6 курс / Судебная медицина / Избранные_вопросы_судебно_медицинской_экспертизы_Выпуск

«Кровь в кровь» – след, формирующийся, когда частицы крови попадают в одну область и депонируются друг в друге. Обычно это наблюдается, когда кровь капает в кровь.

Поток – большая масса крови, излившаяся на поверхность за очень короткий промежуток времени, часто встречается при ранах с повреждением крупных артерий и вен.

«Скелетированные» следы крови – контуры следов крови, оставшиеся на поверхностях, после их смазывания или затирания во временном промежутке от 15 с до 20 мин с момента их образования.

Все вышеприведенные термины вошли в многочисленные классификации следов крови, использующие разные критерии систематизации.

Однако ни одна из ранее предложенных классификаций не объединяла весь комплекс необходимых параметров (классификационных признаков). Поэтому назрела острая необходимость в обобщении накопленных знаний и систематизации данных в этом направлении.

Нами предпринята попытка создания новой классификации следов крови, которая основана на интегрированном подходе к данной проблеме и использует следующие классификационные признаки:

морфология следа крови,

механизм его образования,

обстоятельства травмы,

условия образования следа,

свойства следовоспринимающей поверхности,

свойства следонесущего предмета.

Предварительная работа по классификации показала, что следы крови име-

ют общую характеристику по материалу исследования (кровь) и существенно (кардинально) различаются по другим параметрам. В связи с этим необходимо создание прикладных классификаций для каждого вида следов крови, что позволит стандартизировать и унифицировать их анализ, описание и диагностику.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОПАНОРМА В ТРУПНОМ МАТЕРИАЛЕ (СЛУЧАЙ ИЗ ПРАКТИКИ)

М.Н. Белозерова

КГБУЗ «Бюро СМЭ» МЗ Хабаровского края (нач. – к.м.н. А.В. Нестеров), г. Хабаровск

В декабре 2009 года в отделение были присланы для проведения исследования на наличие лекарственных препаратов и этанола биологические объекты: внутренние органы (печень, желудок), кровь и моча от трупа гр-ки Г. 1986 года рождения. В обстоятельствах дела было указано – отравление лекарственными препаратами (предположительно пропанормом).

Препарат ПРОПАНОРМ (международное непатентованное название пропафенона гидрохлорид) относится по своим фармакологическим свойствам к антиаритмическим препаратам.

60

CH3

OH

Рис. 1. 1-[2-[2-Гидрокси-3-(пропиламино)пропокси]фенил]-3-фенил-1-пропанон

Соответствующей литературы по химико-токсикологическому исследованию данного препарата нами найдено не было. Был сделан запрос фармакопейной статьи на данный препарат, в контрольно-аналитическую лабораторию по Контролю и оценке качества медпрепаратов. Исходя из полученных данных в фармакопейной статье, а также из химической структуры препарата была предложена схема проведения исследования. В качестве «свидетеля» использовался метанольный раствор таблеток пропафенона гидрохлорида, приобретенных в аптеке.

Изолирование из внутренних органов проводили водой, подкисленной щавелевой кислотой по методу Васильевой, изолирование из мочи – подкисленной 2н раствором соляной кислоты по методу Изотова.

Исследование извлечений из кислой и щелочной среды проводили методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) с использованием в качестве «свидетелей» метанольного раствора пропафенона гидрохлорида (пропанорма), хлороформных растворов других фармакологических групп.

Условия ТСХ исследования:

–2 высокоэффективные пластинки «Сорбфил-254» размером 10×10 см на целлулоидной подложке;

–2 пластинки «Силуфол» размером 10×14 см на алюминиевой подложке. Системы растворителей, используемые для насыщения хроматографиче-

ских камер:

–для исследования извлечения из кислой среды – СР № 1 хлороформ:ацетон (9:1);

–для исследования извлечения из щелочной среды – СР № 2 этилацетат:метанол:25% раствор аммиака (85:10:5).

