Фармакопейный анализ. Количественное

ВЭЖХ

Хроматографическое определение фолиевой кислоты

•Предельное содержание примесей:

•примесь А (N-[(4-аминобензоил)-L-глутаминовая кислота, не более 0,5 %): на хроматограмме испытуемого раствора площадь пика, соответствующего примеси А, не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (d);

•примесь D (птероевая кислота, не более 0,6 %): на хроматограмме испытуемого раствора площадь пика, соответствующего примеси D, не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме

раствора сравнения (е);

ВЭЖХ

Хроматографическое определение фолиевой кислоты

•Предельное содержание примесей:

•любая другая примесь (не более 0,5 %): на хроматограмме

испытуемого раствора площадь любого пика, кроме основного и пиков примесей А и D, не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (с);

•сумма других примесей (не более 1,0 %): на хроматограмме

испытуемого раствора сумма площадей всех пиков, кроме основного и пиков примесей А и D, не должна превышать 2-кратную

площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (с).

•На хроматограмме испытуемого раствора не учитывают пики с

площадью менее 0,1 площади основного пика на хроматограмме

раствора сравнения (с) (0,05 %).

Ионообменная хроматография

Особенности

•В качестве подвижной фазы в ионообменной хроматографии (обратимый обмен между ионами анализируемого раствора и ионогенными группами носителя) используют ионообменники (иониты), представляющие собой высокомолекулярные вещества природного или синтетического происхождения.

•Ионообменники бывают двух типов: аниониты (анионообменники) и

катиониты (катионообменники). Аниониты являются высокомолекулярными полизарядными веществами, способными обмениваться анионами с раствором анализируемого электролита. Катиониты способны обмениваться катионами с раствором анализируемого электролита.

•Данный метод применяется главным образом для разделения

электролитов и аминокислот. Этим методом проводят количественное определение натрия цитрата для инъекций.

Ионообменная хроматография

Пример

•ионообменного разделения двух аминокислот – глутаминовой кислоты и гистидина с использованием сильнокислотного ионообменника

Тонкослойная хроматография

Особенности

•по умолчанию хроматографическое разделение выполняют восходящим способом в насыщенной атмосфере

•предпочтительнее использовать такие подвижные

фазы, которые обеспечивают величины Rf испытуемых соединений в пределах от 0,3 до 0,7

•Идентификация. Основное пятно на хроматограмме, полученной для испытуемого раствора, сравнивают визуально с соответствующим пятном на хроматограмме, полученной для раствора стандартного образца (раствора сравнения), сравнивая окраску (цвет флуоресценции), размер и величину удерживания (Rf) обоих пятен.

Тонкослойная хроматография

Пригодность системы

•на хроматограмме раствора сравнения, используемого для проверки пригодности хроматографической системы, четко

разделяются пятна указанных в ЧС веществ;

•величина Rf основного пятна на хроматограмме испытуемого раствора должна быть близка, указанной в ЧС;

•на хроматограмме раствора сравнения, используемого для проверки чувствительности хроматографической системы, должно быть четко видно пятно.

Тонкослойная хроматография

Определение фолиевой кислоты методом ТСХ

•Пластинка: ТСХ пластинка со слоем силикагеля G Р.

•Подвижная фаза: раствор аммиака концентрированный Р — пропанол Р — 96 % спирт Р

(20:20:60, об/об/об).

•Наносимый объем пробы: 2 мкл.

•Фронт подвижной фазы: не менее 3/4 высоты пластинки.

•Высушивание: на воздухе.

•Проявление: пластинку просматривают в ультрафиолетовом свете при длине волны 365 нм.

Тонкослойная хроматография

Определение фолиевой кислоты методом ТСХ

•Испытуемый раствор. 50 мг испытуемого образца растворяют в смеси из раствора аммиака концентрированного Р и метанола Р (2:9, об/об) и доводят до объема 100 мл этой же смесью растворителей.

•Раствор сравнения. 50 мг ФСО фолиевой кислоты растворяют в смеси из раствора аммиака концентрированного Р и метанола Р (2:9, об/об) и доводят до объема 100 мл этой же смесью растворителей.

Тонкослойная хроматография

Количественное определение

•измерение интенсивности отраженного света

•измерение интенсивности поглощенного света

•измерение интенсивности флуоресценции

•измерение радиоактивности

! с использованием стандартных образцов

• Feature 1

Спасибо за внимание• Feature 2 !

• Feature 3