6 курс / Клинические и лабораторные анализы / Флуоресцентные_методы_диагностики_в_медицине_Колтовой_Н_А_Краевой

2001 - Александров М.Т. Пашков Е.П. Нестерова М.В. Метод флуоресцентной диагностики - метод индикации микрофлоры человека в норме и патологии. - ЖМЭИ, 2001, №3.

2002 - Александров М.Т. Титова С.Н. и др. Экспресс-метод оценки эффективности лечения гнойной раны на основе применения лазерной флуоресцентной фотометрии. Стоматология для всех. 2002. №2.

2002 - Морозова О.А. Экспериментальное обоснование экспресс метода лазерной флуоресцентной диагностики заболеваний микробной природы. Диссертация кандидата медицинских наук. М. 2002.

2003 - Александров М.Т. Воробъев А. Пашков Е. Филатов М. Мищенко И. Багранова Г. Лазерная флуоресцентная диагностика в медицине, пищевой промышленности, экологии.

Электроника. 2003. №3. с.54-59.+ 2008 - Александров М.Т. Прикулс В.Ф. Геворков Г.Л. Козьма С.Ю. Моделирование

жизнедеятельности микрофлоры на основе флюоресцентных биотехнологий. Стоматология.

2008. №6. с.41-42.+ 2008 - Александров М.Т. Лазерная клиническая биофотометрия. М. Техносфера. 2008. 553 с.+

2009 - Александров М.Т. Васильев Е.Н. Воропаева М.И. Гапоненко О.Г. Иванова М.А. Кузьмин Г.П. Макарова М.В. Милонич А.И. Хоменко В.А. Способ дифференциальной диагностики микробов и сложных аминокислот. Патент 2362145. 2009.+

Alexandrov M.T. Taubinsky I.M. Kozma S.J. Romanov A.M. Perspectives of studying of own fluorescence of dental solid tissues. - Proc. SPIE, vol. 3829.

Alexandrov M.T. Taubinsky I.M. Kozma S.J. Romanov A.M. Laser-induced tissue fluorescence in

patients with benign and premalignant changes of the uterine cervix.Proc. SPIE, vol. 3829.

2010 – Иванова Мария Александровна. Разработка принципов ускоренной идентификации микобактерий лазерно-флуоресцентным методом. Диссертация кандидата медицинских наук. Москва. 2010.

Выявление микробактерий туберкулеза.

1957 - Полякова О.А. Флуоресцентаня микроскопия при диагностике туберкулеза и паратуберкулеза. Ветеринария. 1957. №6.

1965 - Белоусов А.В. Люминесцентная бактериоскопия микробактерий туберкулеза, не выявляемых обычным методом. Лабораторное дело. 1969. №5. с.312-314.

181

3.1.4 Автофлюоресценция клеток.

В медицинской микробиологии применяют два метода люминесцентной микроскопии: метод с использованием флуорохромирования и метод меченных флуорохромами антител. Метод флуорохромирования почти не отличается от общеизвестных методов окрашивания стандартными красителями, и требует меньше времени (доли минуты). В бактериологии этот метод применяется как метод люминесцентного выявления возбудителя туберкулеза, для диагностики таких инфекционных заболеваний, как дифтерия, гонорея, возвратный тиф и др.

Флуорохромы - красители, флуоресцирующие при облучении ультрафиолетовыми лучами. Из синтетических флюорохромов наилучшие результаты дают акридиновый оранжевый, корифосфин, примулин, родамин, ФИТЦ (флюоресцеинизотиоцианат), которые обычно применяют в виде слабых водных растворов.

1960 - Брумберг Е.М. Барский И.Я. Шудель М.С. (Санкт-Петербург, ГОИ) Об ультрафиолетовой флуоресценции клеток. Цитология. 1960. т.2. №5. с.589.

1963 - Орлова И.И. Люминесцентно-микроскопический анализ обратимой и неоратимой деструкции клеток. Архив анат. гистол. эмбриол. 1963. №10. с.73-78.

1963 - Трошин А.С. Баренбойм Г.М. Люминесцентные методы в цитологии. Вестн. АН СССР. 1963. №6. с.73.

1967 - Афанасьева Х.Г. Пливоа т.Е. Солодовникова А.А. Татаркина В.В. Угрбмова Р.П. Цитронблат Д.В. (Санкт-Петребррг, Поликлиника) Люминесцентная микроскопия в комплексном клиническом обследовании онкологических больных и профилактических осмотрах женщин. 1967 - Лабораторное дело. 1967. Исследовалась флуоресценция сухих нефиксированных мазков.

