Тема 15.1. Возбудители сифилиса и мягкого шанкра

План

Программа

Биологические свойства возбудителей сифилиса и мягкого шанкра, их патогенность, экология, особен­ности инфекции и эпидемиология вызываемых забо­леваний.

Микробиологическая диагностика.

Диагностические, профилактические и лечебные пре­параты.

а Демонстрация

Treponema pallidum — мазок из отделяемого твердого шанкра, окраска T.pallidum методом серебрения (или микрофотография в темном поле).

Haemophilus ducreyi — мазок из отделяемого мягкого шанкра, окраска по методу Грама и метиленовым си­ним.

Диагностические и лечебные препараты.

Задание студентам

Указать материал для исследования.

Зарисовать демонстрируемые препараты возбудителей сифилиса и мягкого шанкра.

Серодиагностика сифилиса:

учесть результаты реакции Вассермана. Сделать за­ключение.

учесть результаты реакции микропреципитации.

Сделать заключение.

оценить результаты реакции иммобилизации трепонем (РИТ). Сделать заключение.

4. Дать краткую характеристику диагностическим и лечебным препаратам.

Методические указания

• Микробиологическая диагностика сифилиса

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: отделяемое шанкра (I период заболевания); аспират из высыпных элементов, пунк-тат регионарных лимфатических узлов (II период); кровь (II, III, IV период); спинномозговая жидкость (IV период заболе­вания).

247

следуемой инактивированной сывороткой крови или плаз­мой. В лунку на пластине из плексигласа (или на обычное стекло) наносят 3 капли сыворотки и добавляют 1 каплю кардиолипинового антигена. Смесь тщательно перемешивают и учитывают результаты. Положительная реакция характеризу­ется образованием и выпадением хлопьев разной величины; при отрицательном результате наблюдается равномерная лег­кая опалесценция. Положительная реакция микропреципита­ции позволяет поставить предварительный диагноз и направить пациента на дальнейшее обследование.

Реакцию Вассермана ставят одновременно с двумя антигенами: 1) специфическим, содержащим антиген возбуди­теля — разрушенные ультразвуком трепонемы; 2) неспецифи­ческим — кардиолипиновым. Исследуемую сыворотку разводят в соотношении 1:5 и ставят РСК по общепринятой методике. При положительной реакции наблюдается задержка гемоли­за, при отрицательной — происходит гемолиз эритроцитов, интенсивность реакции оценивается соответственно от (++++) До (-).

Первый период сифилиса является серонегативным и харак­теризуется отрицательной реакцией Вассермана. У 50 % боль­ных реакция становится положительной не ранее чем через 2—3 нед после появления твердого шанкра. Во II и III периоде сифилиса частота положительных реакций достигает 75—90 %. После успешно проведенного курса лечения реакция Вассер­мана становится отрицательной.

Для диагностики поздних и латентных форм сифилиса мож­но ставить реакцию Вассермана, используя спинномозговую жидкость, с теми же антигенами, что и в реакции с сывороткой больного.

РИФ —реакция непрямой ИФ—является специфи­ческой при диагностике сифилиса. В качестве антигена ис­пользуют взвесь тканевых трепонем. Разработаны разные ме­тодики постановки реакции; обычно используют модифика­цию РИФ-200. Сыворотку больного инактивируют так же, как для реакции Вассермана, и разводят в соотношении 1:200. На предметные стекла наносят каплю антигена, высушивают и фиксируют 5 мин в ацетоне. Затем на препарат наносят сыво­ротку больного, через 30 мин промывают и высушивают. Сле­дующим этапом является обработка препарата флюоресцирую­щей сывороткой против иммуноглобулинов человека. Изучают препарат с помощью люминесцентного микроскопа, отмечая степень свечения трепонем.

Реакция иммобилизации трепонем также являет­ся специфической. Принцип реакции заключается в угнетении движения трепонем (иммобилизация) антителами сыворотки крови пациента в присутствии комплемента. Живую культуру

250

трепонем получают при культивировании в яичке кролика. Яичко зараженного животного измельчают в специальной сре­де, в которой трепонемы сохраняют подвижность. Ставят ре­акцию следующим образом: взвесь тканевых (подвижных) тре­понем смешивают в пробирке с исследуемой сывороткой и добавляют свежий комплемент. В одну контрольную пробирку вместо исследуемой сыворотки добавляют сыворотку здорового человека, в другую — вместо свежего комплемента добавляют инактивированный. После инкубации при 35 °С в анаэробных условиях (анаэростат) из всех пробирок готовят препарат "раз­давленная" капля и в темном поле определяют количество подвижных и неподвижных трепонем. Процент специфически иммобилизированных трепонем определяют по формуле:

Т -Т

Х= \ °хЮО, Ч

где Tfc — число подвижных трепонем в контроле (с инактиви-рованным комплементом), Т₀ -— число подвижных трепонем в опыте (с активным комплементом). Результат реакции считают положительным, если процент иммобилизации выше 50, сла­боположительным — от 31 до 50, сомнительным — от 21 до 30 и отрицательным — ниже 20. Для обнаружения специфических антител к T.pallidum используют и другие серологические ре­акции, в частности РИГА.

Необходимо отметить, что в широкой медицинской прак­тике при обследовании больных и здоровых лиц обычно ис­пользуют реакцию Вассермана и микропреципитации; РИТ, РИФ и другие специфические реакции применяют для уточ­нения диагноза и проводят в специализированных лаборато­риях.

• Микробиологическая диагностика мягкого шанкра

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: отделяемое из язвы (мягкого шанкра).

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериологическое исследование. Проводят путем микро­скопии мазков, окрашенных по методу Грама и метиленовым синим. Наличие в мазках грамотрицательных бактерий, распо­лагающихся в виде длинных цепочек, позволяет подозревать наличие возбудителя — H.ducreyi.

Бактериологическое исследование. Проводят путем выделе­ния чистой культуры возбудителя. Материал засевают на кро­вяной агар или другие среды, содержащие дефибринированную кровь. На этих средах H.ducreyi через 48—72 ч образует мелкие круглые колонии, окруженные зоной гемолиза. Идентифика­цию выделенной культуры проводят по ферментации Сахаров

251

и по способности агглютинироваться сывороткой этого же больного.

Кожно-аллергическая проба. Ставят с антигеном из H.ducreyi для подтверждения диагноза.

• Диагностические, профилактические и лечебные пре­параты

Антигены для реакции Вассермана:

специфический антиген из тканевых трепонем, разрушенных ультразвуком;

неспецифический кардиолипиновый антиген — высокоочищенный экстракт бычьего сердца, имеющий постоянный химический состав липидов, смешанных в определенной про­ порции с лецитином и холестерином.

Антигены разводят согласно инструкции и используют в рабочих-дозах, указанных на этикетках. Кардиолипиновый ан­тиген используют также и в реакции микропреципитации.

Антибиотики: пенициллин, цефотаксим, тетрациклины, эритромицин.