6 курс / Клинические и лабораторные анализы / Флуоресцентные_методы_диагностики_в_медицине_Колтовой_Н_А_Краевой
.pdfСмещение максимума триптофановой флуоресценции.
Максимум флуоресценции сложных молекул сдвинут в коротковолновую область по сравнению с максимум флуоресценции отдельных компонент молекулы. Еще в 1925 году было показано, что спектр поглощения белков сыворотки крови отличается от спектров поглощения аминокислот. Спектр поглощения аминокислот сдвинут в длинноволновую область. Максимума флуоресценции триптофана в белках по отношению к свободному триптофану сдвинут в коротковолновую область.
Соединение альбумина с различными лигандами вызывает конформационную перестройку альбумина, и изменение третичной структуры. При этом изменяется спектр флуоресценции. Максимум флуоресценции смещается в коротковолновую область до 322330 нм, интенсивность флуоресценции снижается на 30-50 %. Образование комплексов альбумина с лигандами приводит к изменению окружения триптофановых остатков. Происходит тушение флуоресценции триптофана вследствие уменьшения компактности молекулы альбумина и возросшей доступности ее аминокислотных остатков для молекул воды.
348 нм – |
максимум флуоресценции триптофана, |
345 нм – |
максимум флуоресценции триптофана в составе белка (альбумина), |
330 нм – |
максимум флуоресценции альбумина, нагруженного лигандами. |
1976 - Фирсова В.И. Гаврилов Г.А. Манойлов С.Е. Вопросы онкологии. 1976. т.22. с.95-97. При регистрации флуоресценции сыворотки крови у крыс с привитой лимфосаркомой. Возбуждение
– 280-297 нм, регистрация – 300-400 нм. Обнаружили увеличение флуоресценции на 19-41% и сдвиг спектра в коротковолновую область на 4-5 нм.
1982 - Григорович Н.А. Черницкий Е.А. Слобожанина Е.И. Альтаментова С.М. (Минск, НИИ Онкологии) Об изменении параметров ультрафиолетовой флуоресценции сыворотки крови при онкологических заболеваниях. Доклады Академии наук Белорусской ССР. 1982. т.26. №4. с.372-374.+ Исследовалась сыворотка крови со злокачественными новообразованиями. Возбуждение - 297 нм. Выявлено увеличение интенсивности флуоресценции по сравнению с нормой. Степень увеличения различна для различных положениях опухоли. Обнаружен сдвиг флуоресценции в коротковолновую область на 1-1,5 нм.
2010 - Залесская Г.А. Маслова Т.О. (Минск, Институт Физики НАН Беларуссии) Спектры флуоресценции плазмы крови при ультрафиолетовом облучении in vivo. Журнал прикладной спектроскопии. Июль-август 2010. т.77. №4. с.618-626.+
Спектры флуоресценции плазмы больных с острым коронарным синдромом сдвтнуты в коротковолновую часть спектра на 4-5 нм по сравнению со здоровыми пациентами.
2001 - Vivian JT, Callis PR (2001). Mechanisms of tryptophan fluorescence shifts in proteins. Biophys. J. 80 (5): 2093–109.
81
Увеличение интенсивности триптофановой флуоресценции при онкологии.
В сыворотке крови молекулы альбумина существуют в виде мономеров и в виде олигомерных форм (дву-, три- и тетрамерных) форм.
Изучались спектры собственной флуоресценции сыворотки крови больных распространенным гнойным перитонитом. Наблюдались достоверные различия между показателями интенсивности флуоресценции сыворотки крови у таких пациентов по сравнению с контрольной группой, причем при гнойном перитоните с развитием процесса собственная флуоресценция сыворотки крови возрастала. Более детальное исследование спектров флуоресценции сыворотки крови больных перитонитом показало, что высокие показатели интенсивности флуоресценции (по сравнению с контрольной группой) достоверно изменяются в динамике заболевания, отражая, таким образом, степень его тяжести (реактивная, токсическая стадии и стадия полиорганной недостаточности).
При ревматоидном артрите степень собственной флуоресценции сыворотки крови уменьшалась по сравнению с флуоресценцией у лиц контрольной группы.