1964 - Санкт-Петербург - Институт Цитологии АН)

1964 - Черногрядская Н.А. Бузе Э.Г Асташина т.П. Изучение интенсивности фльтрафиолетовой флуоресценции клеток в процессе митоза. 13 совещ. по люминесценции. М. 1964. с.114.

1964 - Черногрядская H.А. Пильщик Е.М. Шуделъ М.С; Кудрявцева М.В. Асташина т.П. Некоторые данные по ультрафиолетовой флуоресценции клеток различных тканей. В кн.: "Электронная и флуоресцентная микроскопия клетки". М. Л. “ Наука”, 1964, с.82-87.

1969 - Розанов Ю.М. Черногрядская H.А. Шуделъ М.С. Боровиков Ю.С. Изучение спектров ультрафиолетовой флуоресценции клеток различных тканей. Цитология, 1969, т.11, № 1. с.104. 1978 - Черногрядская Н.А. Розанов Ю.М. Богданова М.С. Боровиков Ю.С. Ультрафиолетовая флуоресценция клетки. Л. Наука. 1978. 215 с.+

1968 - Пущино - Институт биофизики клетки - Лаборатория микроскопектрального анализа клеток и клеточных систем

Карнаухов Валерий Николаевияч - кбн, зам. дир. зав. лаб.

1968 - Карнаухов В.Н. Спектральные исследования энергетического аппарата живых нервных клеток. Биофизика, 1968, т.13, № 4, с.622-629.

1970 - Карнаухов В.Н. Живая клетка как объект спектральных исследований. Биофизика живой клетки. т.1. Пущино, 1970, с.113-117.

1978 - Карнаухов В.Н. Люминесцентный спектральный анализ клеток. М. Наука. 1978. 208с. 1988 - Карнаухов В.Н. Спектральный анализ клеток в экологии и охране окружающей среды. ОНТИ НЦБИ РАН, Пущино. 1988. 104с.

2004 - Карнаухов В.Н. Люминесцентный анализ клеток. Пущино. 2004.+

182

1985 - Комолое В.Ф. Степанова Н.В. Черняева Е.Б. Чикишев А.Ю. Избирательное воздействие лазерного излучения на раковые клетки и лазерная спектроскопия клетки [обзор]. Квантовая электроника. 1985. т.12. № 10. с.1997-2023.

2012 - Карташев А.Я. Ягунов А.С. Киселева Л.Н. Виноградов В.М. Поздняков А.В. (СанктПетербуррг, РНЦ радиологии) Ультрафиолетовая флуоресценция клеток. Научно-практические рекомендации. 2012. 220 с.

1988 - S. Ganesan, P.G. Sacks, Y. Yang, A. Katz, M.A.L. Rawi, H.E. Savage, P. Schantz, R. Alfano, Native fluorescence spectroscopy of normal and malignant epithelial cells, Cancer Biochem. Biophys. 16 (4) (1988) 365–373.

1997 - Andersson, H. Baechi, T. Hoechl, M. and Richter, C. Autofluorescence of living cells. Journal of Microscopy 191: 1-7 (1997).

1998 - Ganesan S, Sacks PG, Yang Y, et al: Native fluorescence spectroscopy of normal and malignant epithelial cells. Cancer Biochem Biophys, 1998; 16: 365-373.

1998 - Brock, R. Hink, M. A. and Jovin, T. M. Fluorescence correlation microscopy of cells in the presence of autofluorescence. Biophysical Journal 75: 2547-2557 (1998).

1999 - Papadopoulos AJ, Zhadin, NN, Steinberg, ML, Alfano R.R. Fluorescence spectroscopy of normal, SV40-transformed human keratino-cytes and carcinoma cells. Canc Biochem Biophys, 1999; 17: 13-23.

2005 - Monici, M. Cell and tissue autofluorescence research and diagnostic applications. Biotechnology Annual Review 11: 227-256 (2005).

2005 - Mansfield, J. R. Gossage, K. W. Hoyt, C. C. and Levenson, R. M. Autofluorescence removal, multiplexing, and automated analysis methods for in-vivo fluorescence imaging. Journal of Biomedical Optics 10: 041207 (2005).

