- •Тема 1. Введение. Предмет и задачи микробиологии. Классификация микроорганизмов
- •Основы бактериологии
- •Тема 2. Основы морфологии бактерий.
- •Размер бактерий
- •Основы бактериологии
- •Тема 3. Физиология и биохимия бактерий. Строение и классификация грибов.
- •Тема 4. Знакомство с микробиологической лабораторией. Микроскопические методы исследования морфологии бактерий и грибов.
- •Ема 5. Бактериологические методы исследования.
- •Тема 9. Паразитологические методы исследования. Лабораторная диагностика инвазий.
- •Тема 10
- •Тема 11. Вирусологические методы исследования.
- •Тема 12. Генетика микроорганизмов и генная инженерия в медицинской микробиологии
- •Влияние факторов окружающей среды на микроорганизмы
- •Тема 13. Основы экологической микробиологии. Микрофлора тела здорового человека.
- •Значение микрофлоры тела для человека
- •Влияние факторов окружающей среды на микроорганизмы
- •Тема 14. Действие физических, химических и биологических факторов внешней среды на микроорганизмы.
- •Влияние факторов окружающей среды на микроорганизмы
- •Тема 15. Микробиологические основы химиотерапии и химиопрофилактики инфекционных болезней.
- •Асептика
- •Тема 16. Методы стерилизации и дезинфекции. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.
- •Методы стерилизации и дезинфекции в микробиологической лаборатории.
- •Лабораторная диагностика дисбактериоза
- •Тема 17. Учение об инфекции. Патогенность микроорганизмов.
- •Факторы вирулентности вирусов
- •Тема 17. Учение об инфекции. Патогенность микроорганизмов.
- •Основы эпидемиологии
- •Тема 18. Основы эпидемиологии. Основы клинической микробиологии.
- •Тема 19. Микробиологические основы борьбы с внутрибольничными инфекциями.
- •Основы иммунологии
- •Тема 20. Понятие об иммунологии. Неспецифические факторы защиты организма человека.
- •Структура иммунной системы
- •Тема 20. Понятие об иммунологии. Неспецифические факторы защиты организма человека.
- •Структура иммунной системы
- •Тема 21. Антигены.
- •Тема 22. Иммунная система организма человека. Антитела.
- •Тема 23. Формы иммунитета. Виды иммунитета.
- •Регуляция иммунного ответа
- •Основы клинической иммунологии
- •Тема 24. Клиническая иммунология: аллергия, иммунодефицитные состояния.
- •Реакции гиперчувствительности (аллергические)
- •Аутоиммунная патология
- •Иммунодефицитные состояния
- •Оценка иммунного статуса человека
- •Основы иммунодиагностики
- •Тема 25. Применение реакции антиген-антитело в медицинской практике (иммунодиагностика).
- •Иммуномикробиологические исследования
- •Тема 26. Иммуномикробиологические исследования. Реакции агглютинации и преципитации.
- •Иммуномикробиологические исследования Серологические реакции в микробиологических и иммунологических лабораториях используют в двух целях:
- •Иммунологические реакции выявления специфических антигенов
- •Условные обозначения: - торможение гемагглютинации (пуговка) ; - гемагглютинация (зонтик).
- •Определение групп крови аво
- •9. Реакция гемагглютинации (рга)
- •Тема 27. Реакции связывания комплемента. Риф и ифа.
- •Реакция связывания комплемента
- •Метод флюоресцирующих антител (мфа) или реакции иммунофлюоресценции (риф)
- •Иммуноферментный анализ (ифа)
- •Основы иммунопрофилактики
- •Тема 28. Основы иммунотерапии и иммунопрофилактики.
- •Иммунотропные лекарственные средства
- •Специфическая иммунопрофилактика и иммунотерапия вакцины
- •Иммунные сыворотки и иммуноглобулины
- •Основы иммунопрофилактики
- •Тема 29. Изучение препаратов, применяемых для иммунопрофилактики и иммунотерапии.
- •Вакцинопрофилактика
- •Серопрофилактика и серотерапия
- •Определение пригодности иммунобиологических препаратов
- •Тема 30. Основы иммунологии.
Тема 27. Реакции связывания комплемента. Риф и ифа.
Содержание:
Реакция связывания комплемента.
Иммунофлюоресцентный метод.
Иммуноферментный анализ.
Реакция связывания комплемента
Реакция протекает в две фазы. Первая фаза - взаимодействие антигена и антител при обязательном участии комплемента. Вторая - выявление результатов реакции при помощи индикаторной гемолитической системы (эритроциты барана и гемолитическая сыворотка). Разрушение эритроцитов гемолитической сывороткой происходит только в случае присоединения комплемента к гемолитической системе. Если же комплемент адсорбировался ранее на комплексе антиген-антитело, то гемолиз эритроцитов не наступает. Результат опыта оценивают, отмечая наличие или отсутствие гемолиза во всех пробирках. Реакцию считают положительной при полной задержке гемолиза, когда жидкость в пробирке бесцветна и эритроциты оседают на дно, отрицательной - при полном лизисе эритроцитов, когда жидкость интенсивно окрашена («лаковая» кровь). Степень задержки гемолиза оценивают в зависимости от интенсивности окраски жидкости и величины осадка эритроцитов на дне (++++, +++, ++, +).
Рис. 1. Схема реакции связывания комплемента.
Рис. 2. Постановка и результат РСК.
Выводы: В исследуемой сыворотке выявлены антитела.
РСК позволяет выявить антитела к любому штамму одного и того же серотипа вируса. Диагностическое значение имеет четырехкратное увеличение титра антител в парных сыворотках (в период эпидемии гриппа) и двукратное нарастание в сыворотках крови больных при характерной клинической картине.
Рис. 3. Серодиагностика с парными сыворотками.
Выводы: В парных сыворотках больного выявлено четырехкратное увеличение титра антител к вирусу гриппа А.
Метод флюоресцирующих антител (мфа) или реакции иммунофлюоресценции (риф)
Иммунофлюоресцентный метод является методом выбора для быстрого выявления и идентификации неизвестного микроорганизма в исследуемом материале. Аг + АТ + электролит = светящийся в УФ - лучах комплекс Микроб сыворотка, меченная флюорохромом Часто используют краситель изотиоционат флюоресциина - ФИТЦ При исследовании этим методом используют люминесцентный микроскоп.
Постановка Р И Ф
На мазок наносят 30 мкл раствора ФИТЦ-меченных антител.
Помещают стекло во влажную камеру и выдерживают при комнатной температуре в течение 20-25 мин, или в термостате при 37° С в течение 15 мин.
Промывают стекло в проточной водопроводной воде 2 мин, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают на воздухе.
На высушенный мазок наносят каплю монтирующей жидкости, мазок накрывают покровным стеклом и микроскопируют с использованием люминесцентного микроскопа или люминесцентной насадки к обычному оптическому микроскопу.
Рис. 4. Пневмококки, выявленные РИФ (люминесцентная микроскопия).
Иммуноферментный анализ (ифа)
Иммуноферментный анализ или метод – выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом-меткой. После соединения антигена с меченной ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат-хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и изменяется цвет продукта реакции – интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител. ИФА применяют для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных болезней, в частности для диагностики ВИЧ-инфекций, гепатита В и др., а также определения гормонов, ферментов, лекарственных препаратов и других биологически активных веществ, содержащихся в исследуемом материале.
Рис. 5. Иммуноферментный анализ (ИФА) (схема).
Рис. 6. Результат ИФА. Желтый цвет раствора в лунке яляется положительным результатом.