6 курс / Клинические и лабораторные анализы / Гематология_Национальное_руководство

CD235a. Кроме того, большое значение имеет оценка гипогранулярности гранулоцитов на основе снижения показателя SSC (Steel Service Centre - фирмапроизводитель лазерного оборудования) - бокового рассеяния света лазерного луча. Аберрантная экспрессия лимфоидных антигенов может наблюдаться на злокачественных миелоидных или моноцитарных клетках любой стадии зрелости. Наиболее часто при МДС выявляется лимфоидный антиген CD7. Интерпретация аберрантной экспрессии CD56 должна проводиться с осторожностью, так как этот антиген выявляется на моноцитах и миелоидных клетках в процессе регенерации костного мозга, а также у пожилых. К лимфоидным маркерам аберрантности относят также CD5 и CD19.

Маркерные особенности (аберрантность) включают гипо- и гиперэкспрессию, асинхронное появление и утрату антигенов, а также гомогенные типы окрашивания. При МДС описаны нарушения интенсивности экспрессии на нейтрофилах CD64, CD33, CD16, CD14, CD13, CD11b и CD10, на моноцитах - HLA-DR,

CD36, CD33, CD15, CD14, CD13 и CD11b. Поскольку уровни экспрессии антигенов на мембране миелоидных клеток изменяются по мере их созревания от миелобласта до сегментоядерного нейтрофила (рис. 6.1 на цветной вклейке), очень важно это учитывать при определении аберрантности. Наиболее точную информацию дает сопоставление уровней экспрессии двух антигенов в ходе миелоидной дифференцировки. Информативными для установления дисплазии являются пары CD13/CD16 или CD11b/CD16. В целом же считается, что экспрессия немиелоидных антигенов значительной пропорцией миелоидных и моноцитарных клеток имеет большее значение при установлении диагноза МДС, чем измененная экспрессия миелоидных или моноцитарных антигенов. Кроме того, множественные аберрации в экспрессии миелоидных или моноцитарных антигенов имеют большее значение, чем единичные аномалии. Поскольку клональные аномалии наблюдаются не у всех больных МДС, обнаружение аберрантного фенотипа созревающих миелоидных клеток методом иммунофенотипирования является полезным в подтверждении или исключении данного диагноза. По этим причинам иммунофенотипические данные включены в диагностику в случаях отсутствия явной дисплазии и при повышении количества бластов (Valent P. et al., 2007).

В последние годы произошел серьезный прорыв в диагностике опухолей крови. В журнале Leukemia за 2012 г. изложены результаты работы консорциума «ЕвроФлоу». Обобщены результаты 6-летней работы по выявлению наиболее информативных комбинаций моноклональных антител, позволяющих диагностировать любые опухолевые заболевания крови, соотносить их с вариантами, предусмотренными классификацией ВОЗ (2008). В основу диагностики авторами положен наиболее высокотехнологичный подход - 8-цветная проточная цитометрия. Детально описаны методы исследования и используемые моноклональные антитела, меченные флуорохромами. Многие конъюгаты моноклональных антител специально созданы для целей иммунодиагностики опухолей крови. По степени влияния на медицинскую науку и практическую иммунодиагностику опухолей крови данная работа превосходит, по-видимому,

Медицинские книги

@medknigi

даже пересмотренную европейско-американскую классификацию лимфом, ставшую впоследствии основой используемых в настоящее время классификаций опухолей крови ВОЗ (2003; 2008).

В зависимости от клинической симптоматики и гематологических показателей выбираются наборы антител для скрининга острых лейкозов (ОЛ), зрелоклеточных (периферических) лимфом и NK-клеточных лимфопролиферативных заболеваний, а также плазмоклеточных опухолей. Результаты скрининга используются на этапе углубленной иммунодиагностики для установления нозологической принадлежности и варианта заболевания.