Пластинки выдерживали в камерах до поднятия слоя растворителей до линии фронта. Пробег фронта растворителей для пластинок «Сорбфил 254» – 9 см, для пластинок «Силуфол» – 8×14 см.

Метчик пропафенона гидрохлорида, исходя из химической структуры, обладает выраженными основными свойствами, поэтому при исследовании извлечений из кислой среды методом тонкослойной хроматографии препарат выявлен не был.

При проведении ТСХ-исследования извлечений из щелочной среды по 2,0 мл извлечений из внутренних органов и мочи с помощью капилляра переносили в точки на стартовые линии: 2-х пластинок «Сорбфил 254» (П № 1

иП № 2) и на стартовую линию пластинки «Силуфол» 8×14 (П № 3). После

61

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

последовательного выдерживания пластинок в хроматографической камере с СР № 2 и высушивания их при комнатной температуре для обработки хроматографической пластинки П № 1 использовали следующие реактивы: 10 % раствор хлорида окисного железа, 0,1 % раствор нитрита натрия в хлорной кислоте, реактив Драгендорфа в модификации Мунье. В зонах хроматографирования исследуемых извлечений из внутренних органов и мочи наблюдали проявление пятен на одном уровне и одного цвета с проявленным пятном «свидетеля» пропафенона, после обработки реактивом Драгендорфа в модификации Мунье, с Rf = 0,73 желтого цвета с темно-оранжевой каймой по краям пятна.

Для обработки П № 2 применялась концентрированная серная кислота; после обработки пластинки парами формальдегида (реакция на фенольную группу) наблюдали проявление пятна ярко-желтого цвета с Rf = 0,73. После обработки пластинки водой окрашивание пятен исчезло. Затем пластинку обрабатывали раствором йодплатината, подкисленного концентрированной соляной кислотой. В зоне хроматографирования исследуемых извлечений – проявление пятна ярко-брусничного цвета на одном уровне и одного цвета с проявленным пятном метчика. «Свидетель» проявлен с Rf = 0,73.

Для обработки П № 3 использовали раствор нингидрина в ацетоне (реакция на первичную аминогруппу). После выдерживания пластинки в токе теплого воздуха в зонах хроматографирования исследуемых извлечений и «свидетеля» пропафенона наблюдали проявления пятен ярко-розового цвета с

Rf = 0,43.

Далее проводили исследование методом газожидкостной хроматографии метанольного раствора препарата и извлечений из внутренних органов и мочи. Условия хроматографического разделения: детектор – ионизационноплазменный, колонка НР – 5 25×0,32, скорость газа – носителя азота – 70 мл/мин, водорода – 30 мл/мин, воздуха – 300 мл/мин температура детектора 260 °С, температура испарителя 240 °С, температура колонки 180 °С с программированием температурного режима до 260 °С и выдерживанием общего времени анализа 25 минут.

Объемы исследуемых растворов: метанольного раствора пропафенона 1 мкл, извлечений из печени, желудка и мочи – по 5мл. Растворы переносили в выпарительные чашки, испаряли до сухого остатка. Полученные остатки растворяли каждый в 50 мкл 95% этанола. Объем растворов, вводимых в инжектор хроматографа «Кристалл 2000М»в, – 2 мкл. На хроматограмме исследуемого метанольного раствора пропафенона отмечен пик со временем удерживания 8,990 мин (рис. 2).

62

–хроматография в тонком слое сорбента извлечений из щелочной среды

ипоследующим проявлением реактивами:

–Драгендорф по Мунье, Марки, нинигидрин в ацетоне, подкисленный йодплатинат.

–исследование извлечений из трупного материала из щелочной среды методом газожидкостной хроматографии на аппаратно-програмном комплексе «Хроматек-Кристалл 2000М».

–исследование извлечений из трупного материала из щелочной среды методом спектрофотометрии на спектрофотометре СФ-56.

СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКАЯ ДИАГНОСТИКА МЕСТА ПОЛОЖЕНИЯ ВОДИТЕЛЯ, ПАССАЖИРОВ ПЕРЕДНЕГО И ЗАДНЕГО СИДЕНИЙ ПРИ ДТП В САЛОНЕ ЛЕГКОВОГО АВТОМОБИЛЯ С СОВРЕМЕННЫМИ СИСТЕМАМИ БЕЗОПАСТНОСТИ

А.А. Бычков

Кафедра судебной медицины (зав. – член-корр. РАМН Ю.И. Пиголкин) ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова, г. Москва

Современные автомобили оснащены различными устройствами, которые защищают водителя и пассажиров от травм. Данные обстоятельства изменили особенности внутрисалонной травмы. В связи с этим целью исследования явилось установление диагностических критериев, позволяющих определить местоположение потерпевшего при ДТП в салоне легкового автомобиля, оборудованного современными средствами безопасности.

Был изучен характер повреждений, образующихся при ДТП у водителя и пассажиров в салоне легкового автомобиля, оборудованного современными средствами безопасности. Проведено сравнительное исследование характера повреждений, образующихся при ДТП у водителя и пассажиров переднего и заднего сидений в салоне современного легкового автомобиля.

Материалом исследования явились архивные данные 130 судебномедицинских экспертиз. В работе использовались сравнительный, морфометрический и статистический методы исследования. При анализе повреждений учитывали их вид (ссадина, кровоподтек, рана, перелом, повреждения внутренних органов) и локализацию.

Результаты исследования показали, что у водителя легкового автомобиля, оборудованного современными защитными средствами, наиболее часто травмировалась левая сторона передней части тела. Повреждения головы преобладали над травмой других частей тела. Повреждения нижних конечностей локализовались на передней поверхности и преобладали на стопах. При этом переломы нижних конечностей были типичными для водителя.

Для пассажира переднего сидения легкового автомобиля наиболее частыми были повреждения на правой стороне передней части тела. При этом чаще, чем у водителя повреждались кисти, преимущественно за счет травмирова-

64

ния мягких тканей ладонной поверхности правой кисти. В повреждениях нижних конечностей преобладали повреждения бедер, включая частое формирование переломов бедренных костей. Особенностью травмы ППС являлось отсутствие повреждений на стопах.

Для пассажиров заднего сидения легкового автомобиля типичным являлось травмирование верхней части тела, преимущественно за счет повреждений головы и туловища. При этом указанные повреждения встречались чаще, чем у водителя и ППС. Кроме того, отмечена высокая частота повреждений таза, что являлось важной отличительной особенностью. Повреждения верхних конечностей отличались более частым травмированием их передней поверхности, преимущественно проксимальных отделов, с одинаково частым образованием изолированных повреждений мягких тканей, в сочетании с переломами костей верхних конечностей.

Таким образом, настоящее исследование показало, что у водителя легкового автомобиля, оборудованного современными защитными средствами, не образуются «классические» повреждения на кистях и груди. Для водителя характерно травмирование левой передней части тела, преобладание повреждений головы. Для пассажира переднего сидения характерно преобладание повреждений правой стороны передней части тела и отсутствие повреждений на стопах. Для пассажира заднего сидения характерно более частое и более тяжелое травмирование головы, груди, живота и таза с локализацией повреждений преимущественно на передней части тела. Выявленные закономерности могут быть использованы в качестве диагностических критериев для установления местоположения пострадавшего в салоне легкового автомобиля при ДТП.

ЦИТОЛОГИЧЕСКИЙ ТЕСТ ПРИЖИЗНЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛУБИНЫ КИСЛОРОДНОГО ГОЛОДАНИЯ

С.В. Вдовенко

Кафедра патологической физиологии (зав. – к.м.н., доц. И.Г. Яковенко) ГБОУ ВПО ДВГМУ Минздрава России, г. Хабаровск

Кислородное голодание как типовой патологический процесс сопровождает практически все известные заболевания и многие патологические состояния, встречаемые в судебной медицине. Гипоксия является непосредственной причиной гибели организма в неблагоприятных условиях, она является ведущим звеном в развитии постреанимационной болезни.

