2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Mikrobiologia

–в 1-й фазе реакции при образовании комплекса антиген–антитело происходит связывание комплемента, и во 2-й фазе гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов не произойдет; реакция положительная;

–если антиген и антитело не соответствуют друг другу (в исследуемом образце нет антигена или антитела), комплемент остается свободным и во 2-й фазе присоединится к комплексу эритроцит–антиэритроцитарное антитело, реакция отрицательная;

–применяется для диагностики сифилиса (реакция Вассермана); 1.2.Реакцию радиального гемолиза (РРГ):

–ставят в лунках геля из агара, содержащего эритроциты барана и комплемент. После внесения в лунки геля сыворотки (антител против эритроцитов барана) вокруг них (в результате радиальной диффузии антител) образуется зона гемолиза. Таким образом можно определить активность комплемента и гемолитической сыворотки, а также антитела в сыворотке крови у больных краснухой, клещевым энцефалитом и др. Для этого на эритроцитах адсорбируют соответствующие антигены вируса, а в лунки геля, содержащего данные эритроциты, добавляют сыворотку крови больного. Противовирусные антитела взаимодействуют с вирусными антигенами, адсорбированными на эритроцитах, после чего к этому комплексу присоединяются компоненты комплемента, вызывая гемолиз; 1.3.Реакция иммунного прилипания (РИП):

–основана на активации системы комплемента корпускулярными антигенами (бактериями, вирусами), обработанными иммунной сывороткой. В результате образуется С3b-компонент комплемента, присоединяющийся к корпускулярному антигену в составе иммунного комплекса. На эритроцитах, тромбоцитах, макрофагах имеются рецепторы для С3b, благодаря чему при смешивании этих клеток с иммунными комплексами, несущими С3b, происходят их соединение и агглютинация;

119.Реакция нейтрализации токсина антитоксином. Механизм. Способы постановки, применение.

–антитела иммунной сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие микробов или их токсинов на чувствительные клетки и ткани, что связано с блокадой микробных антигенов антителами, т.е. их нейтрализацией;

–проводится путём введения смеси антиген–антитело животным или в чувствительные тест-объекты (культуру клеток, эмбрионы). При отсутствии у животных и тест-объектов повреждающего действия микроорганизмов или их антигенов, токсинов говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки и о специфичности взаимодействия комплекса антиген–антитело;

–коричневая книга стр.361(конец)-362(схема);

120.Реакция иммунофлюоресценции. Механизм, компоненты, применение.

–различают три основные разновидности метода: прямой, непрямой, с комплементом:

1.Прямой метод РИФ:

–основан на том, что препараты тканей или мазки микробов, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа. Бактерии, присоединившие меченые антитела люминесцирующей сыворотки, светятся в виде каймы зеленого цвета;

2.Непрямой метод РИФ:

–заключается в выявлении комплекса антиген–антитело с помощью антиглобулиновой (противантительной) сыворотки, меченной флюорохромом. Для этого мазки из взвеси микробов обрабатывают антителами антимикробной кроличьей сыворотки. Затем антитела, не связавшиеся антигенами микробов, отмывают, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной флюорохромами. В результате образуется комплекс (микроб + антимикробные кроличьи антитела+антикроличьи антитела, меченные флюорохромом), обнаруживаемый с помощью люминесцентного микроскопа, как и при прямом методе;

121.Иммуноферментный анализ, иммуноблоттинг. Механизм, компоненты, применение. 1.Иммуноферментный анализ (ИФА):

–выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом-меткой (антитела, меченные пероксидазой хрена, β-галактозидазой или щелочной фосфатазой). После соединения антигена с меченной ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат/хромоген;

–субстрат расщепляется ферментом, и изменяется цвет продукта реакции – интенсивность окраски прямо пропорциональна кол-ву связавшихся молекул антигена и антител;

–прерывается путем добавления к-ты для денатурации фермента; 1.1.Твердофазный ИФА:

–наиболее распространенный вариант иммунологического теста, когда один из компонентов иммунной реакции (антиген/антитела) сорбирован на твердом носителе, например в лунках планшеток из полистирола. При определении антител в лунки с сорбированным антигеном, добавляют сыворотку крови больного, антиглобулиновую (противочеловеческую) сыворотку, меченную ферментом, и субстрат (хромоген) для фермента;

–после добавления очередного компонента из лунок удаляют несвязавшиеся реагенты. При «+» результате изменяется цвет раствора хромогена;

–твердофазный носитель можно сенсибилизировать не только антигеном, но и антителами: в лунки с сорбированными антителами вносят искомый антиген, добавляют иммунную сыворотку против антигена, меченную ферментом, а затем субстрата для фермента; 1.2.Конкурентный вариант ИФА:

–искомый антиген и меченный ферментом антиген конкурируют друг с другом за связывание ограниченного кол-ва антител иммунной сыворотки;

–другой тест – искомые антитела и меченые антитела конкурируют друг с другом за антигены;

–применяют для диагностики вирусных, бактериальных, паразитарных болезней, в частности для диагностики ВИЧ, гепатита В и др., а также определения гормонов, ферментов, лекарственных препаратов и др. био-активных в-в, содержащихся в исследуемом материале в минорных концентрациях – 10–10–10–12 г/л;

2.Иммуноблоттинг (ИБ, вестернблоттинг):

–высокочувствительный метод, основанный на сочетании электрофореза и ИФА/РИА;

–антигены разделяют по молекулярной массе с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, затем осуществляют блоттинг, т.е. перенос антигенов из геля на нитроцеллюлозную мембрану, и проявляют невидимые «блоты» антигенов с помощью антител, меченных ферментами (ИФА);

–на полоски с «блотами» антигенов наносят сыворотку больного. Затем после инкубации отмывают от несвязавшихся антител больного и наносят сыворотку против иммуноглобулинов человека, меченную ферментом. Образовавшийся на полоске комплекс выявляют добавлением субстрата/хромогена, изменяющего окраску под действием фермента;

–используется при диагностике, например ВИЧ-инфекции и др.;

122.Серологические реакции, используемые для диагностики вирусных инфекций.

–иммунные реакции используют при диагностических и иммунологических исследованиях у больных и здоровых людей. С этой целью применяют серологические методы, т.е. методы изучения антител и антигенов с помощью реакций антиген–антитело, определяемых в сыворотке крови и других жидкостях, а также тканях организма;

–обнаружение в сыворотке крови больного антител против антигенов возбудителя позволяет поставить диагноз болезни. Серологические исследования применяют также для идентификации антигенов микробов, различных биологически активных веществ, групп крови, тканевых и опухолевых антигенов, иммунных комплексов, рецепторов клеток и др.;

–при выделении микроба от больного проводят идентификацию возбудителя путем изучения его антигенных св-в с помощью иммунных диагностических сывороток, т.е. сывороток крови гипериммунизированных животных, содержащих специфические антитела. Это серологическая идентификация микроорганизмов;

–в микробиологии и иммунологии широко применяются реакции агглютинации, преципитации, нейтрализации, реакции с участием комплемента, с использованием меченых антител и антигенов (радиоиммунологический, иммуноферментный, иммунофлюоресцентный методы);

123.Диагностикумы. Получение, применение.

1.Диагностикумы:

–в диагностических целях при обнаружении антител в сыворотке крови больных, реконвалесцентов и бактерионосителей используются серологические реакции. Для постановки таких реакций применяются диагностикумы - препараты, содержащие взвесь обезвреженных микроорганизмов или определенные антигены;

–необходимость использования диагностикумов для серологических реакций связана с их преимуществом перед живыми культурами микробов (безопасность в работе), и для приготовления подбираются штаммы микроорганизмов с высокой чувствительностью к антителам и способностью длительно сохранять антигенные св-ва;

–для инактивации микроорганизмов при приготовлении диагностикумов чаще всего используются хим-в-ва, особенно формалин, являющийся лучшим консервантом. Убитые нагреванием микробы хуже сохраняют антигенные св-ва и применяются редко;

–в серологических реакциях (реакции агглютинации, реакции пассивной гемагглютинации, реакции связывания комплемента, реакции торможения гемагглютинации) для выявления специфических антител применяются: бактериальные, эритроцитарные и вирусные диагностикумы; 1.1.Бактериальные диагностикумы:

–могут содержать инактивированную микробную взвесь/отдельные антигенные компоненты бактерий: О, Н, Vi-ан- тигены и используются в реакциях агглютинации; 1.2.Эритроцитарные диагностикумы:

–представляют собой эритроциты (обработанные танином или формалином) с адсорбированными на них антигенами, извлеченными из бактерий, и применяются в РПГА (реакции пассивной гемагглютинации);

–в том случае, когда РПГА используется для выявления антигена в выделениях больных, в тканях и др., применяют «антительные диагностикумы», т. е. эритроциты, сенсибилизированные антителами; 1.3.Вирусные диагностикумы:

–препараты, содержащие инактированные вируссодержащие жидкости (культуральные, из куриных эмбрионов или организма животных, зараженных соответствующим вирусом), применяются в РСК (реакции связывания комплемента), реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и реакции нейтрализации;

–в настоящее время в лабораториях используются следующие диагностикумы:

1.3.1.Бактериальный диагностикум сальмонелл тифа:

–применяется в реакции агглютинации для обнаружения антител в сыворотке больных;

1.3.2.Сальмонеллезные О-диагностикумы:

–содержат О-антигены различных групп сальмонелл (инактивированных 15%-ным раствором глицерина). Применяются для выявления О-антител при сальмонеллезных инфекциях в реакции агглютинации с сывороткой; больных;

1.3.3.Сальмонеллезные Н-монодиагностикумы;

–используются в реакции агглютинации для определения заболевания в прошлом (анамнестическая реакция агглютинации) и реже с диагностической целью;

1.3.4.Vi – брюшнотифозный диагностикум:

–применяется в реакции агглютинации при выявлении брюшнотифозного бактерионосительства;

1.3.5.Единый бруцеллезный диагностикум:

–взвесь бруцелл (инактивированных фенолом), подкрашенная метиленовым синим. Применяется для определения антител в сыворотках крови больных бруцеллезом людей и животных в реакциях агглютинации Райта и Хеддльсона;

1.3.6.Эритроцитарный сальмонеллезный О-диагностикум:

–взвесь эритроцитов с адсорбированными на них О-антигенами различных групп сальмонелл. Используется для постановки РПГА с сывороткой больного при уточнении клинического диагноза сальмонеллезной инфекции;

1.3.7. Эритроцитарный Vi-диагностикум:

–эритроциты, сенсибилизированные очищенным Vi-антигеном S. typhi, применяется в РПГА при выявлении брюшнотифозного бактерионосительства;

1.3.8.Гриппозный диагностикум:

–представляет собой аллантоисную жидкость инфицированных вирусом гриппа (типов А, В) куриных эмбрионов и инактивированную мертиолатом или формалином. Диагностикумы необходимы при постановке РТГА с парными сыворотками больных для уточнения клинического диагноза и циркулирующего типа вируса гриппа;

1.3.9. Диагностикум вируса клещевого энцефалита:

–получают из суспензии мозга белых мышей, зараженных вирусом клещевого энцефалита. Суспензию подвергают центрифугированию (для осветления) и инактивируют хим-в-вами. Диагностикум используется в РТГА и РСК с сывороткой больных при диагностике заболевания;

124.Моноклональные антитела. Получение, применение.

–коричневая книга стр.308(конец)-309; 380;

1.Моноклональные антитела:

–являются однородными и высокоспецифичными;

–продуцируются гибридомой – популяция гибридной клетки, полученной слиянием антителообразующей клетки определенной специфичности с «бессмертной» опухолевой клеткой миеломы, не образующей антител. Например, спленоциты мыши, иммунизированной антигеном, сливают (в среде полиэтиленгликоля) с клетками мышиной миеломы, в результате чего появляется гибридома. Затем отобранные селекцией и размноженные B-лимфоциты гибридомного клона культивируют или прививают в брюшную полость мыши с асцитной опухолью, где в экссудате брюшной полости появляются моноклональные антитела одной специфичности;

–широко используются в клинико-диагностической практике. При терапии рака и аутоиммунных заболеваний, например ревматоидного артрита, также применяют химерные моноклональные антитела; 1.1.Химерные моноклональные антитела:

–состоят из вариабельной области Fab-фрагмента мышиных моноклональных антител против определенного антигена и фрагмента IgG-антител человека;

1.2.Гуманизированные моноклональные антитела:

–получают соединением генных участков гипервариабельных областей (CDR) иммуноглобулина крысы с генами иммуноглобулина человека;

–гуманизированные моноклональные антитела (даклизумаб и базиликсимаб) к рецептору IL-2 применяют в трансплантологии для блокирования активации T-лимфоцитов;

125.Методы приготовления и применения агглютинирующих, адсорбированных сывороток. 1.Вступление:

–в диагностике инфекционных болезней широко применяются иммунные реакции при идентификации возбудителя: при установлении родовой, видовой и типовой принадлежности микроба (вируса). Для постановки таких реакций необходимы специфические диагностические сыворотки, которые в зависимости от содержания соответствующих антител называются агглютинирующие, преципитирующие, гемолитические, противовирусные;

2.Агглютинирующие сыворотки:

2.1.Получение:

–получают иммунизацией кроликов (внутривенно, подкожно или внутрибрюшинно) взвесью убитых бактерий, начиная с дозы 200 млн., затем 500 млн., 1 млрд., 2 млрд., микробных тел в 1 мл, с интервалами 5 дней. Через 7-8 дней после последней иммунизации берут кровь и определяют титр антител. Титром агглютинирующей сыворотки наз. макс-ное разведение сыворотки, при котором происходит агглютинация с соответствующим микроорганизмом; 2.2.Агглютинирующие сыворотки применяются:

–при идентификации микроба в развернутой реакции агглютинации. Если изучаемый микроорганизм агглютинируется сывороткой до титра или до половины значения титра, его можно считать принадлежащим к тому виду, название которого указано на этикетке ампулы;

–недостатком таких сывороток является то, что они способны давать групповые реакции агглютинации, т.к. они содержат антитела к бактериям, имеющим общие антигены в пределах семейства, группы и рода;

–при диагностике заболеваний, вызываемых бактериями семейства Enferobacferiaceae. Так, при идентификации эшерихий используются поливалентные и типовые ОК-сыворотки; при дифференциации сальмонелл – набор сывороток: агглютинирующая адсорбированная поливалентная сальмонеллезная О-сыворотка;

3.Адсорбированные сыворотки:

–в настоящее время большинство агглютинирующих сывороток выпускаются адсорбированиими монорецепторными и адсорбированными поливалентными, содержащими только типовые или видовые антитела и соответствующими или определенному типу или виду микроорганизма. Эти сыворотки не подлежат разведению; 3.1.Методы получения:

–для получения таких сывороток применяют метод Кастелляни – метод адсорбции, состоящий в том, что при насыщении агглютинирующей сыворотки родственными гетерогенными бактериями происходит адсорбция групповых антител, а специфические антитела остаются в сыворотке;

–в зависимости от полноты истощения групповых агглютининов можно получить монорецепторные – сыворотки, имеющие антитела только к 1-ому рецептору-антигену/адсорбированные; поливалентные, дающие реакции агглютинации с 2-мя – 3-мя родственными бактериями, имеющими общий антиген, в отношении которого проводилась адсорбция; 3.2.Применение:

–применяют при идентификации выделенных возбудителей в реакции агглютинации на стекле (пластинчатый метод);

§9.МЕДИЦИНСКИЕ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ (ИБП), ПРИМЕНЯЕМЫЕ ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ.

126.Вакцины. Определение. Современная классификация вакцин. Требования, предъявляемые к вакцинным препаратам.

1.Вакцина:

–медицинский препарат, предназначенный для создания иммунитета к инфекционным болезням; 1.1.Цель:

–используют для активной специфической профилактики, а иногда и для лечения инфекционных болезней. Кроме этого, появились вакцины для профилактики и лечения неинфекционных и онкологических болезней, наркозависимости, табакокурения и др. Действующим началом в вакцинах является специфический антиген; 1.2.Состав:

–представляет сложный иммунобиологический препарат, в состав которого наряду со специфическим антигеном, включают стабилизаторы, консерванты, адъюванты. В качестве стабилизаторов, предохраняющих антиген от разрушения, например при производстве или при длительном хранении вакцины, используют гомологичные белки (альбумин человека), сахарозо-агар-желатину и др. В качестве консервантов, не допускающих размножения попавшей в препарат микрофлоры, применяют мертиолят, формалин и другие антимикробные препараты;

–для повышения иммуногенности антигена в некоторые вакцины добавляют различные адъюванты; 1.3.Классификации вакцин:

1.3.1.Живые вакцины:

–препараты, действующим началом в которых являются ослабленные тем или иным способом, потерявшие свою вирулентность, но сохранившие специфическую антигенность штаммы патогенных бактерий. Примером таких вакцин являются БЦЖ и вакцина против натуральной оспы человека, в качестве которой используется непатогенный для человека вирус оспы коров;

1.3.2.Инактивированные (убитые) вакцины:

–препараты, в качестве действующего начала включающие убитые химическим или физическим способом культуры патогенных вирусов или бактерий, (клеточные, вирионные) или же извлечённые из патогенных микробов комплексы антигенов, содержащие в своём составе проективные антигены (субклеточные, субвирионные вакцины). В препараты иногда добавляют консерванты и адьюванты; А)Молекулярные вакцины:

–антиген находится в молекулярной форме или даже в виде фрагментов его молекул, определяющих специфичность т.е. в виде эпитопов, детерминант.

Б)Корпускулярные вакцины:

–содержащие в своем составе протективный антиген;

1.3.3.Анатоксины:

–относятся к числу наиболее эффективных препаратов. Принцип получения – токсин соответствующей бактерии в молекулярном виде превращают в нетоксичную, но сохранившую свою антигенную специфичность форму путем воздействия формальдегида, далее анатоксин концентрируют, очищают, добавляют адьюванты;

1.3.4.Синтетические вакцины:

–молекулы эпитопов сами по себе не обладают высокой иммуногенностью для повышения их антигенных св-в эти молекулы сшиваются с полимерным крупномолекулярным безвредным в-вом, иногда добавляют адьюванты;

1.3.5.Ассоциированные вакцины:

–препараты, включающие несколько разнородных антигенов. 1.4.Требования, предъявляемые к современным вакцинам:

Иммуногенность;

Низкая реактогенность (аллергенность);

Не должны обладать тератогенностью, онкогенностью;

Штаммы, из которых приготовлена вакцина, должны быть генетически стабильны;

Длительный срок хранения;

Технологичность производства;

Простота и доступность в применении;

127.Живые вакцины. Получение, применение. Достоинства и недостатки. 1.Живые вакцины:

1.1.Состав:

–представляют собой препараты, в которых действующим началом являются ослабленные тем или иным способом, потерявшие вирулентность, но сохранившие специфическую антигенность штаммы патогенных микробов, получившие название аттенуированных штаммов (т.е. ослабленных путём воздействия на штамм хим-/физ-(температура, радиация)факторов). В результате таких воздействий на миркобы, штаммы селекционируются со сниженной вирулентностью, но способные при введении в организм человека размножаться и вызывать вакцинный процесс (создавать адаптивный иммунитет), не вызывая инфекционного заболевания; 1.2.Применение:

–в качестве живых вакцин использовуют дивергентные штаммы, т.е. непатогенные для человека микробы, имеющие общие антигены с патогенными для человека возбудителями инфекционных болезней. Примером является вакцина

против натуральной оспы человека, в которой используется непатогенный для человека вирус оспы коров. Эти два вируса имеют общий протективный антиген; 1.3.Получение:

–принцип получения таких вакцин сводится к созданию непатогенных для человека штаммов, несущих гены антигенов патогенных микробов и способных при введении в организм человека размножаться, синтезировать специфический антиген и, таким образом, создавать иммунитет к возбудителю. Такие вакцины называют векторными;

–в качестве векторов для создания рекомбинантных штаммов чаще используют вирус осповакцины, непатогенные штаммы сальмонелл и другие микробы; 1.4.Способ примение и дозировка:

–дозируют вакцину числом живых бактерий или вирусов в зависимости от способа применения: накожно, подкожно, внутримышечно, перорально;

–живые вакцины применяют однократно с периодическими ревакцинациями. В качестве примера живых вакцин можно назвать вакцины против кори, эпидемического паротита, краснухи, полиомиелита;

128.Дендритные вакцины!!!!

129.Инактивированные (корпускулярные) вакцины. Приготовление. Применение. Достоинства и недостатки. 1.Инактивированные (убитые) вакцины:

1.1.Состав:

–в качестве действующего начала включают убитые хим-/физ-методом культуры патогенных микробов (цельноклеточные, цельновирионные вакцины) или же извлеченные из патогенных микробов (иногда вакцинных штаммов) комплексы, содержащие в своем составе протективные антигены (субклеточные, субвирионные вакцины); 1.2.Получение:

–для инактивации бактерий и вирусов применяют формальдегид, спирт, фенол, температурное воздействие, УФ-об- лучение, ионизирующую радиацию. Для выделения из бактерий и вирусов антигенных комплексов (гликопротеинов, ЛПС, белков) применяют трихлоруксусную кислоту, фенол, ферменты, изоэлектрическое осаждение, ультрацентрифугирование, ультрафильтрацию, хроматографию и другие методы;

–в вакцинный препарат обязательно добавляют консервант, иногда – адъюванты; 1.3.Способ примение и дозировка:

–дозируют вакцину в антигенных единицах; применяют, как правило, подкожно, внутримышечно в виде нескольких инъекций на курс вакцинации;

–применяют убитые вакцины против гриппа, полиомиелита, коклюша, бешенства и др.;

130.Субклеточные и субъединичные (химические) вакцины. Получение. Преимущества. Применение. Роль адъювантов.

1.Субклеточные и субъединичные (химические) вакцины:

–действующим началом этого типа препаратов являются протективные антигены бактерий, полученные путем воздействия ультразвука на бактериальные клетки. Главным преимуществом данного типа вакцин является их низкая реактогенность (способность вызывать реакции);

2.Адъюванты:

–применяются для усиления иммуногенности вакцин;

–в качестве адъювантов используют минеральные сорбенты (гели гидрата окиси и фосфата аммония), полимеры, и др. хим-в-ва; бактерии и компоненты бактерий; в-ва, вызывающие воспалительную реакцию. Они действуют на антиген и организм в целом; 2.1.Механизм:

–действие на антиген сводится к укрупнению молекул антигена, т.е. превращению растворимых антигенов в корпускулярные, в результате чего антиген лучше захватывается иммунокомпетентными клетками;

–при воздействии на организм в месте инъекции, вызывают воспалительный процесс образование фиброзной капсулы, что способствует более длительному сохранению антигена в «депо» и суммации антигенных раздражений;

131.Молекулярные вакцины. Анатоксины. Получение, очистка, титрование. Применение. 1.Молекулярные вакцины:

1.1.Свойства:

–антиген находится в молекулярной форме или же в виде фрагментов его молекул, определяющих специфичность антигенности, т.е. в виде эпитопов; 1.2.Получение:

–антиген в виде молекул получают биологическим синтезом в процессе культивирования патогенных микробов. Развитие генной инженерии, создание рекомбинантных микробов, способных синтезировать молекулы несвойственных антигенов, открыли возможности получать молекулярные антигены в процессе культивирования рекомбинантных штаммов;

–таким образом можно получить антигены ВИЧ, вирусных гепатитов, малярии, кори, полиомиелита, гриппа, туляремии, бруцеллеза, сифилиса и других возбудителей болезней. В медицинской практике уже используется молекулярная вакцина против гепатита В, полученная из антигена вируса, продуцируемого штаммом дрожжей;

–детерминанты антигена, можно получить химическим синтезом после расшифровки его структуры;

2.Анатоксины (токсоиды):

–примером являются молекулярных вакцин: дифтерийный, столбнячный, ботулинический, стафилококковый, холерный анатоксины; 2.1.Принцип получения анатоксинов:

–образующийся, при культивировании бактерий, токсин превращают в нетоксичный, но сохранивший антигенность анатоксин. Полученный анатоксин очищают и концентрируют для удаления в-в, состоящих из продуктов бактерий и питательной среды, на которой они выращивались. К очищенному продутуу для повышения иммуногенности добавляют адъюванты, обычно сорбенты – гели Al(ОН)3 и AlРО4. Полученные препараты назвали очищенными сорбированными (адсорбированными) анатоксинами; 2.2.Способ примение и дозировка:

–дозируют анатоксины в антигенных единицах: единицах связывания (ЕС) анатоксина специфическим антитоксином или в единицах флокуляции (Lf);

–применяют подкожно или внутримышечно по схеме, предусмотренной календарем прививок;

132.Ассоциированные и комбинированные вакцинные препараты. Достоинства. Вакцинотерапия. 1.Ассоциированные вакцины:

1.1.Общие сведения:

–препараты, включающие несколько разнородных антигенов и позволяющие проводить иммунизацию против нескольких инфекций одновременно. Создание таких вакцин научно обоснованно, т.к. иммунная система может отвечать на множество различных антигенов; 1.2.Цель:

–основная задача состоит в сбалансированности входящих в ее состав антигенов, чтобы не было конкуренции и чтобы препарат не вызывал повышенных поствакцинальных реакций;

1.3.Состав:

–состав ассоциированных препаратов могут входить как инактивированные, так и живые вакцины. Если в препарат входят однородные антигены, такую ассоциированную вакцину называют поливакциной – живая полиомиелитная поливакцина, в которую входят аттенуированные штаммы вируса полиомиелита I, II, III типа, или полианатоксин, куда входят анатоксины против столбняка, газовой гангрены и ботулизма;

2.Комбинированная:

–ассоциированный препарат состоит из разнородных антигенов;

–пример: АКДС-вакцина, состоящая из инактивированной корпускулярной коклюшной вакцины, дифтерийного и столбнячного анатоксинов, или вакцина против кори, эпидемического паротита и краснухи;

133.Генно-инженерные вакцины. Принципы получения, применение. 1.Генно-инженерные вакцины:

–препараты, полученные с помощью биотехнологии, которая по сути сводиться к генетической рекомбинации; 1.1.Получение:

1.1.1.Стадия I:

–получают ген, который должен быть встроен в геном реципиента. Гены могут быть получены методом хим-синтеза. Для этого расшифровывается число и последовательность АМК-т в белковой молекуле в-ва, затем по этим данным узнают очерёдность нуклеотидов в гене, далее следует синтез гена хим-путем;

–крупные структуры получаются путем выделения (клонирования), прицельного выщепления этих генетических образований с помощью рестриктаз;

–полученный целевой ген с помощью ферментов сшивается с другим геном, который используется в качестве вектора для встраивания гибридного гена в клетку. Вектором могут служить плазмиды, бактериофаги, вирусы человека и животных;

1.1.2.Стадия II:

–ген встраивается в бактериальную или животную клетку, которая начинает синтезировать несвойственное ей в-во, кодируемое эксперссируемым геном;

–в качестве реципиентов используется E.Coli, B.Subtilis, псевдомонады, дрожжи, вирусы. Некоторые штаммы способны переключаться на синтез чужеродного вещества до 50% своих синтетических возможностей – эти штамм называются суперпродуцентами; 1.2.Применение:

–примерами таких вакцин служат вакцина против гепатита В (энджерикс), сифилиса, холеры, бруцеллёза, гриппа, бешенства;

134.Иммунные сыворотки. Классификация. Получение, очистка. Применение. 1.Иммунные сыворотки:

–иммунологические препараты на основе антител;

–известны уже более ста лет. К настоящему времени существуют антитоксические сыворотки для лечения и профилактики дифтерии, столбняка, газовой гангрены, ботулизма; противобактериальные (противотифозная, противочумная и др.) и противовирусные сыворотки (против бешенства, клещевого энцефалита и др.); 1.1.Получение:

1.1.1.Гетерогенные:

–получают путем гипериммунизации, т.е. многократной интенсивной иммунизации, животных (лошадей, ослов, иногда кроликов) специфическим антигеном с последующим, в период максимального антителообразования, кровопусканием и выделением из крови иммунной сыворотки. Иммунные сыворотки, полученные от животных, называют гетерогенными, т.к. они содержат чужеродные для человека сывороточные белки;

1.1.2.Гомологичные:

–для получения гомологичных нечужеродных иммунных сывороток используют сыворотки переболевших людей/ специально иммунизированных людей-доноров либо сыворотки из плацентарной, а также абортной крови, содержащие антитела к ряду возбудителей инфекционных болезней вследствие вакцинации или перенесенного заболевания. Гомологичные сыворотки дают гораздо меньше побочных реакций в ответ на их введение, чем гетерогенные; 1.2.Активность иммунных сывороток:

–выражается в антитоксических единицах, в титрах (вируснейтрализующей, гемагглютинирующей, преципитирующей, агглютинирующей активности и т.д.), т.е. тем наименьшим кол-вом антител, вызывающие видимую реакцию с определенным кол-вом специфического антигена;

–активность антитоксической противостолбнячной сыворотки и соответствующего иммуноглобулина выражают в антитоксических единицах (АЕ) или в международных антитоксических единицах (МE), т.е. кол-вом антитоксина, связывающего 100 Dlm (наименьшее кол-во токсина, вызывающее гибель 95% экспериментальных животных) или 1000 Dlm для белой мыши столбнячного токсина;

1.3.Применение:

–с лечебной целью сывороточные препараты вводят внутримышечно (иногда внутривенно) в больших дозах;

–профилактические дозы сывороточных препаратов значительно меньше лечебных, а препараты вводят внутримышечно обычно лицам, имевшим контакт с больным или иным источником инфекции, для создания пассивного иммунитета. При введении сывороточных препаратов иммунитет наступает через несколько часов, сохраняясь 2-3 нед. после введения гетерологичных и в течение 4-5 нед. – гомологичных сывороточных препаратов;

–после введения сывороточных препаратов возможны осложнения в виде анафилактического шока и сывороточной болезни. Поэтому перед введением препаратов ставят аллергическую пробу на чувствительность к ним пациента;

135.Антитоксические сыворотки. Получение, очистка, титрование. Применение. Осложнения при использовании и их предупреждение.

1.Антитоксические гетерогенные сыворотки:

1.1.Получение:

–получаются путем гипериммунизации различных животных. Они называются гетерогенными т.к. содержат чужеродные для человека сывороточные белки; 1.2.Применение:

–более предпочтительным являются гомологичные антитоксические сыворотки, для получения которых используется сыворотка переболевших людей (коревая, паротидная), или специально иммунизированных доноров (противостолбнячная, противоботулинистическая), сыворотка из плацентарной а так же абортивной крови, содержащие антитела к ряду возбудителей инфекционных болезней вследствие вакцинации или перенесенного заболевания; 1.3.Активность иммунных антитоксических сывороток:

–выражается в антитоксических единицах, т.е. тем наименьшим кол-вом антител, которое вызывает видимую или реакцию с определённым кол-вом специфического антигена. активность антитоксической противостолбнячной сыворотки и соответствующего Ig выражается в антитоксических единицах;

1.4.Применение:

–применяются для лечения токсинемических инфекций (столбняк, ботулизм, дифтерия, газовая гангрена);

–после введения антитоксических сывороток возможны осложнения в виде анафилактического шока и сывороточной болезни, поэтому пред введением препаратов ставят аллергическую пробу на чувствительность к ним пациента, а вводят их дробно, по Безредке;

136.Препараты иммуноглобулинов. Получение, очистка, показания к применению. 1.Препараты иммуноглобулинов:

–нативные иммунные сыворотки, содержащие ненужные белки (альбумин), из этих сывороток выделяют и подвергают очистке специфические белки-иммуноглобулины;