- •Часть I. Общая медицинская микробиология, вирусология и иммунология
- •Часть I
- •Глава 1
- •Глава 2
- •Тема 2.1. Изучение морфологии бактерий и их тинкториальных свойств. Простые методы окраски
- •Тема 2.3. Морфологические особенности
- •Глава 3
- •Тема 3.2. Идентификация бактерий
- •Глава 4
- •Глава 5
- •Тема 5.1. Морфология и структура вирусов. Вирусоскопические методы исследования
- •Тема 5.2. Культивирование вирусов и других облигатньгх внутриклеточных паразитов (риккетсий, хламидий)
- •Тема 6.1. Модификационная изменчивость, мутации, рекомбинация и перенос генов между бактериями
- •Глава 7 методы стерилизации.
- •Тема 7.1. Методы оценки антимикробного действия химических и физических факторов
- •Тема 7.2. Методы оценки эффективности действия антимикробных препаратов
- •Глава 8
- •Тема 8.1. Микрофлора воды, воздуха и почвы. Методы санитарно-бактериологического исследования воды, воздуха и почвы
- •Тема 8.3. Микрофлора организма человека
- •Глава 10
- •Тема 10.2. Методы количественного определения специфических антител (серодиагностика)
- •Тема 10.3. Методы оценки иммунного статуса организма человека
- •Тема 10.4. Методы оценки клеточного и гуморального иммунного ответа. Вакцины. Иммунные сыворотки и иммуноглобулины
- •Часть II
- •Глава 11
- •Тема 11.1. Методы клинико-диагностических микробиологических исследований и оценка полученных результатов
- •Глава 12
- •Тема 12.1. Аэробные бактерии -возбудители гнойно-воспалительных заболеваний и раневых инфекций
- •Тема 12.2. Анаэробные бактерии - возбудители гнойно-воспалительных и раневых инфекций
- •Глава 13
- •Тема 13.2. Возбудители брюшного тифа, паратифов и иерсиниозов. Дисбактериоз
- •Тема 13.3. Возбудители пищевых
- •Глава 14
- •Тема 14.2. Возбудители менингококковой инфекции, коклюша и дифтерии
- •Тема 14.3. Возбудители туберкулеза, проказы и актиномикоза
- •Тема 15.1. Возбудители сифилиса и мягкого шанкра
- •Тема 15.2. Возбудители гонореи, урогенитального хламидиоза, микоплазмоза и уреаплазмоза
- •Глава 16
- •Тема 16.1. Возбудители чумы, туляремии, бруцеллеза, сибирской язвы, лептоспироза и других зоонозных инфекций
- •Глава 17
- •Глава 18
- •Глава 19
- •Тема 20.1. Микробиологическая диагностика кишечных вирусных инфекций и вирусных гепатитов
- •Глава 21
- •Тема 21.1. Микробиологическая диагностика вирусных поражений кожи, слизистых оболочек, лимфоидной и железистых тканей
- •Глава 22
- •Тема 22.1. Микробиологическая диагностика инфекций, вызванных онкогенными вирусами человека и вирусами иммунодефицита человека
- •Глава 23
- •Глава 24
- •Тема 24.1. Микробиологическая диагностика протозойных инфекций
Тема 10.4. Методы оценки клеточного и гуморального иммунного ответа. Вакцины. Иммунные сыворотки и иммуноглобулины
Иммунный ответ на инфекцию или иммунизацию вакцинными препаратами позволяет оценить функциональную активность иммунной системы в целом. Выявление в организме продуктов иммунного ответа свидетельствует о том, что человек был инфицирован соответствующим возбудителем, что имеет большое эпидемиологическое значение. Нередко выявление той или иной формы специфического иммунного ответа на конкретный антиген позволяет уточнить диагностику заболевания.
Оценка гуморального иммунного ответа базируется на выявлении специфических антител в сыворотке крови и других биологических жидкостях. Как правило, речь идет об определении количества антител (титра). Наиболее информативным считается определение количества антител в динамике инфекционного заболевания, так как именно нарастание титра антител свидетельствует о текущей инфекции. Нарастание титра антител можно использовать и для оценки эффективности проведенной вакцинации. Диагностическую значимость имеет определение принадлежности специфических антител к тому или иному изотипу иммуноглобулинов: для первичной инфекции наиболее характерно накопление антител изотипа IgM, a рецидив инфекции сопровождается преобладанием антител изотипа IgG.
Клеточно-опосредованный иммунный ответ оценивается чаще всего с помощью кожных проб. При внутрикожном введении небольшой дозы экстракта из микроорганизма, содержащего его антигены, в положительном случае наблюдается покраснение, припухание и уплотнение (инфильтрат) на месте введения через 24—48 ч. Положительная реакция свидетельствует об инфицировании человека соответствующим микроорганизмом, которое привело к формированию в организме клона Т-лимфоцитов, способных распознать его антигены и активироваться. Положительная кожная проба может быть результатом эффективной вакцинации против соответствующей инфекции.
План
Программа
Возможности методов серодиагностики при оценке гуморального иммунного ответа.
Методы выявления иммунных комплексов.
Кожно-аллергические пробы для оценки клеточного
142
иммунитета и реакции гиперчувствительности замедленного типа.
Методы выявления специфической сенсибилизации Т-лимфоцитов.
Получение и применение вакцин, анатоксинов.
Получение и применение иммунных сывороток и иммуноглобулинов.
Демонстрация
Результаты теста торможения миграции лейкоцитов крови в присутствии причинного антигена.
Набор ампулированных препаратов инфекционных аллергенов, вакцин, сывороток, иммуноглобулинов, диагностикумов.
Задание студентам
Протоколировать и оценить результаты развернутых реакций агглютинации, поставленных с парными сыворотками крови человека, иммунизированного бактериальной вакциной. Оценить эффективность вакцинации.
Протоколировать и оценить результаты РСК, поставленных с парными сыворотками крови человека, иммунизированного вирусной вакциной. Оценить эффективность вакцинации.
Протоколировать и оценить результаты РСК, поставленной с сывороткой крови больного с бактериальной инфекцией для дифференциации первичной инфекции и рецидива.
Методические указания
1. Реакция торможения миграции лейкоцитов. В основе данного метода лежит способность лимфоцитов после повторного контакта с антигеном, к которому они были ранее сенсибилизированы, продуцировать различные лимфокины, в том числе влияющие на миграцию индикаторных клеток (гранулоциты, моноциты, макрофаги). Реакция торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) периферической крови в присутствии причинного антигена позволяет выявить специфическую сенсибилизацию Т-лимфоцитов. РТМЛ ставят в капиллярах или под слоем агарозы. Проводят инкубацию лейкоцитов крови в присутствии и в отсутствие причинного микробного антигена, после чего измеряют зоны миграции (в процентах) в присутствии антигена по сравнению с контролем, принятым за 100 %.
В случае выявления сенсибилизации к антигену наблюдается торможение миграции лейкоцитов (индекс ниже 100 %).
2. Постановка и оценка кожно-аллергической пробы. Для выявления специфической сенсибилизации (при туберкулезе, бруцеллезе и других инфекционных заболеваниях) ставят кожно-аллергические пробы. Например, при постановке пробы Манту внутрикожно вводят раствор туберкулина определенной концентрации. Реакцию учитывают через 24—48 ч, оценивая степень выраженности гиперемии и инфильтрат вокруг места введения (рис. 10.4.1; на вклейке). В основе положительной кожной пробы лежит клеточная реакция гиперчувствительности замедленного типа, которая отражает специфическую сенсибилизацию организма к данному инфекционному аллергену. Она возникает в результате текущего, перенесенного заболевания, вакцинации или инфицирования организма.
3. Выявление нарастания титра антител в серологических реакциях с парными сыворотками больного или вакцинированного. Показателем развития гуморального иммунного ответа является нарастание титра специфических антител в сыворотке крови в течение 3—4 нед после инфицирования или вакцинирования. Это устанавливается в реакции с парными сыворотками, т.е. сыворотками, полученными от одного и того же человека в динамике инфекционного или вакцинального процесса (например, на 1-й и 3—4-й неделе). Появление антител в сыворотке человека, у которого ранее этих антител не было, называется сероконверсией. Диагностическое значение придается, как правило, 4-кратному и более увеличению титра антител.
При бактериальных инфекциях или вакцинации бактериальными вакцинами с парными сыворотками ставят реакции агглютинации, РИГА или РСК (табл. 10.4.1).
Таблица 10.4.1. Результаты развернутой реакции агглютинации с бактериальным диагностикумом и парными сыворотками человека, вакцинированного бактериальной вакциной
Сроки взятия крови |
Разведения сыворотки |
Контроль сыворотки |
Контроль диа-гности-кума | ||||
1:50 |
1:100 |
1:200 |
1:400 |
1:800 |
До вакцинации ++
Через 3 нед после +++ вакцинации
При вирусных инфекциях или вакцинации вирусными вакцинами с парными сыворотками ставят РСК, РТГА и реакцию нейтрализации вирусов (табл. 10.4.2).
Нарастание титра антитоксических антител контролируют с помощью реакции флоккуляции или нейтрализации токсина.
Сроки взятия Разведения сыворотки Конт- Конт- крови 1 1 1 1 роль сы- роль диа- 1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 воротки гности- кума В самом начале + + — — — — — эпидемии Через месяц после + + + + — — — начала эпидемии |
Исследуе- Разведения сыворотки мая сыво- 1 1 1 1 1 1 1 ротка 1:юо 1:200 1:300 1:400 1:500 1:600 1:700 1:800 1:1000 После об- + + + ______ работки 2МЕ Без обра- + + + + + + + + + ботки 2 ME |
воротке в результате обработки 2-меркаптоэтанолом свидетельствует в пользу первичной инфекции.
Для определения принадлежности специфических антител к определенному классу (изотипу) иммуноглобулинов используют также твердофазный иммуноферментный метод. Специфический антиген фиксируется на поверхности лунок планшетов из полистирола и инкубируется с исследуемой сывороткой. После отмывания от несвязанных иммобилизованным антигеном белков сыворотки связанные антитела-иммуноглобулины идентифицируются с помощью антиизотипической антиглобу-линовой сыворотки или соответствующих МКАТ. Их связывание в свою очередь устанавливается с помощью антииммуно-глобулиновой сыворотки с ковалентно прикрепленным ферментом.