-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
1961 - Карякин А.В. Гладкова М.А. Милаева М. (Москва, НИИ Грудной хирургии АМН) Сравнительное исследование спектров поглощения и флуоресценции сыворотки крови больных раком легкого и здоровых людей. Биофизика. 1961.т.6. №2. с.240-242.+
Спектр поглощения сыворотки крови имеет два основных максимума 230 и 280 мкм. Регистрация спектров неразведенной сыворотки крови проводилась с помощью спектрографа ИСП-51. При возбуждении сыворотки крови светом ртутной лампы (пик излучения 365 нм) с флильтром на длину волны 365 нм зарегистрирована слабая флуоресценция. Основной пик в диапзоне 507-520 нм с размытой вершиной, и побочный пик в области 465-470 нм. При окраске сыворотки крови различными красителями регистрировался один максимум флуоресценции. Этот максимум соответствует не растворенному красителю, а адсорбированному на белках сыворотки красителю. При этом максимум флуоресценции смещается на 5-10 мкм в коротковолновую область спектра. При адсорбции красителей на тканях легкого, пищевода и фильтровальной бумаге смещение максимума составляет 15-20 нм. Проведенные исследования спектров не позволили выявить отличий флуоресценции сыворотки крови здоровых пациентов и пациентов с онкологией.
Рис. 2-2. Спектр флуоресценции сыворотки крови.
Для получения достоверных спектров флуоресценции были не совсем оптимально выбраны длина волны возбуждения и диапазон регистрации, не было соответствующей аппаратуры. При возбуждении 360 нм была зарегистрирована слабая флуоресценция коферментов НАД Н, но не хватило чувствительности прибора для получения достоверных данных о флуоресценции.
82
1976 - Фирсова В.И. Гаврилов Г.А. Манойлов С.Е. Вопросы онкологии. 1976. т.22. с.95-97. При регистрации флуоресценции сыворотки крови у крыс с привитой лимфосаркомой. Возбуждение
– 280-297 нм, регистрация – 300-400 нм. Обнаружили увеличение флуоресценции на 19-41% и сдвиг спектра в коротковолновую область на 4-5 нм.
1982 - Григорович Н.А. Черницкий Е.А. Слобожанина Е.И. Альтаментова С.М. (Минск, НИИ Онкологии) Об изменении параметров ультрафиолетовой флуоресценции сыворотки крови при онкологических заболеваниях. Доклады Академии наук Белорусской ССР. 1982. т.26. №4. с.372-374.+ Исследовалась сыворотка крови со злокачественными новообразованиями. Возбуждение - 297 нм. Выявлено увеличение интенсивности флуоресценции по сравнению с нормой. Степень увеличения различна для различных локализациях опухоли. Обнаружен сдвиг флуоресценции в коротковолновую область на 1-1,5 нм.
1991 - Зайденберг М.А. Терехова Р.П. Изменение флуоресценции триптофана в сыворотке крови как возможный показатель развития генерализации гнойной инфекции. Биохимические проблемы хирургии: сб. науч. тр. ред. В. Д. Федорова, А. А. Карелина. Москва. 1991. с.47-61.
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
2010Витебск - ВГМУ
2010 - Иванова С.В. Кирпиченок Л.Н. Флуоресценция, протеолитическая и ингибиторная активность сыворотки крови при хранении и размораживании. Медико-биологические проблемы жизнедеятельности. 2010. №3. с.36-41.+ 2012 - Демидов А.Л. Изофатова И.Г. Иванова С.В. (Витебск, ВГМУ) Интенсивность
собственной флуоресценции сыворотки крови как показатель развития воспалительного процесса при перитоните. Конф. Витебск. 2012. с.14-16.+ Регистрировался спектр флуоресценции сыворотки крови при возбуждении 286 нм. Максимум флуоресценции регистрировался на 333-335 нм. Было выявлено значительное увеличение флуоресценции у больных по сравнению с нормой.
Рис. 2-3. Флуоресценция сыворотки крови при возбуждении 286 нм. 1-норма, 2-реактивная стадия перитонита, 3-токсическая стадия перитонита, 4-стадия полиорганной недостаточности.
83
2.1.1.2 Анализ флуоресценции продуктов окисления белков.
Битирозин (bytyrosine, dytirosine), пик (325,416).
Битирозин флуоресцирует на длине волны 400 (416) нм при возбуждении 325 нм.
2010 – Красноярск - СФУ
2010 - Белоногов Р.Н. (Красноярск, СФУ) Оценка содержания флуоресцентных маркеров окисления белков в плазме крови больного раком легкого.
