Практическая часть задание 1. Исследование возбудимости скелетной мускулатуры человека
1) Подготовить генератор электрических импульсов к работе, подключить заземление. К выходу генератора подсоединить соединительные провода и электроды.
2) Поверхность кожи в местах наложения электродов протереть спиртом. Под электроды подложить марлевые тампоны, смоченные 10% раствором хлорида натрия. С помощью резинового бинта укрепить их на плече правой руки так, чтобы расстояние между электродами составляло 6-8 см.
3) Установить на шкалах генератора минимальное напряжение, длительность импульса 1 мс, частоту следования импульсов 0,2 Гц (1 импульс через 5 с), после чего включить генератор.
4) Контролируя генерацию импульсов по щелчкам импульсатора, в период паузы между импульсами увеличить напряжение импульса от 0 до величины, при которой произойдет сокращение мышц плеча. Сразу после сокращения мышц плеча генератор импульсов отключить. Если сокращение мышц не произошло, установить длительность импульса 10 мс и повторить увеличение напряжения от 0 до 50 В.
5) Провести такие же измерения при длительности импульсов напряжения 1; 10; 50; 100; 500; 1000 мс. В случае необходимости променять другую градацию длительности импульсов.
6) Построить кривую "сила длительность", откладывая по оси ординат амплитуды импульсов (В), при которых происходили сокращения мышц, по оси абсцисс длительность импульсов (мс). Определить по этой кривой реобазу, хронаксию, полезное время.
7) Для сравнения полученных результатов провести аналогичные изменения для мышц ноги. Проведя исследования на 5-6 пациентах. Провести сравнительную оценку параметров возбудимости мышц руки и ноги.
Задание 2.Исследование потенциалов изолированного сердца лягушки
1) Собрать электрическую схему для исследования потенциалов изолированного сердца (рис. 11).
Рисунок 11. Блок – схема экспериментальной установки для исследования потенциалов изолированного сердца
2) Обездвижить лягушку, выделить сердце, поместить его в ванночку с индифферентным электродом и смочить физиологическим раствором.
3) Включить осциллограф и установить на максимальную чувствительность и минимальную скорость развертки луча в непрерывном режиме.
4) Включив датчик времени, провести калибровку длительности сигналов.
5) Подвести и обеспечить постоянный контакт подвижного электрода с областью венозного синуса. Зарисовать электрокардиограмму, определить амплитуду и продолжительность зубцов ЭКГ.
6) Провести аналогичные измерения при подведении электрода к верхушке сердца и к области атриовентрикулярного узла. Зарисовать электрокардиограммы в этих отведениях. Определить амплитуду и продолжительность зубцов ЭКГ.
7) Повторить измерения в присутствии норадреналина. Зарисовать электрокардиограммы в 3х отведениях. Определить амплитуду и продолжительность зубцов ЭКГ.
8) Подвести электрод к центру желудочка сердца так, чтобы зазор между электродом и поверхностью сердца был минимален.
9) Измерить амплитуду и длительность альтерационного потенциала.
Задание 3.Механография сосудистых гладких мышц
Рисунок 12. Схема установки для перфузии гладкомышечных препаратов. 1-Физиологический раствор, 2-Препарат ГМ, 3-Механотрон, 4-Усилитель, 5-Регистратор, 6-Перистальтический насос, 7-Предзагрузка
1) Приготовить физиологический раствор Кребса следующего состава: (мМ): NaCl-120. 4, KCl-5. 9, CaCl2-2. 8, NaHCO3-15. 5, NaH2PO4-1. 2, MgCl2-1. 2, глюкоза -11. 5.
2) Довести pH раствора до 7. 3-7. 4 добавляя 0,1 н HCl.
3) Приготовить гиперкалиевые растворы Кребса (с добавлением 10, 20, 40, 60, 80 мМ KCl). Собрать экспериментальную установку (Рис. 12).
4) Включить термостат, перистальтический насос, обеспечить перфузию со скоростью 3 мл/мин при температуре 36 – 370С. Приготовить из грудного отдела аорты крысы кольцевые сегменты шириной 3-3. 5 мм.
5) Проверить чувствительность (калибровка) экспериментальной установки после ее подготовки к работе согласно рис. 3. Для этого к выходу усилителя подключить компьютер и запустить программу, провести выбор усиления, поместить калибровочный груз с регистрацией выходного сигнала (мг/см).
6) Под эфирным наркозом декапитировать крысу, вскрыть грудную клетку, убрать органы грудной полости, вырезать аорту (находится у задней стенки грудной клетки). Очистить от посторонней. Из грудного отдела нарезать кольцевые сегменты шириной 3 – 3,5мм.
7) Установить сегмент в перфузионную камеру и соединить его с механотроном и грузом (200 мг). При установке сегмента аорты в перфузионную камеру соблюдать осторожность в работе с механопреобразователем. Контролировать жесткость фиксации сегмента с камерой и механотроном.
8) Перфузировать препарат нормальным раствором Кребса в течение 40 мин.
9) Заменить нормальный раствор Кребса на гиперкалиевый. (10 мМ). Зарегистрировать ответное изменение тонуса препарата. Зафиксировать динамику, максимальное значение в мг.
10) Отмыть препарат в нормальном растворе Кребса в течение 15 мин.
11) Повторить действия п. 9. Сравнить полученное значение мышечного тонуса с полученным ранее. После стабилизации механического напряжения препарата заменить перфузирующий раствор на раствор, содержащий 20 мМ KCl.
12) Воздействовать на препарат последовательно подготовленными гиперкалиевыми растворами (40, 60 и 80 мМ KCl).
13) На основе полученных данных оценить зависимость тонуса препарата от концентрации KCl в физиологическом растворе.