Фармацевтический анализ. Электро

Фармацевтическая химия, 3 курс, зимний семестр

Фармацевтический анализ: электрохимические и термические методы

Горбацевич Глеб Иванович gleb.gorbazewitsch@gmail.com 220033, Минск пер. Асаналиева, 5, каб. 302

Электрофорез

Определение

•направленное движение коллоидных частиц или макроионов под действием внешнего электрического поля.

•на заряженную частицу в простейшем случае действуют две противоположно направленные силы – электростатического притяжения и сопротивления движению частицы. В равновесных условиях действие этих сил уравновешивает друг друга, и скорость миграции частицы определяется выражением:

µ= qE/6πηr

Электрофорез

Электрофоретическая подвижность µэф

•отношение скорости движения частицы к напряженности электрического поля

µэф = vэф/Е

Электрофорез

Электрофорез белков

•способ разделения смеси белков на фракции или индивидуальные белки, основанный на движении заряженных белковых макромолекул различного молекулярного веса в стационарном электрическом поле.

•Наиболее распространённой разновидностью является электрофорез белков в полиакриламидом геле в присутствии додецилсульфата натрия по Лэммли (англ. SDS PAGE)

Электрофорез

SDS PAGE

•метод электрофоретического разделения белков в полиакриламидном геле в зависимости от

молекулярной массы

•перед нанесением на гель образцы кипятили в присутствии SDS и 2-меркаптоэтанола

(восстановление дисульфидных связей, что предотвращает выпетливание денатурированных

полипептидов и повышение их подвижности)

•белки после обработки SDS находятся в полностью

денатурированном состоянии;

•количество молекул SDS, связанных с полипептидом, пропорционально его длине, и, следовательно, молекулярной массе;

•собственный заряд полипептида несущественен в сравнении с зарядом связанного с ним SDS.

•все полипептиды имеют одинаковый удельный заряд и разделяются обратно пропорционально

логарифму их молекулярной массы

Электрофорез

Капиллярный электрофорез

Определение

•метод анализа, основанный на разделении компонентов сложной смеси в кварцевом капилляре под действием приложенного электрического поля

•Микрообъем анализируемого раствора вводят в капилляр, предварительно заполненный подходящим буфером – электролитом.

•После подачи к концам капилляра высокого напряжения (до 30 кВ), компоненты смеси начинают двигаться по капилляру с разной скоростью, зависящей в первую очередь от заряда и массы (точнее – величины ионного радиуса) и, соответственно, в разное время достигают зоны детектирования.

Капиллярный электрофорез

Капиллярный электрофорез Электрофореграмма

•зависимость интенсивности сигнала

детектора (оптической плотности, интенсивности флуоресценции и т.д.) от

времени миграции