Тема 32. Біосинтез гліцерину, вжк та гліцеридів. Утворення фосфоліпідів (2 години).

Лабораторна робота

Визначення загальних ліпідів в сироватці крові за методом Банга

1.Матеріали методичного забезпечення теми

1.1.Завдання для самоперевірки вихідного рівня знань, вмінь

1.Які компоненти необхідні для біосинтезу простого жиру - тригліцерину?

2.Як називається активна форма гліцерину? Напішіть формулу.

3.Як називається активна форма вищих жирних кислот?

4.Які Вам відомі джерела утворення гліцерину в організмі?

5.Які компоненти необхідні біосинтезу фосфоліпідів – лецитину та кефалину?

1.2. Контрольні запитання

1. Пояснити необхідність і механізм транспорту ацетил-КоА із мітохондрій в цитоплазму.

2. Написати хімізм утворення малоніл-КоА, пояснити роль активного СО₂ в цьому процесі.

3. Будова мультіферментного комплекса “синтетаза вищих жирних кислот”.

4. Написати етапи біосинтеза насиченої вищої жирної кислоти:

А) зв`язування ацетил-КоА з АПБ;

Б) зв`язування малоніл-КоА зАПБ;

В)конденсація ацил- з малоніл- похідних на АПБ;

Г) відновлення β-кето-бутирил-АПБ;

Д) дегідротація β-гідроксібутирил-АПБ;

Е) відновлення єноіл-АПБ з наступним подовженням вуглецевого ланцюга бутирил- АПБ.

5. Написати рівняння ферментативних реакцій утворення активної форми гліцерину в жировій ткані і в печінці.

6. Написати схеми реакцій синтезу моно- і поліненасиченихвищих жирних кислот (олеїнової, арахідонової кислот).

7. Написати реакціі синтеза фосфатидної кислоти з подальшим утворенням тригліцериду.

2. Зміст лабораторної роботи

Визначення загальних ліпідів в сиворотці крові за методом Банга.

Принцип методу

Визначення загальних ліпідів в сироватці крові проводиться після їх екстрагування спиртом з єфіром. На подальших етапах визначення ліпідів піддають окисленню біхроматом калію з наступним йодометричним тітруванням біхромату, розчином гіпосульфіту натрія в дослідній і контрольних пробах. По різниці між кількістю мілілітрів гіпосульфіту натрію, які пішли на тітрування контрольних і дослідних проб (К - Д), за формулою розраховують кількість загальних ліпідів в крові, яка в нормі скаладає 350-800 мг/100 мл., або 3,5 - 8,0 г/л сироватки.

Основні етапи виконання роботи.

Екстракція ліпідів за Блюром: до 4 мл спирту з ефіром /3:1/ прибавити по краплям 0,2 мл сироватки крові. Нагріти на пісчаній бані 15хв. фільтрувати через паперовий фільтр, який промивають 1мл суміші спирту з ефіром і доводять об'ємом до 15 мл.

Примітки: В нормі канцетрацію загальних ліпідів 3.5 - 8.0 г на літр сироватки крові або 350-800мг/на 100мл сироватки/.

В пробірку налити 2,5мл фільтрату, відповідає 0,1 мл сироватки крові, добавити 1,0 мл 1% розчину їдкого натрію і нагрівати на пісчаній бані до зникнення запаху ефіру. Контрольна проба замість сироватки крові містить 1,5 мл води і 1 мл 1% розчину гідроксиду натрію.

Примітка: Все вище перелічене виконує учбова лабораторія.

2. Окислення ліпідів біхроматом. Після видалення ефіру до фільтрату прибавте 2 мл 0,1н розчину біхромату калію і 3 каплі концентрованої сірчаної кислоти. Пробірку помістіть на кіп'ячу водяну баню на 15 хв., після нагрівання, в пробірку долийте обережно води, перенесіть всю рідину в колбу і добавте до 100мл дистильованої води.

3. Йодометричне тітрування біхромату. Прибавте 2 мл розчину йодистого калію, 2 краплі 1% розчину крахмалю і відтітруйте вміст колб 0,01н розчином гіпосульфіту натрію до блідо - зеленого кольору. Паралельно з дослідною пробою поставте контроль, де замість сироватки крові візьміть 1,5 мл води і 1 мл 1,0% розчину їдкого натрію. Різниця між контролем і дослідом поділена на 2,45 відповідає кількості в мг ліпідів в крові.

