Фармакопейный анализ. Количественное
.pdf
Флуоресцентный анализ
Особенности
•Флуориметрическое определение, основанное на тушении флуоресценции, применяют для определения сульфаниламидов (тушат флуоресценцию 9-хлоракридина),-лактамных антибиотиков (тушат флуоресценцию меркурохрома) и т.д.
•К новым подходам в люминесцентной спектроскопии относятся:
•производная спектрофлуориметрия;
•синхронная спектрофлуориметрия;
•спектроскопия, основанная на эффекте Шпольского;
•флуоресцентная спектроскопия узких линий,
•фосфориметрия при комнатной температуре и др.
Хроматография
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
Метод |
|
|
|
|
|
Принцип метода |
|
|
|
|
|||
нормировки |
Используется для определения |
относительного |
|||||||||||
|
содержания компонентов в анализируемой смеси. |
||||||||||||
|
Может быть применён лишь в том случае, когда на |
||||||||||||
|
хроматограмме |
|
|
присутствуют |
|
пики |
всех |
||||||
|
компонентов смеси. |
|
|
|
|
|
|||||||
|
|
|
i |
|
Sx |
|
или , |
x |
|
|
f x Sx |
|
|
|
|
|
|
|
|
fiSi |
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
|
|
|
|
S |
|
|
|
|
|||||
|
где |
f |
|
– |
|
|
|
|
|||||
|
|
|
|
поправочные |
коэффициенты, |
||||||||
|
учитывающие |
неодинаковую чувствительность |
|||||||||||
детектора к различным компонентам смеси
внешнего стандарта Аналитическим сигналом является высота (площадь) пика определяемого вещества
внутреннего стандарта Аналитическим сигналом является отношение высот (площадей) пиков определяемого вещества и внутреннего стандарта.
Хроматография
Колоночная хроматография. Пригодность системы
•относительные времена удерживания указанных веществ должны быть около регламентируемых значений;
•число теоретических тарелок, рассчитанное по указанному
пику, должно быть не менее регламентируемой величины;
•коэффициент разделения указанных пиков должен быть не менее указанной величины;
•относительное стандартное отклонение, рассчитанное для высоты или площади указанного пика или их отношений к высоте или площади внутреннего стандарта из хроматограмм раствора сравнения, должно быть не более регламентируемой величины;
•коэффициент асимметрии указанного пика, рассчитанный из хроматограмм раствора сравнения, должен быть в пределах, указанных в частной статье
ВЭЖХ
Хроматографическое определение фолиевой кислоты
•Условия хроматографирования:
•колонка длиной 0,25 м и внутренним диаметром 4,0 мм, заполненная сферическим силикагелем октилсилильным для хроматографии Р (размер частиц 5 мкм) с удельной площадью
поверхности 350 м2/г, размером пор 10 нм и содержащим около 12,5 % углерода;
•подвижная фаза: 12 объемов метанола Р смешивают с 88 объемами раствора, содержащего 11,16 г/л калия дигидрофосфата Р и 5,50 г/л дикалия гидрофосфата Р;
•скорость подвижной фазы: 0,6 мл/мин;
•спектрофотометрический детектор, длина волны 280 нм;
•объем вводимой пробы: по 5 мкл испытуемого раствора и растворов сравнения (b), (c), (d) и (е);
•время хроматографирования: 3-кратное время удерживания фолиевой кислоты.
ВЭЖХ
Хроматографическое определение фолиевой кислоты
•Испытуемый раствор. 0,100 г испытуемого образца растворяют в 5 мл раствора 28,6 г/л натрия карбоната Р и доводят подвижной фазой до объема 100,0 мл. 2,0 мл полученного раствора доводят подвижной фазой до объема
10,0 мл.
xф.к. (при 100% сод.) = 0,2 г/л
Хроматографическое определение фолиевой кислоты
•Раствор сравнения (а). 0,100 г ФСО фолиевой кислоты
растворяют в 5 мл раствора 28,6 г/л натрия карбоната Р и доводят подвижной фазой до объема 100,0 мл. 2,0 мл полученного раствора доводят подвижной фазой до объема
10,0 мл.
•Раствор сравнения (b). К 20 мг птероевой кислоты Р
прибавляют 5 мл раствора 28,6 г/л натрия карбоната Р, доводят подвижной фазой до объема 100,0 мл и перемешивают до
полного растворения. 1,0 мл полученного раствора смешивают с 1,0 мл раствора сравнения (а) и доводят подвижной фазой до объема 100,0 мл.
ВЭЖХ
xф.к. = 0,2 г/л
xпт.к. = 2∙10-3 г/л xф.к. = 2∙10-3 г/л
Хроматографическое определение фолиевой кислоты
•Раствор сравнения (с). 2,0 мл испытуемого раствора доводят подвижной фазой до объема 20,0 мл. 1,0 мл полученного раствора доводят подвижной фазой до объема 20,0 мл.
•Раствор сравнения (d). 10,0 мг N-(4-
аминобензоил)-L-глутаминовой кислоты Р растворяют в 1 мл раствора 28,6 г/л натрия карбоната Р и доводят подвижной фазой до объема 100,0 мл. 1,0 мл полученного раствора доводят подвижной фазой до объема 100,0 мл.
•Раствор сравнения (e). К 12,0 мг птероевой кислоты Р прибавляют 1 мл раствора 28,6 г/л натрия карбоната Р, доводят подвижной фазой до объема 100,0 мл и перемешивают до полного растворения. 1,0 мл полученного раствора доводят подвижной фазой до объема 100,0 мл.
ВЭЖХ
xф.к. = 1∙10-3 г/л
xабгк = 1∙10-3 г/л
xпт.к. = 1,2∙10-3 г/л
ВЭЖХ
Хроматографическое определение фолиевой кислоты
•Пригодность хроматографической системы: раствор сравнения (b):
•разрешение: не менее 4,0 между пиками фолиевой кислоты и примеси D (птероевой кислоты).
ВЭЖХ
Хроматографическое определение фолиевой
кислоты
•Подлинность
•Основной пик на хроматограмме испытуемого раствора по времени удерживания соответствует основному пику на хроматограмме раствора сравнения (а).
ВЭЖХ
Хроматографическое определение фолиевой кислоты
•Количественное определение
•объем вводимой пробы: по 5 мкл испытуемого раствора и растворов сравнения (а)
ωф.к. SSTS
RS (a)