7. Санитарно-бактериологическое

ИССЛЕДОВАНИЕ ВОДЫ

При санитарно-гигиенической оценке воды имеют в виду прежде всего патогенные микроорганизмы. Однако обнаружить их даже в заведомо инфицированной воде очень трудно. Поэтому при бактериологическом контроле обычно пользуются косвенным методом, определяя микробное число, число термотолерантных колиформных бактерий, колифагов, спор сульфитредуцирующих клостридий, цист лямблий.

Считается, что чем значительнее загрязнена вода, тем больше в ней сапрофитной и кишечной микрофлоры и наоборот.

7.1.Определение общего количества бактерий в воде

Микробным числом называют количество колоний, выросших в чашках Петри на МПА из 1 мл воды при температуре 37± 0,5°С в течение 24 часов.

Цель занятия: познакомиться с ветеринарно-санитарными микробиологическими методами исследования и оценки воды.

Реактивы и оборудование: воронки Гольмана; ручной насос Штинца; колба Бунзена; бумажные фильтры (беззольные); 20-30% раствор соляной кислоты; стерильные пипетки на 1 мл; чашки Петри; питательные среды накопления; мясопептонный агар с розиловой кислотой; микроскоп.

Для отбора проб используют простерилизованные стеклянные бутылки с пробками (пробки стерилизуют отдельно). Если проба воды содержит какое-то количество остаточного хлора, то последний будет продолжать воздействие на любые микроорганизмы и зародыши гельминтов, присутствующие в пробе. Это означает, что при анализе такой пробы результаты будут искажены. В этом случае к пробе воды добавляют гипосульфит натрия, который немедленно инактивирует весь остаточный хлор, но не влияет на микробы и зародыши гельминтов. Консервации вода не подлежит. Идеальная температура хранения проб 4-5° С. Исследование должно быть проведено в кратчайшие сроки.

При определении микробного числа доставленную пробу воды тщательно перемешивают, стараясь не смачивать пробку. Стерильными пипетками набирают воду для посева в чашки Петри, желательно для каждой чашки использовать отдельную пипетку. В крайнем случае можно пользоваться одной пипеткой при условии, что посев начинают с больших разведений.

Воды с небольшим загрязнением достаточно от 1 до 0,1 мл. Воду со значительным загрязнением разводят перед посевом стерильной водой. Для этого в пробирку с 9 мл стерильной воды вносят 1 мл исследуемой пробы воды и тщательно перемешивают, получая первое разведение 1:10. После этого 1 мл воды первого разведения вносят во вторую пробирку и получают разведение 1:100. Так поступают до получения необходимого разведения (каждый раз берут новую стерильную пипетку). Из пробы исследуемой воды должно быть сделано не менее двух разведений в зависимости от степени ожидаемого загрязнения.

Отобранное количество воды вносят в чашку, слегка приподняв крышку. Одновременно ставят в водяную баню (45°С) пробирки с мясопептонным агаром для расплавления и выливают в чашку с исследуемой водой. Вращательным движением смешивают воду с агаром и ставят чашки на горизонтальной плоскости для застывания (на чашке делают пометки о пробе восковым карандашом). Чашки после застывания помещают в термостат крышками вниз при 37° С на 24 часа.

Пробы воды из открытых водоемов засевают в две чашки, которые помещают в другой термостат при 20° С на 48 часов.

Подсчитывают колонии с помощью лупы и по всей площади чашки. Если в чашке выросло свыше 300 колоний и нет посевов других разведений, можно использовать счетную пластинку. Для этого чашку с колониями ставят под стекло, сняв крышку, или вверх дном, подсчитывают колонии в 12 квадратах (в четырех центральных и в двух, расположенных по четырем углам счетной пластинки). После этого определяют содержание микроорганизмов в 1 мл исследуемой воды.

Пример расчета. Для посева было взято 0,5 мл воды. Площадь чашки 78,5 см. В 12 квадратах выросло 84 колоний, а на всю площадь чашки 78,5×7 = 549,5. Следовательно, в 1 мл исследуемой воды будет содержаться 549,5×2 = 1099 микробов.

По СанПиН(у) 2.1.4.1074-01 §3 пункт 3: «безопасность питьевой воды в эпидемиологическом отношении определяется её соответствием нормативам по микробиологическим и паразитологическим показателям», представленным в табл. 13.

Таблица 13

Нормативы эпидемиологической безопасности питьевой воды

Показатели	Единицы измерения	Нормативы
Термотолерантные колиформные бактерии	число бактерий в 100 мл	отсутствие
Общие колиформные бактерии	число бактерий в 100 мл	отсутствие
Общее микробное число	число образующих колоний бактерий с 1 мл	не более 50
Колифаги	число бляшкообразующих единиц (БОЕ) в 100 мл	отсутствует
Споры сульфитредуцирующих клостридий	число спор в 20 мл	отсутствие
Цисты лямблий	число цист в 50 л	отсутствие