2010 – Белоногов Роман Николаевич. Редокс-зависимая модификация белков у больных раком легкого. Диссертация кандидата биологических наук. Новосибирск. 2010. 131с.
2012 – Титова Н.М. Белоногов Р.Н. (Красноярск, СФУ) Оценка содержания флуоресцентных маркеров окисления белков в плазме крови больных раком легкого. 2012. с.103-106.+ 2012 - Белоногов Р.Н. Лапешин П.В. Иванова Ю.Р. Покровский А.А. Шевцова А.О. Содержание продуктов свободнорадикального окисления в крови больных раком легкого. 2012.+
Метод определения флуоресценции битирозина. В ходе одноэлектронного окисления тирозина образуется долгоживущий тирозил-радикал, который при взаимодействии с таким же радикалом образует битирозиновые сшивки. Концентрация битирозина в крови больных выше, чем в норме. Битирозиновую флуоресценцию измеряют при длине волны 416 нм, длина волны возбуждения – 325 нм.
2005 - Половинкин Л.В. Ткачев С.В. Половинкина Т.И. Ежелева С.Н. Сорока Л.И. Инструкция по определению веществ средней молекулярной массы и продуктов перекисного окисления белков в токсикологическом эксперименте. Министерство здравоохранения республики Беларусь. 2005 г.
Рис. 2-4. Спектр поглощения и флуоресценции тирозина при рН=7
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------
1983 – Hlsao Mabuchl and Hisamitsu Nakahashl (Japan ) Liquid-Chromatographic Profiling of Endogenous Fluorescent Substances in Sera and Urine of Uremic and Normal Subjects. Clinical
Chemistry. Vol. 29, No. 4, 1983. p.675-677.+
С помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с флуоресцентным детектором исследовали сыворотку крови и мочу. Возбуждение 322 нм, флуоресценция 415 нм. Обследовались здоровые пациенты и пациенты с уремией. Выявлено различие. Отмечается, что вещество с аналогичными параметрами флуоресценции было выявлено в работе
1980 - Depner TA, Gulyassy PF. Plasma protein binding in uremia: Extraction and characterization of an inhibitor. Kidney mt 18, 86-94 (1980).
-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Литература по битирозину.
1984 - Amado R. Aeschbach R. Neukom H. Dytirosine: in vitro production and characterization. Methods Enzymol. 1984. Vol. 107. P. 377-388.
84
1987 - Davies K.J. Protein damage and degradation by oxygen radicals. I. General aspects. J. Biol. Chem. 1987. vol.262. №20: p.9895-9901.
1997 - Dean R.T. Fu S. Stocker R. et al. Biochemistry and pathology of radical-mediated protein oxidation. Biochem. J. 1997; 324: p.1-18.
-----------------------------------------------------------------------------------------------
1993 - Дубинина Е.Е. Шугалей И.В. Окислительная модификация белков. Успехи современной биологии. 1993. т.113. № 1. с.71-79.
2002 - Дубинина Е.Е. Гавровская С.В. Кузьмич Е.В. и др. Окислительная модификация белков: окисление триптофана и образование в очищенных белках с использованием системы Фентона.
Биохимия. 2002. т.67. с.413-421.
2005 - Половинкин Л.В. Ткачев С.В. Половинкина Т.И. Ежелева С.Н. Сорока Л.И. (Минск, БГМУ) Инструкция по определению веществ средней молекулярной массы и продуктов перекисного окисления белков в токсикологическом эксперименте. Министерство здравоохранения республики Беларусь. 2005 г.
2012 – Якубовский С.В. Ткачев С.В. (Минск) Окислительная модификация белков сыворотки крови у больных острым холециститом.+ Определялось содержание биитирозина флуоресцентным методом. Спектр флуоресценции регистрировался с помощью спектрофотометра СМ 2203 (фирма Солар, Минск). Битирозин возбуждали 325 нм, регистрировали 416 нм. Флуоресценцию триптофанилов белков сыворотки определяли -битирозин – возбуждение – 325 нм, флуоресценция 416 нм, -триптофанилы – возбуждение 297, флуоресценция 336 нм, -гликолизированные белки – возбуждение 380 нм, флуоресценция 490 нм.
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
2.1.1.3 Анализ флуоресценции коферментов НАД Н. Пик (290,440)– восстановленный, (350,460)-окисленный.
При заболевании раком усиливается флуоресценция коферментов (NADN) (460 нм) по отношению к флуоресценции триптофана (350 нм) Увеличивается отношение интенсивностей флуоресценции I350/I460 при возбуждении светом с длиной волны 315 нм.
Специфические изменения параметров флуоресценции сыворотки крови были обнаружены при злокачественных новообразованиях. В экспериментах на крысах с перевитой лимфосаркомой Плисса показано, что развитие опухоли приводит к увеличению интенсивности ультрафиолетовой флуоресценции сыворотки крови на 19-41% и к сдвигу ее спектров на 4-5 нм в коротковолновую область. Проводились исследования сыворотки крови при возбуждении ее светом с длиной волны 313 нм и регистрировали спектр сыворотки с максимумами испускания 350 и 470 нм. Диагностически полезным оказался коэффициент, равный отношению интенсивностей этих двух максимумов. Сравнивались флуориметрические данные и окончательный клинический диагноз для различных локализаций злокачественных опухолей. Было показано, что процент совпадения диагностических заключений, сделанных флуориметрическим и клинико-морфологическим способами, зависит от вида опухоли, ее локализации и размера. Наиболее эффективным данный метод оказался для выявления лимфогранулематоза - 90% совпадений, а для большинства локализаций - не хуже, чем при диагностике с помощью определения в крови больного раково-эмбрионального антигена. Аналогичные исследования спектра флуоресценции сыворотки крови были проведены при гемобластозах и различных опухолевых заболеваниях системы крови и также выявили изменения данного специального флуориметрического коэффициента.
1968 - Сидорик Е.П. Веревка Н.А. Петренко М.Т. В сб. Вопросы экспериментальной онкологии. Киев. 1968. ч3. с.145-152. Изучали флуоресценцию сыворотки крови в видимой области.
85
Возбуждение 365 нм, флуоресценция 400-500 нм. Не удалось выявить различия между здоровыми и больными с онкологией. Это объясняется недостаточной точностью и диапазон регистрируемой флуоресценции.
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------
2004 - Лаврик Н.Л. Муллоев Н. Широва Л.А. Солдатова Г.C. Чурин Б.В. (Новосибирск, Институт химической кинетики и горения, лаборатория фотохимии) Изучение изменений сыворотки крови после жировой нагрузки с помощью метода флуоресценции. Конф. Новосибирск. 2004. Возбуждение сыворотки проводили с помощью азотного лазера. Регистрировался спектр флуоресценции сыворотки крови с максимумом на 490 нм, для которых измерялась величина первого момента. Полученные результаты означают, что максимальные изменения сыворотка крови претерпевает спустя 4 часа после жировой нагрузки. 2007 - Лаврик Н.Л. Муллоев Н. Широва Л.А. Солдатова Г.C. Чурин Б.В. Изучение влияния пищевой нагрузки жиром на концентрацию оксигемоглобина в сыворотке венозной крови человека методом абсорбционной спектроскопии. Экологическая химия, 2007. т.16. №2. с. 125-
132.
Необходимо отметить, что флуоресценцию на длине волны 490 нм имеют гликолизированные белки. Гликолизированные белки – возбуждение 380 нм, флуоресценция 490 нм.
1997 - Munch, G. Keis, R. Wessels, A. et al. Determination of advanced glycation end products in serum fluorescence spectroscopy and competitive ELISA. Eur. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 1997; 35: 669-677.
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
1972 - Беларуссия - Минск - Институт Фотобиологии НАН
Черницкий Евгений Александрович (1932 - 1999) - дбн, проф.
1983 - Черницкий Е.А. Слобожанина Е.И. Люминесценция сыворотки крови и диагностика некоторых заболеваний. Известия АН БССР. Серия биологическая. 1983. №5. с.61-66.
1989 - Черницкий Е.А. Слобожанина Е.И. Спектральный люминесцентный анализ в медицине. АН БССР. Институт фотобиологии. Минск. Наука и Техника. 1989. 140 с.
1982 - Беларуссия - Минск - НИИ Онкологии и медицинской радиологии
РНПЦ Онкологии - Государственное учреждение - Республиканский научно-практический центр онкологии и медицинской радиологии им. Н.Н. Александрова.