ИММУНОДИАГНОСТИКА ОСТРЫХ ЛЕЙКОЗОВ

Весьма часто в клинической практике возникает подозрение на острый лейкоз. Наличие высокого процента бластных клеток в костном мозге позволяет верифицировать этот диагноз. Морфоцитохимическое исследование, как правило, проводится на том же материале и в те же сроки, что и иммунофенотипирование. Иначе говоря, на момент проведения иммунофенотипирования вариант острого лейкоза (лимфоидный или миелоидный), а тем более линейная принадлежность бластных клеток при лимфобластных лейкозах неизвестны. Поэтому на первом этапе иммунодиагностики задача состоит в определении линейной принадлежности ОЛ, с тем чтобы далее уточнить стадию зрелости и подвариант заболевания. Алгоритм скрининга ОЛ включает всего лишь одну пробу с 8 антителами различной специфичности (табл. 6.2). Это позволяет в 98,3% случаев правильно диагностировать острый лейкоз, его вариант и линейную принадлежность клеток ОЛЛ. Используются антитела CD45 для идентификации бластов (клеток-предшественников), три наиболее надежных цитоплазматических маркера линейной принадлежности - CD3 (для Т-клеток), CD79a (для В-клеток), МРО (для миелоидных клеток), мембранные маркеры Т-клеток (CD3, CD7) и В- лимфоцитов (CD19), а также стволовоклеточный антиген CD34. Наиболее специфичным цитоплазматическим маркером В-клеток принят CD79a, а не традиционно используемый CD22. Это обусловлено тем, что cyCD22 не является линиеспецифичным для В-клеток, так как сильно экспрессирован на нормальных базофилах, тучных клетках и плазмоцитоидных дендритных клетках. При выборе маркеров клеток-предшественников предпочтителен CD34, а не TdT. Это обусловлено тем, что CD34 экспрессирован на незрелых клетках всех линий.

В зависимости от полученных данных используются наборы антител для иммунодиагностики В-линейных острых лейкозов (В-ОЛЛ), Т-линейных острых лейкозов (Т-ОЛЛ) и острого миелобластного лейкоза (ОМЛ) (табл. 6.2).

Целью иммунодиагностики В-ОЛЛ является распознавание и классификация всех опухолей из незрелых В-клеток. Иммунофенотипически В-ОЛЛ напоминают нормальные В-линейные предшественники, остановленные в своем развитии на различных стадиях созревания. Вместе с тем экспрессия целого ряда антигенов на клетках В-ОЛЛ существенно отличается от нормы, являясь асинхронной, эктопической или аберрантной. Информация об аберрантности клеток В-ОЛЛ при

Медицинские книги

@medknigi

диагностике является важной для последующего мониторинга минимальной остаточной болезни (МОБ). Необходимы идентификация нормальных В-линейных предшественников, определение их иммунофенотипических отличий от нормальных и регенерирующих клеток, установление уровня блока созревания. Важными составляющими иммунодиагностического процесса являются выявление лейкозных иммунофенотипов (ЛИ) для последующей оценки уровня минимальной остаточной болезни, а также определение иммунофенотипических профилей, ассоциированных с повторяющимися онкогенными аномалиями. Эта информация важна для оценки прогноза у больных.

Таблица 6.2. Иммунодиагностика острых лейкозов

ммунодиагностика острых лейкозов из В-линейных предшественников

ммунодиагностика острых лейкозов из T-линейных предшественников

ммунодиагностика острых миелоидных лейкозов и МДС

Для точной идентификации В-бластов используются повторяющиеся в пробах («каркасные») маркеры: общелейкоцитарный антиген CD45, стволовоклеточный антиген CD34 и В-линейный антиген CD19. CD45 использован для гейтинга бластов и исключения из анализа зрелых В-клеток. Идентифицировать все В-клетки в изучаемом образце крови или костного мозга позволяет CD19, так как он экспрессирован на В-линейных предшественниках и практически во всех случаях В-ОЛЛ. CD34 - маркер незрелости, который не является линейноассоциированным и часто (но не всегда) экспрессирован при В-ОЛЛ. Экспрессия CD34 не столь хорошо коррелирует с В-клеточной дифференцировкой, как CD10.

