунитете играют компоненты клеточного иммунитета (активированные макрофаги, ЦТЛ, NK- и NKT-клетки);

–опухолевый антиген распознается антигенпредставляющими клетками (дендритными клетками и макрофагами) и через TH1 представляется наивным CD8+ T-лимфоцитам, дифференцирующиеся в иммунные цитотоксические CD8+ T-лимфоциты, разрушающие опухолевую клетку-мишень;

–однако механизм представления антигена часто нарушается, нет достаточного уровня ФНО, интерферонов, IL-2 и других цитокинов. Опухоли запускают феномен «ускользания» от иммунитета. Уменьшение экспрессия MHC на опухолевых клетках ведет к отмене распознавания опухоли;

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- -----------------------

5.Трасплантационный иммунитет:

–после пересадки органов или тканей (почки, сердце, печень) развивается иммунный ответ организма хозяина на трансплантат, вплоть до его отторжения (реакция отторжения трансплантата – «хозяин против трансплантата»);

–в случае трансплантации иммунокомпетентных тканей (костный мозг, стволовые клетки крови) развивается как реакция «хозяин против трансплантата», так и реакция «трансплантант против хозяина» (лимфоциты донора атакуют ткани реципиента). Реакцию отторжения можно избежать или уменьшить подбором трансплантата к тканям реципиента по антигенам гистосовместимости – HLA, поэтому их называют трансплантационными антигенами; 5.1.Типы отторжения:

–сверхострое отторжение развивается на 1-5-е сутки после трансплантации органа (например, печени). Обусловлено наличием антител, появившихся в результате переливания крови или беременности;

–острое отторжение трансплантата развивается в интервале от 5 до 30 дней, а хроническое отторжение – через 6 месяцев и более. Острое и хронической отторжение трансплантата происходят в результате активации клеточного иммунитета: CD8+ цитотоксические T-лимфоциты, узнавая несвойственные им антигены трансплантата, атакуют его. В отторжении участвуют и NK-клетки. Активированные TH2 участвуют в развитии гуморального иммунитета, стимулируя B-лимфоциты к антителообразованию. Оставшиеся в пересаженном органе «лейкоциты-пассажиры» могут в качестве антигенпредставляющих клеток стимулировать CD4+ T-хелперы и CD8+ T-лимфоциты реципиента. Таким образом, T-лимфоциты реципиента распознают антигены трансплантата, представляемые донорскими АПК (антигенпредставляющая клетка);

–кроме прямого распознавания антигенов трансплантата, существует непрямое распознавание. Непрямое распознавание антигенов трансплантата осуществляют антигенпредставляющие клетки реципиента, представляющие T-лим- фоцитам антигены трансплантата в комплексе с собственными молекулами MHC;

5.2.Преодоление реакции «хозяин против трансплантата» и наоборот:

–типирование донора и реципиента по MHC осуществляют с помощью микроцитотоксического теста с B-лимфоци- тами, сыворотками и комплементом, а также ДНК-типированием на основе ПЦР. Для предупреждения и лечения кризиса отторжения применяют: азатиоприн – антиметаболит синтеза белка, подавляющий индукцию ЦТЛ; кортикостероиды (преднизолон и др.), угнетающие макрофаги, T-лимфоциты, синтез цитокинов и комплемента; циклоспорин А, подавляющий синтез IL-2 T-хелперами. Для блокирования активации T-лимфоцитов применяют гуманизированные моноклональные антитела (даклизумаб и базиликсимаб) к рецептору IL-2 (CD25);

161.Методы микробиологической диагностики вирусных инфекций (вирусологический, серологический). 1.Вирусоскопический метод:

–при микроскопии вирусов чаще используют электронный микроскоп. Световая микроскопия из-за малых размеров вирусов практически не применяется. Она может быть использована лишь для обнаружения крупных вирусов, размер которых превышает 200 нм, применяя окраску серебрением по Морозову (вирус натуральной оспы). С помощью светового микроскопа можно выявить цитопатическое действие вируса и внутриклеточные включения, образующиеся в пораженных клетках при некоторых вирусных инфекциях;

2.Серологический метод:

–заключается в определении титров специфических антител или антигенов в сыворотке крови. Для этого используют реакцию агглютинации (РА), реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА), реакцию торможения гемагтлютинации

(РТГА), реакцию связывания комплемента (РСК), реакцию нейтрализации (РН), реакцию преципитации (РП), радиоиммунный анализ (РИА), иммуноферментный анализ (ИФА) и другие реакции иммунитета;

–при выявлении антител определяют нарастание их титра, для этого исследуют парные сыворотки. Первую сыворотку берут у больного в острый период в начале болезни, а вторую – через 10-14 дней. Сыворотки исследуют одномоментно. О болезни свидетельствует сероконверсия, т.е. нарастание титра антител во второй сыворотке по отношению к первой в 4 раза и выше;

162.Методы микробиологической диагностики микозов!!!!