Григорович Николай Александрович - врач онколог, кмн, дбн, гинеколог, заместитель директора по научной работе НИИ онкологии и медицинской радиологии МЗ БССР в 1967-1972 гг. руководитель диагностического отдела института в 1968-1984 гг. руководитель лаборатории клинической иммунологии опухолей в 1972-1986 гг.
1982 - Григорович Н.А. Черницкий Е.А. Слобожанина Е.И. Альтаментова С.М. (Минск, НИИ Онкологии) Об изменении параметров ультрафиолетовой флуоресценции сыворотки крови при онкологических заболеваниях. Доклады Академии наук Белорусской ССР. 1982. т.26. №4.
с.372-374.+
Исследовалась сыворотка крови со злокачественными новообразованиями. Возбуждение 297 нм. Выявлено увеличение интенсивности флуоресценции по сравнению с нормой. Степень увеличения различна для различных положениях опухоли. Обнаружен сдвиг флуоресценции в коротковолновую область на 1-1,5 нм.
1982 - Григорович Н.А. Черницкий Е.А. Слобожанина Е.И. Альтаментова С.М. Монастырная П.Л. Флуоресцентный способ диагностики злокачественных новообразований. 1-й Всесоюзный биофизический съезд. Тезисы докладов. Москва. 1982. т.3. с.154.
Регистрируется спектр флуоресценции плазмы крови при возбуждении 317 нм. Регистрируется отношение интенсивности флуоресценции I350/I460. В норме коэффициент равен 0,91. При большем значении возможна онкология.
86
1983 - Черницкий Е.А, Слобожанина Е.И. Люминесценция сыворотки крови и диагностика некоторых заболеваний. Известия АН БССР. Серия биология. 1983. №5. с.61-65.
1983 - Григорович Н.А. Алекса Т.Ф. Использование цитофлуоресцентных методов для идентификации лимфоцитов и макрофагов, оценки их функционального состояния. Иммунология. №1. с.10-15.
1983 - Григорович Н.А. Монастырная П.Л. Черницкий Е.А. Слобожанина Е.И. Стефанович Ж.А. Шилов Н.И. Опыт клинического применения нового метода диагностики злокачественных новообразований. Актуальные проблемы онкологии и медицинской радиологии. Минск. 1983.
т.11. с.40-43.+ 1984 - Григорович Н.А. Использование цитофлуоресцентных методов для идентификации
лимфоцитов и макрофагов, оценки их функционального состояния. Иммунология. 1984. №1.
с.10-15.
1984 - Григорович Н.А. Ваккер А.В. Монастырная П.Л. Возможности диагностики опухолей головы и шеи флуоресцентным методом. 3-й съезд отоларингологов Белорусской ССР.
Тезисы. Минск. 1984. с.272-273.
1985 - Григорович Н.А. Сидорович М.Н. Лабораторные методы исследования при профилактических онкологических осмотрах. Актуальные проблемы онкологии и медицинской радиологии. Минск. 1985. т.13. с.57-60.+ 1986 - Григорович Н.А. Монастырная П.Л. Флуоресцентные показатели сыворотки крови у
больных меланомой кожи в процессе и в разные сроки после окончания комплексного лечения с применением местной СВЧ-гипертермии. Актуальные проблемы онкологии и медицинской радиологи. Минск. 1986. с.67-70.
1986 - Григорович Н.А. Проблема донозологической диагностики злокачественных новообразований. Актуальные проблемы онкологии и медицинской радиологи. Минск. 1986.
с.29-32.+ 1986 - Григорович Н.А. Черницкий Е.А. Слобожанина Е.И. Альтаментова С.М. Монастырная
П.Л. Новый способ диагностики злокачественных новообразований. Лабораторное дело. 1986.
№6. с.382-383.
1987 - Григорович Н.А. Черницкий Е.А. Монастырная П.Л. Слобожанина Е.И. Способ диагностики злокачественных опухолей по люминесцентным параметрам крови. Здравоохранение Белоруссии. 1987. №8. с.31-32.+
Регистрируется спектр флуоресценции плазмы крови при возбуждении 317 нм. Регистрируется отношение интенсивности флуоресценции I350/I460. I350 - триптофановая флуоресценция белков, I460 - флуоресценция НАД-Н. В норме коэффициент равен 0,91. При большем значении возможна онкология.
1988 - Григорович Н.А. Слобожанина Е.И. Черницкий Е.А. Савостьянов В.В. Параметры собственной флуоресценции плазмы крови при гемобластозах. Лабораторное дело. 1988. №2.
с.22-23.+ 1988 - Григорович Н.А. Черницкий Е.А. Слобожанина Е.И. Монастырная П.Л. Метод
диагностики злокачественных новообразований, основанный на собственной флуоресценции сыворотки крови в ультрафиолетовой и видимой областях спектра. Вопросы онкологии. 1988. т.34, №6. с.664-668.+ Регистрировались спектры флуоресценции сыворотки крови в диапазоне 325-500 нм при возбуждении 313-317 нм. Регистрировались два максимума флуоресценции – 340-350 – белки, и 450-470 нм – коферменты РАД Н и НАДФ Н.
87
Рис. 2-5. Спектры флуоресценции сыворотки крови. 1-здоровые, 2-беременные и больные со злокачественными образованиями. Возбуждение 313-317 нм.
1988 - Григорович Н.А. Савостьянов В.В. Монастырная П.Л. Параметры собственной флуоресценции сыворотки крови при лимфогранулематозе и других гемабластозах. Актуальные проблемы онкологии и медицинской радиологии. Минск. 988. с.107-112.
2007 - Аршакян Х.А. Пушкарев С.В. Половников Е.С. Мешалкин Ю.П. (Новосибирск, НГМУ) Диагностические возможности индуцированной лазером флуоресценции смывов с шейки матки при онкологических заболеваниях. Бюллетень СО РАМН. 2007. № 1 (123). с.30-34.+
Возбуждение осуществлялось лазером с длиной волны 266 нм. Регистрация спектров флуоресценции проводилась в диапазоне 275-500 нм. Анализировались два пика флуоресценции - 343 нм - белки, и 435 нм - NADH. Информативным критерием является отношение интенсивности флуоресценции I343/I435. В норме отношение равняется 18, при онкологии - 3.
Рис. 2-6. Спектр флуоресценции смыва с шейки матки в норме и при онкологии.
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
2001 – USA - The Center For The Improvement Of Huma n Functioning, International, Inc. Mikirova Nina (Mikarova Nina)
2001 - Hugh D. Riordan, Paul Rillema, Nina Mikarova. Detection of metabolic dysfunctions using fluorescence emission from serum. Patent US 6813009 B2. 2001.
2003 – Nina Mikirova, Hugh D. Riordan, Paul Rillema , Detection of Energy Metabolism Level in Cancer Patients by Fluorescence Emission from Serum. Journal of Orthomolecular Medicine Vol. 18, No. 1, 2003.+
88
Флуоресценция измерялась на спектрофлуориметре SPEX FluorologII, Jobin Yvon Horiba. Возбуждение 315-340 нм, флуоресценция 330-600 нм. Регистрировались два пика – 350 нм
(белок) и 450 нм (NAD(P)H).
Рис. 2-7. Спектр флуоресценции сыворотки крови при возбуждении 315 нм.
Рис. 2-8. Распределение значений интенсивности флуоресценции на длине волны 450 нм при возбуждении 315 нм в норме и для больных с опухолью.
Рис. 2-9. Распределение значений отношения I450/I400 в норме и при наличии опухоли.
89
Рис. 2-10. Представление спектра флуоресценции сыворотки в виде суммы двух компонент – триптофан и NADH.
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
2005 – Abha Uppal, Nirmalya Ghosh, Anindya Datta an d Pradeep Kumar Gupta (India) Fluorimetric estimation of the concentration of NADH from human blood samples. Biotechnology and Applied
Biochemistry (2005) 41, p.43–47.
Спектрофлуориметр – SPEX FluorologII, Jobin Yvon Horiba. Диапазон регистрации спектра – 340-650 нм. Возбуждение – 340 нм. Максимум флуоресценции- 470 нм. При разведении сыворотка 1:100 в PBS (phosphate buffered saline) – натрий-фосфатном буфере интенсивность флуоресценции уменьшилась в два раза.
Рис. 2-11. Спектр флуоресценции и возбуждения (extracted intrinsic fluorescence spectra) крови с добавлением SDS (сплошная) и без добавления SDS (пунктирная), возбуждение 340 нм.
90