Медицинские книги

@medknigi

CD34 наилучшим образом отражает внутриклональную гетерогенность злокачественных В-линейных предшественников.

Помимо каркасных антител, в панели В-ОЛЛ включены маркеры для дифференциальной диагностики этой подгруппы лейкозов, позволяющие подтвердить принадлежность бластных клеток к предшественникам В-линии, исключить смешанно-линейный лейкоз, представить доказательства злокачественности, то есть опухолевой природы анализируемых клеток. Подобными доказательствами при анализе незрелых В-лимфоидных клеток являются асинхронная экспрессия антигенов (например, коэкспрессия CD20hi и CD34hi), аберрантная или эктопическая экспрессия антигенов (например, CD33hi), исчезновение нормальной кинетики иммунофенотипического созревания В- линейных предшественников.

По этим причинам в диагностический алгоритм В-ОЛЛ включены маркеры, ассоциированные с В-линией (CD22, CD24, CD10, CD20, cyIg, SmIg), маркеры для дифференциальной диагностики с другими острыми лейкозами (CD13, CD33, CD117, CD15, CD65 - для исключения ОМЛ), а также другие антигены, полезные для разграничения от нормальных образцов В-линейной дифференцировки (nuTdT,

CD10, CD38, CD20, CD123).

Антиген CD22 является одним из наиболее информативных В-линейно ассоциированных антигенов. Однако он не является специфичным для В-клеток, так как экспрессирован на базофилах, тучных клетках и плазмоцитоидных дендритных клетках. В пределах лимфоидной линии экспрессия этого антигена указывает на В-клеточную природу, причем антиген появляется на самых ранних стадиях дифференцировки В-линейных предшественников. Сходным образом CD24 экспрессирован так же, начиная с самых ранних стадий дифференцировки В- клеток, однако, помимо В-клеток, присутствует на гранулоцитах.

Миелоидные антигены (CD13, CD33, CD117, CD15, CD65) включены в панель для определения CD19-позитивных ОМЛ, которые могли быть пропущены на этапе скрининга ОЛ. При проведении иммунодиагностики В-ОЛЛ важно учитывать взаимоисключающий или взаимодополняющий характер экспрессии ряда маркеров. Так, например, SmIgμ не может быть экспрессирован на В-линейных предшественниках независимо от CyIgμ. Напротив, рецептор CD117 практически никогда не обнаруживается при В-ОЛЛ. Поэтому антитела к этим двум маркерам можно объединить в одной пробе и получить ответ - SmIgμ+ CD117)+.

При отсутствии СyIgμ подобные наблюдения следует трактовать как позитивные по CD117. Маркеры CD15 и CD65 объединены в одной пробе по иной причине - информация, которую они дают при В-ОЛЛ, является сходной и перекрывающейся.

В тех случаях, когда нормальные незрелые, регенерирующие лимфоидные клетки (гематогонии) выявляются в мазках костного мозга на морфологическом уровне, возникает вопрос об их разграничении от злокачественных клеток В-ОЛЛ.

Регенерирующие клетки характеризуются гетерогенными образцами окрашивания в силу присутствия нескольких стадий дифференцировки с последовательной и

Медицинские книги

@medknigi

скоординированной экспрессией множества антигенов, а лейкозные популяции являются значительно более однородными. Поскольку нормальное созревание В- линейных предшественников характеризуется снижением экспрессии CD10 и CD38 и нарастанием экспрессии CD20, эти три маркера оцениваются одновременно. Ядерная TdT(NuTdT) является маркером незрелости, который экспрессирован главным образом в Ти В-лимфоидных предшественниках, но вместе с тем определяется в 25% случаев ОМЛ. Этот маркер лишен линейной специфичности, он позволяет идентифицировать незрелых предшественников и в случаях асинхронности экспрессии может служить подтверждением злокачественной природы клеток.