163.Аллергические пробы, их сущность, применение в диагностике инфекционных болезней. 1.Аллергические пробы:

1.1.Вступление:

–биологические реакции для диагностики ряда заболеваний, основанные на повышенной чувствительности организма, вызванной аллергеном;

–при инфекционных заболеваниях за счёт активации клеточного иммунитета развивается повышенная чувствительность организма к возбудителям и продуктам их жизнедеятельности. На этом основаны аллергические пробы, используемые для диагностики бактериальных, вирусных, протозойных инфекций, микозов и гельминтозов; 1.2.Основная часть:

–обладают специфичностью, но нередко они бывают положительными у переболевших и привитых. Все аллергические пробы подразделяют на две группы — пробы invivo и invitro;;

1.2.1.К первой группе (invivo):

–относятся кожные пробы, осуществляемые непосредственно на пациенте и выявляющие аллергию немедленного (через 20 мин) и замедленного (через 24 – 48 ч) типов;

1.2.2.Аллергические пробы invitro:

–основаны на выявлении сенсибилизации вне организма больного;

–применяются тогда, когда нельзя произвести кожные пробы, либо в тех случаях, когда кожные реакции дают неясные результаты;

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

1.3.Механизмы:

–для проведения аллергических проб используют аллергены – диагностические препараты, предназначенные для выявления специфической сенсибилизации организма. Инфекционные аллергены, используемые в диагностике инфекционных заболеваний, представляют собой очищенные фильтраты бульонных культур, реже взвеси убитых микроорганизмов или АГ, выделенные из них;

2.Кожные пробы:

2.1.Инфекционные аллергены:

–вводят, как правило, внутрикожно/накожно, путем втирания в участки кожи. При внутрикожном способе в среднюю 1/3 передней поверхности предплечья специальной тонкой иглой вводят 0,1 мл аллергена. Через 28-48 ч оценивают результаты реакции ГЗТ, определяя на месте введения размеры папулы; 2.2.Неинфекционные аллергены:

–(пыльца растений, бытовая пыль, пищевые продукты, лекарственные и химические препараты) вводят в кожу уколом (прик-тест), накожно путем скарификации и втирания или внутрикожной инъекцией разведенного р-ра аллергена;

–в качестве «–» контроля используют ИХН (изотонического р-ра NaCl), в качестве «+» – р-р гистамина. Результаты учитывают в течение 20 мин (ГНТ - Гиперчувствительность немедленного типа) по величине папулы (иногда до 20

мм в диаметре), наличию отека и зуда. Внутрикожные пробы ставят в случае отрицательного или результата приктеста;

–кожные пробы на наличие ГЗТ широко применяют для выявления инфицированности людей микобактериями туберкулеза (проба Манту), возбудителями бруцеллеза (проба Бюрне), лепры (реакция Митсуды), туляремии, сапа, актиномикоза, дерматомикозов, токсоплазмоза, некоторых гельминтозов и др.;

3.Пробы invitro:

–методы исследования безопасны для больного, достаточно чувствительны, позволяют количественно оценить уровень аллергизации организма;

–разработаны тесты для определения сенсибилизации, основанные на реакциях Т- и B-лимфоцитов, тканевых базофилов, выявлении общих специфических IgE в сыворотке крови и др. К ним относятся реакции торможения миграции лейкоцитов и бласт-трансформации лимфоцитов, специфическое розетко-образование, базофильный тест Шелли, реакция дегрануляции тканевых базофилов, аллергосорбентные методы (определение IgE в сыворотке крови); 3.1.Реакция торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ):

–основана на подавлении миграции моноцитов и других лейкоцитов под действием медиаторов, вырабатываемых сенсибилизированными лимфоцитами, в присутствии специфического аллергена; 3.2.Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТ):

–в основе этой реакции лежит способность нормальных лимфоцитов периферической крови вступать в митоз и превращаться в бластные формы при культивировании их invitro под действием специфических факторов – аллергенов и неспецифических стимуляторов митогенеза – митогенов (фитогемагглютинин, конканавалин А, липополисахариды и др. в-ва); 3.3.Реакция специфического розеткообразования:

–розетки – характерные образования, возникающие invitro в результате прилипания эритроцитов к поверхности иммунокомпетентных клеток. Розеткообразование может происходить спонтанно, поскольку Т-лимфоциты человека содержат рецепторы к эритроцитам барана. Спонтанное розеткообразование здоровых людей составляет 52 – 53% и служит показателем функционального состояния Т-лимфоцитов. Этот феномен воспроизводится также и в том случае, если используют эритроциты, на которых фиксированы соответствующие аллергены; 3.4.Реакция дегрануляции тканевых базофилов:

–методика основана на том, что под действием аллергена происходит дегрануляция тканевых базофилов крысы, предварительно сенсибилизированных цитофильными AT из сыворотки крови больного;

3.5.Базофильный тест Шелли:

–известно, что базофильные гранулоциты человека или кролика также дегранулируются в присутствии сыворотки больного и аллергена, к которому чувствителен данный пациент;

3.6.Определение антител класса IgE invitro:

–лабораторная диагностика заболеваний, в основе которых лежит ГНТ, основана на определении аллергенспецифических IgE анти-IgE;

–при использовании радиоактивной метки метод носит название радиоаллергосорбентного теста (PACT), но чаще в качестве метки используют фермент или флюоресцирующее в-во (ФАСТ). Время анализа – 6-7 часов. Принцип метода: фиксированный аллерген инкубируют с сывороткой крови больного; находящиеся в сыворотке специфические IgE-анти-IgE связываются с аллергеном и, таким образом, остаются фиксированными на основе и могут вступать в специфическое взаимодействие с добавляемыми мечеными анти-IgE;

164.Возбудители брюшного тифа и паратифов. Таксономия и характеристика. Микробиологическая диагностика. Специфическая и неспецифическая профилактика, этиотропное лечение.

1.Брюшной тиф:

–острые кишечные инфекции, характеризующиеся поражением лимфатического аппарата кишечника, выраженной интоксикацией, бактериемией, лихорадкой, и интоксикацией организма. Их возбудителями являются соответствен-

но Salmonella Typhi, Salmonella Paratyphi А и Salmonella Schottmuelleri;

1.1.Таксономическое положение:

–возбудители брюшного тифа и паратифов А и В относятся к отделу Gracilicutes, семейству Enterobacteriaceae, роду

Salmonella;

1.2.Характеристика возбудителя:

1.2.1.Морфологические и тинкториальные свойства:

–мелкие грам «–» палочки с закругленными концами;

–в мазках располагаются беспорядочно. Не образуют спор, имеют микрокапсулу, перитрихи;

1.2.2.Культуральные свойства;

–факультативные анаэробы. Оптимальными для роста являются температура 37;

–растут на простых питательных средах. Элективной средой для сальмонелл является желчный бульон;

1.2.3.Биохимическая активность:

–достаточно высока, но они не сбраживают лактозу. S.typhi менее активна, чем возбудители паратифов;

1.2.4.Антигенные свойства и классификация:

–сальмонеллы имеют О-/H-антигены, состоящие из ряда фракций. Каждый вид обладает определенным набором антигенов;

–все виды сальмонелл, имеющие общую так называемую групповую фракцию О-антигена, объединены в одну группу. S.Тyphi и некоторые другие сальмонеллы имеют Vi-антиген (разновидность К-антигена), с этим антигеном связывают вирулентность бактерий, их устойчивость к фагоцитозу;

1.2.5.Факторы патогенности:

–образуют эндотоксин, обладающий энтеротропным, нейротропным и пирогенным действием. С белками наружной мембраны связаны адгезивные свойства, наличие микрокапсулы обусловливает устойчивость к фагоцитозу;

1.2.6.Резистентность:

–устойчивы к низкой температуре. Очень чувствительны к дезинфицирующим веществам, высокой температуре, ультрафиолетовым лучам. В пищевых продуктах сальмонеллы могут долго сохраняться и размножаться; 1.3.Вызываемые заболевания:

1.3.1.Эпидемиология:

–антропонозные инфекции; источником заболевания являются больные люди и бактерионосители;

–источником паратифа В могут быть также сельскохозяйственные животные. Механизм заражения фекально-ораль- ный. Среди путей передачи преобладает водный;

1.3.2.Патогенез:

–сформировав первичный очаг инфекции в пейеровых бляшках, возбудители тифа и паратифов вызывают их воспаление с развитием лимфаденита. В результате воспаления нарушается их барьерная ф-я, и сальмонеллы попадают в кровь, вызывая бактериемию. Это совпадает с концом инкубационного периода, длящийся 10-14 суток. Во время бактериемии, сопровождающая весь лихорадочный период, возбудители тифа и паратифов с током крови разносятся по организму;

–паразиты оседают в ретикулоэндотелиальных элементах органов: печени, селезенке, легких, а также в костном мозге, где размножаются в макрофагах, и в желчном пузыре, куда они попадают по желчным протокам, диффундируя из купферовских клеток печени;

–к концу 2-й недели заболевания возбудитель начинает выделяться из организма с мочой, потом, материнским молоком, слюной. Накапливаясь в желчном пузыре, сальмонеллы вызывают его воспаление и с током желчи попадают в тонкий кишечник. Повторное внедрение сальмонелл в пейеровы бляшки приводит к развитию в них гиперергического воспаления, их некрозу и изъязвлению, что может привести к кишечному кровотечению и прободению кишечной стенки. Выделяются сальмонеллы из организма с испражнениями и мочой;

1.3.3.Клиника:

–характеризуется циклическим течением и проявляется лихорадкой (повышение температуры до 39-40), интоксикацией, появлением сыпи, нарушениями со стороны нервной системы (бред, галлюцинации) и сердечно-сосудистой системы (падение кровяного давления, коллапс и др.). Паратифы протекают в основном так же, как брюшной тиф; 1.4.Микробиологическая диагностика:

–материал и метод исследования определяются стадией течения болезни. В 1-ые дни заболевания наблюдается бактериемия, поэтому на 1-й неделе заболевания и в течение всего лихорадочного периода используют метод гемокультуры: посев крови в желчный бульон с последующим пересевом на дифференциально-элективные среды. Выделенную культуру идентифицируют по биохимическим св-вам и антигенной структуре, а выделенную культуру S.Тyphi типируют Vi-фагами для определения источника инфекции. С конца 2-й недели заболевания производят выделение культур, т.е. материалом для исследования служат моча, испражнения, желчь. Начиная со 2-й недели заболевания проводят серологическое исследование в целях определения наличия и типа антител в РНГА, которую ставят с О-, Н- и Vi-диагностикумами;

1.5.Лечение и профилактика:

1.5.1.Лечение:

–этиотропная антибиотикотерапия;

1.5.2.Профилактика:

–используют брюшнотифозную сорбированную и брюшнотифозную спиртовую, обогащенную Vi-антигеном вакцины. Для профилактики лиц, проживающих совместно с больным и употреблявшим продукты и воду, зараженные или подозрительные на заражение S.Typhi, назначают сухой брюшнотифозный бактериофаг;

–неспецифическая профилактика включает санитарно-бактериологический контроль за системами водоснабжения, соблюдение санитарно-гигиенических правил при приготовлении пищи, обнаружение бактерионосителей среди работников пищеблоков, торговли, своевременное выявление и изоляцию больных;

165.Возбудители эшерихиозов. Таксономия. Характеристика. Роль кишечной палочки в норме и патологии. Отличительные особенности диареегенных эшерихий. Микробиологическая диагностика эшерихиозов. Этиотропное лечение.

1.Эшерихиозы:

–инфекционные болезни, возбудителем которых является Escherichia Coli;

–различают энтеральные (кишечные) и парентеральные эшерихиозы. Энтеральные эшерихиозы – острые инфекционные болезни, характеризующиеся преимущественным поражением ЖКТ. Они протекают в виде вспышек, возбудителями являются диареегенные штаммы E.Coli. Парентеральные эшерихиозы – болезни, вызываемые условно-па- тогенными штаммами E.Coli – представителями нормальной микрофлоры толстой кишки. При этих болезнях возможно поражение любых органов; 1.1.Таксономическое положение:

–возбудитель – кишечная палочка – основной представитель рода Escherichia, семейства Enterobacteriaceae, относящегося к отделу Gracilicutes;

1.2.Характеристика возбудителя:

1.2.1.Морфология:

–грам«–» палочки размером, подвижные за счет жгутиков. Для некоторых характерно наличие микрокапсулы, построенной из гомополимера сиаловой кислоты; такие штаммы обозначаются как K+;

1.2.2.Культуральные свойства:

–на плотных средах образуют колонии в S- и R-формах. Колонии в S-форме гладкие, блестящие, полупрозрачные. На жидких средах образуют диффузное помутнение и придонный осадок;

1.2.3.Биохимические свойства: