Структура занятия.

1. Теоретическая часть:

1. Повторение теоретического материала по теме «Химия и обмен углеводов».

2. Вводное слово преподавателя.

К ферментным методам определения концентрации глюкозы в сыворотке крови относится глюкозооксидазный. Под действием фермента глюкозооксидазы глюкоза окисляется кислородом воздуха до глюконовой кислоты с образованием в ходе реакции перекиси водорода, которая вступает в реакцию с 4-аминофеназоном и фенолом под действием пероксидазы с образованием окрашенного продукта квининомина.

Определить концентрацию глюкозы глюкозооксидазным методом можно используя наборы реактивов различных фирм «Абрис+», «Ольвекс-диагностикум», «Био-Ла-Тест». Перед выполнением анализа готовятся рабочие растворы согласно указаниям в инструкции.

2. Указания к занятию:

1. Подготовьте рабочее место.

2. Внимательно изучите инструкцию.

3. Осмыслите ход выполнения лабораторной работы.

4. Соблюдайте меры предосторожности в работе с реактивами, с кровью и мочой, с приборами.

5. При работе с пипетками используйте резиновую грушу с переходником.

6. Работайте в перчатках.

7. Используйте дезсредство: 3% раствор хлорамина.

3. Практическая часть.

1. Используя набор реактивов фирмы «Био-Ла-Тест» приготовить глюкозный реактив:

Содержимое одного флакона с реактивом 3 (буфер-хромоген) и одного с реактивом 4 (смесь ферментов: глюкозооксидаза, пероксидаза, аминофеназон) количественно растворить в 100 мл дистиллированной воды и перемешать. Реактив устойчив в течение 1 месяца при температуре (+2 – +8)ºС.

Раствор глюкозы готов к использованию.

Эталонный раствор содержит глюкозу 10 ммоль/л.

2. Лабораторная работа № 1. Определение концентрации глюкозы в сыворотке крови и моче глюкозооксидазным методом (используется набор «Био-Ла-Тест»).

ПРИНЦИП: глюкоза окисляется кислородом при каталитическом действии фермента глюкозооксидазы с образованием перекиси водорода и глюконата. Возникшую перекись водорода определяют по реакции окислительного азосочетания производного фенола с 4-аминофеназоном, катализируемой пероксидазой.

глюкозооксидаза

Глюкоза + О₂ + Н₂О глюконовая кислота + Н₂О₂

пероксидаза

2Н₂О₂ + 4-аминофеназон + фенол квининомин + 4 Н₂О

Реактивы: 1) стандарт глюкозы – раствор 10 ммоль/л; 2) антикоагулянт – натрий хлористый, натрий ЭДТА, натрий фторид; 3) Буфер-хромоген – 4-хлор-3-метилфенол – 0,6 ммоль, NаК – фосфатный буфер, детергент; 4) смесь ферментов – глюкозооксидаза – 66,6 мккат, пероксидаза – 16,6 мккат, 4-аминофеназон – 0,7 ммоль.

Материал для исследования: сыворотка крови, моча.