Стадии созревания клеток В-ОЛЛ обычно определяются на основании CD10, CyIgμ, SmIgM, CyIgK и CyIgλ. В классификации ВОЗ (2008) выделяют про-В, общий (common) и пре-В иммуноподварианты В-ОЛЛ. В российской литературе вместо термина «общий» используется эквивалент наименования соответствующей стадии дифференцировки - пре-пре-В-ОЛЛ.

Аберрантная экспрессия ряда антигенов при В-ОЛЛ взаимосвязана со специфическими повторяющимися молекулярно-генетическими аномалиями. Так, BCR-ABL-позитивные В-ОЛЛ характеризуются, как правило, экспрессией миелоидных маркеров CD13 и CD33 в сочетании с CD34hi и CD38lo при отсутствии на мембране клеток антигена CD117. Кроме того, при обнаружении гена слиянияBCR-ABL при В-ОЛЛ нередко наблюдается экспрессия CD66c (KOR-Sa3544). Лейкозы с реаранжировкой MLL обычно имеют иммунофенотип

CD19+CD34+NuTdT+CD10- CD15±CD65±CD9+CD24-/частично+ с наличием характерной

(но неспецифичной) экспрессии NG2. В-ОЛЛ с наличием TEL-AML1 наряду с типичным иммунофенотипом В-линейных предшественников характеризуются отсутствием CD9 и CD66c. Напротив, при В-ОЛЛ с реаранжировкой гена Е2АРВХ1 фенотип пре-В клеток сочетается с выраженной экспрессией CD9. Оценка минимальной резидуальной болезни методом проточной цитометрии заняла прочное место в мониторинге эффективности лечения В-ОЛЛ. Маркеры,

позволяющие разграничить злокачественные клетки В-ОЛЛ от регенерирующих В- линейных предшественников, могут с успехом использоваться в определении минимальной резидуальной болезни. Дополнительную информацию дают CD123, CD21, CD81 и CD58. Несмотря на то что CD123 является главным маркером ЛИ, его экспрессия на бластах не является стабильной. Роль CD21 в определении аберрантности заключается в том, что он может быть экспрессирован на CD19+CD34+ злокачественных В-клетках, но отсутствует на нормальных В- линейных предшественниках. Молекула тетраспанина CD81 сильно экспрессирована на нормальных В-линейных предшественниках, но крайне слабо представлена в большинстве случаев (>80%) В-ОЛЛ. Особую роль в определении ЛИ играет молекула CD58, которая очень часто гиперэкспрессирована на бластных клетках В-ОЛЛ в сравнении с регенерирующими нормальными предшественниками В-клеток (например, гематогониями).

Медицинские книги

@medknigi

Иммунодиагностика острого лимфобластного лейкоза из Т-клеточных предшественников

Т-ОЛЛ - это гетерогенная группа злокачественных заболеваний, определяемая на основании размножения незрелых Т-клеточных предшественников, блокированных на определенных стадиях созревания, обычно отличающихся от нормальных образцов Т-клеточной дифференцировки.

Одной из главных задач в иммунодиагностике Т-ОЛЛ является обнаружение в крови или костном мозге больных незрелых Т-клеток. В норме Т-клеточное развитие происходит главным образом в тимусе, и обнаружение незрелых Т- клеток в периферической крови, костном мозге или тканях, иных, нежели тимус, уже само по себе аномально и часто достаточно для диагностики. Исключение составляют медиастинальные опухоли, при диагностике которых необходимо отличать нормальные тимоциты от злокачественных. Более того, необходима субклассификация Т-ОЛЛ в соответствии со стадиями дифференцировки клеток Т- линии и основными генетическими подгруппами. Большое количество соматических генетических маркеров вносят вклад в онкогенез Т-ОЛЛ. Некоторые из них сосуществуют (например, NUP214-ABL1 и гиперэкспрессия TLX1/TLX3) и могут встречаться в субклонах Т-ОЛЛ. В сравнении с В-ОЛЛ и ОМЛ при Т-ОЛЛ установлено сравнительно малое число иммунофенотипических профилей, взаимосвязанных с повторяющимися молекулярными аномалиями. В их числе частая, хотя и не постоянная и не являющаяся специфичной, перестройка CALMAF10 при CD2-негативных вариантах Т-ОЛЛ, которые могут быть TCRγδ+.Напротив, значительное количество молекулярных аномалий при Т-ОЛЛ ассоциированы с типичным блоком созревания Т-клеток и профилями генной экспрессии. Примером является сочетание гиперэкспрессии TLX1 с иммунофенотипом кортикальных тимоцитов. Несмотря на фенотипическое сходство между Т-ОЛЛ и нормальным тимическим созреванием, детальное многопараметровое иммунофенотипирование позволяет идентифицировать образцы белковой экспрессии, которые отличают Т-ОЛЛ от нормальных тимических аналогов.

В качестве каркасных маркеров в панели Т-ОЛЛ используются CD45, а также цитоплазматические и мембранные CD3. Сочетание этих маркеров позволяет легко идентифицировать бластные клетки и отграничить Т-клеточные предшественники от зрелых Т-лимфоцитов. Для этих целей не подходят весьма распространенные маркеры Т-ОЛЛ, такие как CD99, CD5 и CD7. Экспрессия CD99 наблюдается не при всех вариантах Т-ОЛЛ, может отсутствовать при более зрелых Т-ОЛЛ, кроме того, окрашивание этими антителами весьма слабое для отграничения бластных клеток от резидуальных нормальных Т-лимфоцитов. Антиген CD5 обычно экспрессирован при Т-ОЛЛ, но может быть слабым и негативным, в особенности на подклассе незрелых Т-ОЛЛ. CD7 экспрессирован практически во всех случаях, но не является линиеспецифичным.

Для установления стадии дифференцировки и дополнительного подтверждения Т- клеточной природы используются маркеры CD2, CD4, CD5, CD7, CD8, CD10, CD99,

Медицинские книги

@medknigi

TCRαβ, TCRγδ. Происхождение Т-ОЛЛ из предшественников подтверждают наличие TdT, CD1a, CD34 и CD99.

Маркеры миелоидной линии (CD13, CD33, CD117) экспрессированы главным образом при Т-ОЛЛ из ранних Т-клеточных предшественников. Большие сложности представляет дифференциальная диагностика Т-ОЛЛ с так называемыми лимфобластными лейкозами/лимфомами из NK-клеточных предшественников (NK-ОЛЛ). Использование CD56 может помочь в диагностике в подобных редких случаях. Вместе с тем разграничение NK-ОЛЛ и незрелых Т-ОЛЛ может быть сложным, так как по определению Т-ОЛЛ и в особенности незрелые случаи могут экспрессировать CD56. Являются ли эти лейкозы различными нозологическими единицами, остается неясным. Важно отметить, что Т-клеточные антигены, такие как CD2, CD7 и даже CD5 и cyCD3, могут быть экспрессированы при NK-ОЛЛ. Обнаружение миелоидных антигенов может быть полезным в диагностике незрелых Т-ОЛЛ в подобных ситуациях. Лейкозы из плазмоцитоидных дендритных клеток также могут экспрессировать Т-клеточные антигены (например, CD2, CD7). Помочь в дифференциальной диагностике могут cyCD3, CD4, CD123, и CD56, в меньшей степени - HLA-DR и CD45RA.

Подварианты Т-ОЛЛ диагностируют в соответствии со стадиями блока дифференцировки Т-клеток с учетом различной экспрессии ряда маркеров. Группа EGIL выделяет 4 различные стадии на основе CD2, CD3, CD5, CD7, CD8, CD1a, а также TCR.

Для определения стадии блока созревания в соответствии с нормальным тимопоэзом необходимо дополнительно использовать CyTCR| F1. На этой основе возможно определение трех стадий дифференцировки клеток Т-ОЛЛ: незрелые

(CyCD3+ CyTCR|F1 - smTCR -), пре-αβ (CyCD3+ CyTCR|F1+ SmTCR-), зрелые (CyCD3+ SmTCR+). Разделение Т-ОЛЛ на TCRγδ+ и TCRαβ + варианты имеет прогностическое значение. В панель включены также дополнительные маркеры

(CD44, CD45RA, HLA-DR, CD13, CD33 и CD123).

Прогностически неблагоприятный наименее зрелый подвариант Т-ОЛЛ характеризуется как CyCD3+ CD5lo CD1a-CD8 - с экспрессией стволовоклеточных или миелоидных маркеров CD34, CD117, HLA-DR, CD13 и CD33.

Как и при В-ОЛЛ, оценка ЛИ для последующего определения МОБ необходима уже при диагностике Т-ОЛЛ. В основном определение МОБ при Т-ОЛЛ основывается на определении маркеров Т-клеточных предшественников: CD34,

NuTdT, CD1a, CD10.

Иммунодиагностика острого миелобластного лейкоза и миелодиспластического синдрома

ОМЛ и МДС - это гетерогенные заболевания, при которых, в противоположность Т-ОЛЛ и В-ОЛЛ, в опухолевый процесс могут вовлекаться несколько клеточных линий на различных стадиях созревания. По этим причинам необходимо детальное иммуно-фенотипическое изучение нейтрофильной, моноцитарной, эритроидной

Медицинские книги

@medknigi

линий, а также плазмоцитоидных дендритных клеток, базофилов, тучных клеток и мегакариоцитов. Помимо линейной и стадийной принадлежности, устанавливается также аберрантная экспрессия лимфоидно-ассоциированных маркеров. Совокупность данных позволяет не только классифицировать ОМЛ, но и определять в ряде случаев родственные генетические аномалии. Так, острый промиелоцитарный лейкоз (ОПЛ) с транслокацией 15;17 в типичном случае имеет иммунофенотип промиелоцитов (CyMPO+ HLA-DR - , гетерогенно CD13+, гомогенно CD33 и CD117) с аномально низкой или полностью отсутствующей экспрессией CD15. Бластные клетки ОМЛ с транслокацией 8;21 часто коэкспрессируют CD19, а ОМЛ с inv(16) часто является CD2+.

Убольных с МДС роль проточно-цитометрического иммунофенотипирования не до конца ясна. В последние годы иммунофенотипирование учитывается как один из дополнительных критериев диагноза МДС. Множество работ указывают на наличие иммунофенотипических особенностей (аномалий) у абсолютного большинства больных с МДС, включая случаи с нормальной морфологией клеток.

Убольных с указаниями на ОМЛ на основании скрининга ОЛ (ОМЛ, острые лейкозы неоднозначной линейной принадлежности, опухоли из плазмоцитоидных дендритных клеток) необходимо использовать панель ОМЛ/ МДС. При клиническом или цитоморфологическом подозрении на МДС либо при наличии необъяснимых цитопений можно сразу использовать панель антител для диагностики ОМЛ/МДС.

При иммунодиагностике ОМЛ/МДС используются 4 каркасных маркера (HLA-DR, CD45, CD34, CD117), что позволяет эффективно (с высокой чувствительностью и специфичностью) обнаруживать бластные клетки в 88% случаев. Антигены CD11b и CD33 для этих целей оказались менее подходящими. Сочетанная экспрессия HLADR и CD117 имеет характерные ассоциации с четкими профилями созревания различных миелоидных линий. Наблюдается последовательная утрата CD34 и CD117 в HLA-DR-позитивных моноцитарных и дендритноклеточных предшественниках, а также CD34 и HLA-DR на CD117-позитивных созревающих предшественниках нейтрофилов и эритроцитов.

Иммунодиагностика ОМЛ и МДС является наиболее комплексной, для более подробного изучения клеток миелоидного ряда применяется 7 проб (табл. 6.3). Каждая из них имеет, помимо диагностической и классификационной целей, специфическое предназначение. Проба 1 характеризует нейтрофильное созревание. В пределах нейтрофильной линии маркеры CD10, CD11b, CD13 и CD16 экспрессированы как стадиеспецифические. В комбинации с каркасными маркерами они позволяют детально охарактеризовать созревание нейтрофилов от наиболее незрелых миелоидных бластных клеток до зрелых полинуклеарных нейтрофильных гранулоцитов. Аномалии экспрессии этих маркеров часто наблюдаются у больных ОМЛ и МДС.

Проба 2 характеризует моноцитарную дифференцировку. Маркер CD14 является типичным для моноцитов, однако он экспрессирован только на промежуточных и конечных стадиях созревания моноцитов. Напротив, рецептор CD64 (в меньшей степени

Медицинские книги

@medknigi

CD36) представлен на более ранних стадиях моноцитарной дифференцировки. Использование этих маркеров необходимо для идентификации клеток ранних стадий дифференцировки моноцитарного ряда. Экспрессия CD33 нарастает, начиная с ранних стадий моноцитарного развития до уровней более высоких, чем на гранулоцитарных клетках, что позволяет разграничивать клетки гранулоцитарной и моноцитарной линий. CD11b отсутствует на незрелых моноцитарных клетках, но экспрессирован на более поздних стадиях. В пробе 2 с диагностической целью используется IREM-2 (CD300e). Это новый маркер гликопротеиновой природы. Он представлен на клетках моноцитарной линии и миелоидной дендритноклеточной линии. В моноцитарном ряду CD300e экспрессирован на поздних стадиях созревания, после того как появляется выраженная экспрессия CD14. При ОМЛ CD300e обнаруживается практически только при моноцитарных лейкозах, причем экспрессия нарастает от монобластных к моноцитарным ОМЛ и хроническим миеломоноцитарным лейкозам (ХММЛ). В подгруппе этих лейкозов CD300e появляется раньше, чем CD14. CD36 информативен для характеристики клеток эритроидной дифференцировки, а кроме того, присутствует на CD64hiмоноцитарных предшественниках. По этим причинам CD64 используется в пробе, характеризующей моноцитарную дифференцировку, а CD36 - эритроидную. Рецептор CD35 (CR1) экспрессирован на эритроцитах, гранулоцитах, моноцитах и дендритных клетках, а также в ряде случаев ОМЛ. В сочетании с CyMPO он позволяет разграничивать ранние стадии созревания нейтрофилов и моноцитов.

Проба 3 характеризует дифференцировку клеток эритроидного ряда. Информативными для этих клеток являются CD235а (гликофорин А), CD71 и CD36. Гликофорин А экспрессирован как на незрелых эритроидных предшественниках, так и на зрелых эритроцитах. По этой причине он менее подходит для исследования цельного костного мозга или крови. Маркерами клеток эритроидного ряда являются CD233 (белок бэнд-3), CD238 (Kell) и CD105 (эндоглин). CD233 и CD238 не подходят для целей иммунодиагностики. CD36 и CD105 появляются в ходе эритроидной дифференцировки раньше, чем CD235a.

Экспрессия CD105 отмечается позже, чем CD71, повышается и затем исчезает вскоре после утраты мембранного рецептора CD117. Более зрелые эритроидные клетки не экспрессируют CD105. Напротив, экспрессия CD36 сохраняется на достаточно высоких уровнях на протяжении дифференцировки эритроидных клеток. Относительно экспрессии CD105 при ОМЛ данных мало, но аберрантная экспрессия маркера описана при МДС.