Контр - дослід

Розрахунок: • 10,000 г/л

2,45

Зробіть розрахунок і дайте медико - біологічну оцінку результату.

Медико-біологічна оцінка отриманих результатів.

Збільшення вмісту загальних ліпідів у крові (гіперліпемія) - фізіологічне явище, яке настає через 1 - 3 години після прийняття харчів. Це так звана алімінтарна гіперліпемія, яка у здорових людей тимчасова.

При цукроваму діабеті, одночасно з гіперглікемією, має місце і гіперліпемія (от 500 - 1000 мг і більше / 100 мл)

При гострих гепатитах гіперліпемія є постійним явищем, особливо при наявності жовтяниці.

При гострих і хронічних ніфритах, що супроводжуються набряками, кількість ліпідів в крові підвищена.

При ліпоідному ніфрозі збільшення кількості ліпідів в крові досягає 1000 мг і більше /100мл.

При хронічному недоїданні і голодуванні кількість загальних ліпідів в крові збільшена за рахунок мобілізаціі жиру з жирових депо.

3. Запитання до кінцевого рівня знань студентів.

1. Написати сумарне рівнення біосинтеза пальмітинової кислоти.

2. Скільки відновлених конферментів НАДФНН⁺ необхідно для синтезу стеаринової кислоти?

3. Яка кількість малоніл-КоА необхідна для синтезу стеаринової кислоти?

4. Які процеси обміну вуглеводів зав'язані з біосинтезом жирних кислот?

5. Поясніть механізм утворення жиру при надлишковому вживанні вуглеводів.

6. На прикладі біосинтеза фосфоліпідів покажіть взаємозвязок між обміном ліпідів і білків.

4.Тестові завдання до теми:

1. Які речовини здійснюють транспорт ацетил –КоА з мітохондрій в цитоплазму?

А- цитрат, карнитин

В – малоніл- КоА,бутирил -КоА

С – малат, лактат

D – ацил – КоА, ацетоацетил - КоА

Е – карнозин, ансерин

2. В частині клітини відбувається біосинтез ВЖК?

А - мітохондрія;

В - мікросоми;

С - ядро;

D - рибосоми;

Е - ендоплазматичний ретикулум цитоплазми

3. Який процес являєтся джерелом НАДФН₂ для синтезу ВЖК?

А- мітохондріальне окислення

В –окислення глюкозо – 6 - фосфату пентозофосфатним шляхом

С – окислення пірувату до ацетил -КоА

D – окислення глюкози до лактату

Е – окислення кетоглутарату

4. В яких тканинах не відбувається біосинтез тригліцеролів?

А- м’язи

В – кишечник

С – жирова тканина

D –печінка

Е – молочна залоза в період лактації

5. Назвіть фермент, який каталізує утворення активної форми гліцерола тільки в печінці.

А - диоксиацетонфосфатдегідрогеназа

В - гліцеролфосфатдегідрогеназа;

С - гліцеролфосфаттрансфераза;

D - гліцеролацилтрансфераза;

Е – гліцеролфосфокіназа.

6. Від якої сполуки значно залежить ліпогенез у жировій тканині?

А - малонат

В - глюкоза;

С - амінокислоти;

D - піровиноградна кислота;

Е - фосфорна кислота

7. Який фермент біосинтезу ВЖК є біотинвмісним:

А – ацетил- трансацетилаза

В – ацетил – КоА- карбоксилаза

С – β-кетоацил –АПБ-редуктаза

D – β –гідроксибутирил – АПБ- дегідратаза

Е – еноїл – АПБ – редуктаза

8. При введенні піддослідним щурам речовини А, міченої по вуглецю, мітка включається в гліцеролфосфоліпіди й тригліцериди, таким чином А є загальним попередником у біосинтезі цих ліпідів. Назвіть речовину А.

А –метионін;

В - етаноламін;

С – холін; D – цитозинтрифосфат;

Е - фосфатидна кислота.

10. Яка амінокислота виконує функцію метилюючого агента при біосинтезі фосфоліпідів?

А- треонін

В – метионін

С – серин

D – цистеїн

Е – аланін

Наступна тема: «Обмін ацетооцтової кислоти. Кетонові тіла»