Проблеме повреждающего воздействия недостатка кислорода посвящено множество работ, однако до сих пор остаѐтся открытым аспект прижизненного судебно-медицинского контроля глубины и длительности гипоксического воздействия по состоянию пролиферации в тканях, потребляющих и доставляющих кислород.

65

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Материалы и методы исследования.

Для решения этой проблемы исследовано качество пролиферативной активности клеток эпителия разных органов (роговица, язык, пищевод) и клеток системы красной крови при тренировках к умеренной барокамерной гипоксии (подъѐм на высоту 6000 метров по 4 часа ежедневно в течение недели) и при тренировках к тяжѐлой барокамерной гипоксии (ежедневный подъѐм на высоту 9000 метров по 4 часа в течение недели).

О качестве пролиферативной активности в роговице, языке, пищеводе судили по показателям митотического режима (количество митозов, уровень аномально делящихся клеток, спектр патологических митозов); в системе красной крови – определяли количество зрелых и молодых эритроцитов, а также уровень дегенеративных форм этих клеток.

Тренировки к умеренному и тяжѐлому кислородному голоданию моделировали на белых беспородных крысах-самцах массой 170–210 г путем пребывания животных в условиях барометрического разрежения на высотах 6 и 9 тыс. м сроком 4 часа в день (однократно) и в течение недели (многократно). Для получения модели кислородного голодания мы, как и другие исследователи (Е.А. Коваленко, 1973; А.П. Ястребов, 1973; Г.А. Васильев, O.K. Хмельницкий, 1974; Г.Г. Сухих, Б.А. Фролов, Ф.З. Меерсон, 1981; М.Т. Шаов, 1981; Л.Б. Буравкова, Э.С. Маилян, Е.А. Коваленко, 1983), использовали «подъѐм» животных в барокамере отечественной конструкции (СБК-48) объѐмом 1,5 м3. Животных «поднимали» в среднем со скоростью изменения барометрического давления 13–20 мм pт.cт. Такой умеренный по скорости «подъѐм» мы использовали с учѐтом данных о зависимости морфофункциональных изменений в различных органах эндокринной системы от быстроты наступления разрежения (Г.А. Васильев, Ю.И. Медведев, O.K. Хмельницкий, 1974) и с учѐтом допустимых величин скорости изменения барометрического давления (Э.В. Лапаев, Г.И. Тарасенко, В.Н. Чернуха, 1981).

Опыты проводились в соответствии с Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных (приложение к приказу МЗ СССР

№ 755 от 12.08.1977 г.). Эвтаназию животных осуществляли быстрой декапитацией на специальной гильотине сразу, через 3, 6 и 24 часа после завершения недельного эксперимента. Забой подопытных и контрольных животных осуществляли в одинаковое время суток (19 часов) с целью исключения циркадных изменений митотической активности (МА). Для характеристики МА эпителия роговицы, языка, пищевода использовали колхицин в дозе 4 мкг/г веса внутрибрюшинно за 2 часа до забоя. Известно, что метафазный блок, создаваемый колхицином, используется не только для характеристики активности митоза, но и косвенно – для оценки активности премитотических процессов. Гистологическую обработку эпителия роговицы, пищевода, покраску мазков крови производили по общепринятым методикам с применением собственных модификаций по стандартной массовой обработке кусочков органов, тканей (Вдовенко С.В., 1996; 1997).

66

В опытах было использовано 789 крыс. Результаты оценивали при помощи t критерия Стьюдента.

Результаты исследования Проведенные исследования ключевых периодов митотического цикла

(число ДНК-синтезирующих клеток, интенсивность синтеза ДНК, митотическая активность, соотношение фаз митоза, уровень и спектр патологических митозов) в эпителии разных органов свидетельствовали о дестабилизации размножения клеток, а также о зависимости качества пула пролиферирующих (делящихся) клеток от глубины гипоксического воздействия.

Опыты показали, что под влиянием кислородного голодания митотическая активность (МА) эпителиальных клеток существенно изменялась. Изменения эти, в зависимости от степени и длительности гипоксического воздействия, были либо моно-, либо двухфазными.

Под влиянием тренировки белыx крыс к умеренному кислородному голоданию изменения клеточного деления в изучавшихся эпителиальных тканях из двухфазных становились монофазными. Фаза угнетения митотической активности (МА) исчезала. В первые часы после заключительного «подъѐма» животных в барокамере у них выявлялась активация клеточного деления. В результате тренировки к умеренному барометрическому разрежению ослаблялся мутагенный эффект кислородного голодания. В первые часы после заключительной тренировки (для языка, пищевода – спустя 3 часа, для роговицы – спустя 6 часов) уровень аномально делящихся клеток и спектр патологии стабилизировались и были таковыми спустя сутки. Делящиеся клетки эпителия роговицы повреждались в несколько большей степени, чем клетки языка, пищевода, однако важно то, что и те и другие повреждения оказались обратимыми.

Под влиянием тяжѐлого острого кислородного голодания митотический процесс в эпителии обоих органов нарушался в большей степени. Во-первых, углублялось повреждение клеточных структур митоза, во-вторых, более выраженным становился двухфазный характер МА, и, в-третьих, нарушения распределения клеток по стадиям митоза становились более глубокими и длительными, что свидетельствовало о функциональной нестабильности митотического процесса в клетках. Тренировка к тяжѐлому кислородному голоданию не изменяла двухфазный характер МА. После многократного пребывания животных в условиях крайне низкого барометрического разрежения повреждения клеточных структур митоза становились более выраженными и сохранялись в течение длительного периода времени, распределение клеток по фазам митоза существенно нарушалось.

Всѐ это свидетельствует о выраженной неустойчивости морфофункционального состояния аппарата клеточного деления.

Приведѐнные данные позволяют нам заключить, что тренировка к умеренной гипоксии способна привести к адаптивным сдвигам, тогда как многократное повторение кислородного голодания тяжѐлой степени способствует развитию более выраженных расстройств, т.е. приводит к дисадаптации.

67

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Интересно отметить, что активация клеточного деления отмечалась во всех сериях опытов. Однако она становилась более выраженной и более устойчивой лишь после хронического кислородного голодания тяжѐлой степени (спустя сутки после тяжѐлого хронического гипоксического воздействия определялось увеличение числа митозов в эпителии роговицы, языка, пищевода). При этом повреждение делящихся клеток и расстройство митотического процесса были наибольшим. Отсюда можно заключить, что чем глубже гипоксическое повреждение делящихся клеток, тем существеннее и длительнее активация митотического процесса.

Более выраженные двухфазные изменения МА и синтеза ДНК отмечались в эпителии роговицы. Уменьшение показателей синтеза ДНК отмечалось в эпителии роговицы как под влиянием острого, так и под влиянием хронического кислородного голодания.

Важно подчеркнуть, что в эпителии роговицы, языка, пищевода сразу после хронического тяжѐлого кислородного голодания расстройство синтеза ДНК было менее выраженным, чем после острого тяжѐлого кислородного голодания. Митотический режим (МА и распределение клеток по стадиям митоза) при этом, напротив, расстраивался в большей степени. По-видимому, период непосредственной подготовки клеток к митозу (G2-период) и собственно митоз являются наиболее кислородзависимыми периодами митотического цикла. В процессе тренировки к умеренному дефициту кислорода заключительный период митотического цикла (митоз) становится более устойчивым, а под влиянием многократного тяжѐлого кислородного голодания повреждения в нѐм нарастают.

Итак, под влиянием тяжѐлых гипоксических воздействий митотический процесс изменяется в большей степени, чем развитие клеток в S-периоде митотического цикла. Умеренные многократные гипоксические воздействия тренируют митотический процесс. Следовательно, в целом реакция клеточного деления на дефицит кислорода определяется, главным образом, изменениями клеточной пролиферации в самом митозе.

