1. Матеріали методичного забезпечення теми

1.1. Завдання для перевірки вихідного рівня знань,вмінь

1. Головні напрямки обміну вуглеводів.

2. Хімізм фосфорилювання вуглеводів.

3. Принцип методу визначення «in vitro» процесу гліколізу,вивчення кінцевих продуктів.

4. Принцип проби на спиртове бродіння.

1.2 Зміст лабораторної работи

1. Відтворення in vitro процесу спиртового бродіння.

2. Відтворення in vitro процесу гліколізу.

Принцип метода. В основі методів лежить бродіння гликози під дією її окислення м’язевою кашкою у анаеробних умовах. Кінцевий продукт бродіння - СО₂ накопичується у вигляді газу і поглинається потім лугом. Кінцевий продукт гліколізу - молочна кислота - виявляється за допомогою реактиву Уфельмана.

Хід роботи: А. Проба на спиртове бродіння:

1.Приготування реакційної суміші:

1 г пекарських дріжджів розтирають в ступці постійно додаючи 5% розчин глюкози (близько 30 мл.). Одержану рідину вносять в бродильну трубку таким чином, щоб верхнє коліно було повністю заповнене, а в області розширення залишалось трішки рідини.

2. Термостатування проби:

Бродильну трубку поміщають до термостату на 40 хвилин.

3. Спостереження за бродінням:

Спостерігають видділенням СО₂ необхідно до трубки додати 2-3 мл 10% розчину NaОН і щільно закривають отвір трубки м’якішем великого пальця, після чого трубку декілька разів перевертають, перемішуючи її вміст СО₂ поглинається лугом і м’якіш пальця всмоктується до отвору трубки.

4. Виявлення етанолу:

Для виявлення етанолу частину вмісту трубки відбирають (3-5 мл) фільтрують через ватяний фільтр, перевіряють рН (якщо фільтрат кислий, то його підлужують NаОН до слабколужної реакції) додають декілька краплин розчину йоду і легенько нагрівають. Утворюється характерний запах йодоформу.

Б. Проба на гліколіз

1. Приготування реакційної суміші:

М’язи тварин (1г) розтирають в ступці із скляним піском, додаючи 2-3 мл фосфатного буферу з вмістом глюкози. У дві пробірки наливають по 3 мл цього ж буферу. В першу пробірку (контрольну) додають 1 мл 20% розчину ТХО для осадження білків і закінчення ферментативних процесів. В обидві пробірки додають по 0,5 мл м’язевої кашки, закривають їх пробками.

2. Термостатування:

Обидві пробірки розміщують в термостаті на 45 хвилин про 30^о С. Перед закінченням інкубації готують дві пробірки.

3. Проведення реакції Уфельмана:

В приготовлені пробірки наливають по 10 краплин 1% розчину реактиву Уфельмана. Вміст інкубаційних пробірок фільтрують через ватяний фільтр, після чого 0,5 мл фільтрату по краплинам додають до реактиву Уфельмана. Спостерігають зміну забарнення від фіолетового до жовто-зеленого кольору в дослідній пробі.

ВИСНОВОК ТА МЕДІКО-БІОЛОГІЧНА ОЦІНКА ОДЕРЖАНИХ РЕЗУЛЬТАТІВ

1.3. Запитання для перевірки кінцевого рівня знань

1. Напишіть послідовність реакцій гліколізу.

2. Покажіть реакції утворення АТФ в анаеробних умовах.

3. Чим відрізнається процес бродіння від гліколізу.

4. Напишіть послідовність реакцій бродіння.

5. В яких тканинах організму відбувається гліколіз.

6. Назвіть ключовий фермент гліколізу.

7. Назвіть пробу на гліколіз. Назвіть пробу на бродіння.

8. Назвіть кінцеві продукти анаеробного гліколізу.

9. Назвіть методи за яким чином можна виявити кінцеві продукти анаеробного гліколізу.

1.4 Тестові завдання до теми (вибрати з тестових завдань до модульного контролю)

Наступна тема 13. Глікогеноліз,регуляція. Відмінності від гліколізу. Етапи аеробного окислення глюкози : окислювальне декарбоксилування пірувату. Біоенергетика процесу. (2 год).

Лабораторна работа Визначення вмісту пірувата в сироватці крові.

Мета заняття:

Студент повинен знати:

- реакції гліколіза

- характеристику окремих класів ферментів і коферментів гліколіза

- різницю між аеробним та анаеробним окисленням

- структуру піруватдегідрогеназного комплексу

- послідовність реакцій складного окислювального декарбоксилування пірувату

- регуляція активності піруватдегідрогеназного комплексу

- фізіологічний механізм компенсації «кисневої заборгованості»

- перетворення лактату в піруват і окислення відновленного НАДН₂

- зміни рівня лактату,пірувату і артеріо-венозної різниці при гіпоксії органу

- різницю між гліколізом та глікогенолізом

- розрахунок енергетичної цінності аеробного гліколізу та глікогенолізу

- принцип методу визначення рівня лактату і пірувату в сироватці крові.

Студент повинен вміти :

- визначити вміст пірувату в сиворотці крові за методом Умбрайоу.