Проба 4 характеризует экспрессию лимфоидных маркеров на миелоидных клетках и аномалии созревания В-клеток. Наиболее частыми маркерами несвойственных линий являются CD19 при ОМЛ с t(8;21), а также CD7 и CD56. Определение ядерного маркера TdT дает информацию о предшественниках В-клеток, что особенно важно в случаях МДС. Обнаружение экспрессии CD7 на миелоидных предшественниках используется как дополнительный критерий дисплазии.

Проба 5 в панели ОМЛ/МДС разработана для углубленной характеристики стволовых клеток и включает маркеры аберрантности. Антиген NG2 в норме отсутствует на гемопоэтических клетках, однако выявляется при ОМЛ с

Медицинские книги

@medknigi

реаранжировкой гена MLL (примерно 10%) и редких лейкозах из плазмоцитоидных дендритных клеток (<1%). Экспрессия CD15 начинается с ранних стадий гранулоцитарного созревания, слабая экспрессия антигена отмечается на зрелых моноцитах. CD38 отчетливо представлен на большинстве миелоидных клеток, но отсутствует на ранних стволовых (CD34+) клетках. Этот антиген включен в панель ОМЛ/МДС с целью определения пропорции стволовых клеток в лейкозном клоне, что имеет прогностическое значение. Экспрессия CD22 при ОМЛ является довольно редкой (<5%), и вполне возможно, что эти случаи в действительности соответствуют лейкозам из предшественников базофилов, тучных или дендритных клеток. Главной причиной включения CD22 в панель ОМЛ/МДС явилась необходимость использования дополнительного В-клеточного маркера после использования CD19, CyCD79a и CD10.

Проба 6 характеризует мегакариоциты/мегакариобласты, базофилы, тучные клетки

иплазмоцитоидные дендритные клетки. Целесообразно объединять в пробе CD42

иCD61, меченные одним флуорохромом, для наибольшей точности обнаружения ранних стадий мегакариоцитарной дифференцировки. Если лейкозные клетки экспрессируют CD42a или CD61, необходимо дальнейшее подтверждение мегакариоцитарной природы с использованием CD41 и CD42b. CD203c является уникальным маркером, позволяющим идентифицировать CD117hi тучные клетки. CD203c представлен также на базофилах, слабоположительных по CD117. Оценка рецептора CD123 в сочетании с каркасным маркером HLA-DR позволяет идентифицировать плазмоцитоидные дендритные клетки (CD123+HLA-DR+) и базофилы (CD123+HLA-DR-). CD4 экспрессирован на плазмоцитоидных дендритных клетках и на моноцитах.

Проба 7 в панели иммунодиагностики ОМЛ/МДС предназначена для углубленной характеристики мегакариобластных лейкозов и системного мастоцитоза. Используются специфические маркеры мегакариоцитарной линии CD41 и CD42b. Дополнительную информацию дает маркер CD9, который хотя и характеризуется широким спектром экспрессии, но в пределах мегакариоцитарной линии появляется на ранних предшественниках. Рецептор CD25 также экспрессирован на ранних стадиях созревания мегакариоцитов. Кроме того, антитела CD25 позволяют определить иммунофенотипически аберрантные тучные клетки при системном мастоцитозе и подозрении на хронический эозинофильный лейкоз (возможно, в комбинации с ОМЛ или МДС).

Иммунодиагностика зрелоклеточных (периферических) лимфом и плазмоклеточных опухолей

Лимфомы из периферических В- и Т-лимфоцитов, NK-клеточные лимфопролиферативные заболевания, опухоли из плазматических клеток - все эти опухолевые процессы нуждаются в иммунологической верификации и диагностике специфических вариантов. На первом этапе осуществляется скрининг, определение того, к какой линии дифференцировки относятся клональные лимфоциты (табл. 6.3). Используются 12 антител, позволяющих установить Т-, В-

Медицинские книги

@medknigi