Хорошо известно, что дефицит кислорода дестабилизирует пролиферативные процессы в ключевых периодах митотического цикла в клетках красной крови (Гущин В.А., Тавровская Т.В., 1984), активируется их размножение, что увеличивает число эритроцитов как за счет миграции, так и за счѐт омоложения системы красной крови полихроматофилами (молодыми эритроцитами). Это связано с действием самой гипоксии, а также влиянием системных и тканевых регуляторов эритропоэза (Е.Д. Гольдберг и др., 2002).

В наших исследованиях увеличение уровня зрелых и молодых эритроцитов (полихроматофилов) было наиболее выраженным под влиянием тренировок к тяжѐлой гипоксии. При этом уровень дегенеративных эритроцитов (пойкилоцитоз, анизоцитоз, шизоцитоз), появившись при однократном умеренном гипоксическом воздействии (высота 6 тыс. м), не выявлялся после аналогичного по глубине многократного гипоксического воздействия.

68

После многократного тяжѐлого гипоксического воздействия (9 тыс. м) уровень дегенеративных форм эритроцитов был увеличенным даже спустя сутки после тренировки к этим тяжѐлым гипоксическим воздействиям.

Таким образом, умеренные тренировки к дефициту кислорода восполняли пул функционирующих эритроцитов без изменения их качества, тогда как тяжѐлые гипоксические воздействия хотя и приводили к более выраженному эритроцитозу, но восполняемый пул эритроцитов был некачественным.

Таким образом, определение качества пула клеток красной крови позволяет судить о степени влияния гипоксии на пролиферативные процессы в периодах митотического цикла не только в самой кроветворной ткани, клетки которой доставляют кислород, но и в других пролиферирующих тканях, потребляющих кислород: чем выраженнее и длительнее сдвиг качества пула размножившихся эритроцитов (стойкое увеличение дегенеративных форм эритроцитов), тем глубже дестабилизация процессов клеточного деления в периодах митотического цикла пролиферирующих тканей (от их угнетения к активации с увеличением аномальных фигур митоза).

Вцелом, возможность восстановления параметров митотического цикла

вэпителии разных органов исключалась под влиянием тяжѐлого кислородного голодания в результате повреждения пула функционирующих эритроцитов. По-видимому, повреждѐнная система красной крови является фактором стойкой гипоксии в пролиферирующих тканях. Последнее обстоятельство является критерием судебно-медицинской экспертизы кислородного голодания как типового патологического процесса.

Список литературы:

1.Вдовенко, С. В. Влияние гипоксии на процессы клеточного деления эпителия роговицы и языка белых крыс / С. В. Вдовенко, С. С. Тимошин // Бюл. эксперимент. биологии и медицины. – 1983. – Т. 96, № 8. – С. 86–87.

2.Пат. 2066447 Российская Федерация. Способ обезвоживания гистологического материала / Вдовенко, С. В.; заявл. 10.09.1996 г. – 6 с.

3.Пат. 2080579 Российская Федерация. Кассета для подготовки образцов биологических тканей к гистологическому исследованию / Вдовенко С.В.; заявл. 27.05.1997 г. – 8 с.

4.Реакции эритроидного ростка кроветворения и механизмы их развития при гипоксии различной степени тяжести / Е. Д. Гольдберг, А. М. Дыгай, Г. Н. Зюзьков и др. // Бюл. эксперимент. биологии и медицины. – 2002. – Т. 134, № 8. – С. 142–145.

5.Гущин, В. А. Влияние длительной адаптации крыс к гипоксии на пролиферацию клеток эритроидного ряда костного мозга. Сообщение I. Увеличение клеточных потоков и уменьшение длительности митоза / В. А. Гущин, Т. В. Тавровская // Цитология. – 1984. – Т. 26, № 2. – С. 215–223.

69

Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/