2005 - Monici, M. Cell and tissue autofluorescence research and diagnostic applications. Biotechnology Annual Review 11: 227-256 (2005).

183

3.2 Флуоресценция экзогенных флуорофоров в тканях, индуцированная флуоресценция тканей. Фотодинамическая диагностика и терапия.

Впоследнее время широкое распространение получила фотодинамическая диагностика

ифотодинамическая терапия (pdt - photodynamic therapy). Фотодинамическая терапия (ФДТ) - часть фотохимиотерапии, при которой помимо света и препарата необходим кислород. Механизмы цитотоксичного действия ФДТ были детально показаны в работах T.J.Dougherty и соавт. Введенные в организм молекулы фотосенсибилизатора избирательно фиксируются на мембранах опухолевых клеток и митохондриях. Максимальная концентрация препарата в тканях достигается через 24-72 часа. При облучении фотосенсибилизированной опухолевой ткани лазерным излучением происходит переход нетоксичного триплетного кислорода (IIIO2) в синглетный (IO2) кислород, обладающий выраженным цитотоксичным действием, что приводит к разрушению клеточных мембран опухолевых клеток. Синглетный кислород, несмотря на короткое время действия, успевает полностью разрушить опухолевые клетки. При этом цитотоксический эффект зависит от концентрации фотосенсибилизатора, глубины проникновения света в ткани опухоли.

Можно выделить два основных направления исследований -фотодинамическая диагностика, -фотодинамическая терапия.

3.2.0 История изучения фотодинамической терапии.

Прообразом современной ФДТ можно считать попытки древних египтян применять светопоглощающие препараты при кожных заболеваниях. Содержащиеся в растении соединения природные фотосенсибилизаторы (псоралены) обладают свойством сенсибилизировать кожу к действию света. Это способствует восстановлению пигментации кожи. Фотосенсибилизация и фотохимические реакции при использовании псораленов протекали без участия кислорода.

Кислородозависимую фотодинамическую реакцию открыл зимой 1897/98 г. O.Raab - студент фармакологического института Мюнхенского университета при изучении эффектов света и красителей на парамеции (Paramecium). Он заметил, что парамеции активно двигались в растворе красителя - акридинового кислого в темноте или при инкубации под солнечным светом без красителя. Комбинация раствора акридинового красителя и экспозиции под солнечным светом убивала парамеции. Это наблюдение вызвало два главных вопроса: 1) придает ли акридиновый краситель свету токсические свойства, например, путем поглощения необходимой для жизни длины волны? 2) превращает ли свет акридиновый краситель в токсическое вещество? Первая гипотеза была отвергнута после эксперимента, в котором парамеции выживали в обычном растворе, когда свет отдельно пропускался через раствор акридинового красителя, используемого в качестве светофильтра.

Таким образом, акридиновый краситель не превращал свет в токсичное излучение. Тем не менее, специфическими свойствами акридинового красителя являются абсорбция и флюоресценция. Абсорбция не сделала свет токсичным, поэтому флюоресценция была расценена как главный повреждающий параметр в механизме гибели. O.Raab предположил, что флюоресцирующие субстраты наподобие акридинового красителя трансформируют энергию света в активную химическую энергию ("living chemical energy"), которая вызывает смерть парамеций. Активная химическая энергия лежит в основе фотодинамической терапии.

1903 - Датский физик Finsen удостоен Нобелевской премии за работы в области фототерапии - «в знак признания его заслуг в деле лечения болезней - особенно волчанки - с помощью концентрированного светового излучения, что открыло перед медицинской наукой новые широкие горизонты». Первые научные исследования в области медицинского применения света были сделаны в Копенгагене датским физиком Finsen. Самым важным его открытием стала возможность применения солнечного света или света, получаемого от угольной дуги, для лечения туберкулезной волчанки (туберкулезного поражения кожи). Это открытие получило

184

широкое признание. В 1896 году в Копенгагене был основан Институт Светолечения, директором которого стал Финсен.

1903 - Базируясь на новых знаниях по фотодинамике, H.Tappeiner и H.Jesionek в 1903 г. провели первый сеанс ФДТ больному раком кожи, используя в качестве фотосенсибилизатора эозин. В 1905 г. они описали первые результаты лечения 6 больных базально-клеточным раком кожи лица местным применением 1% раствора эозина и длительным облучением солнечным или искусственным светом от дуговой лампы. Они добились полной резорбции очагов у 4 больных с длительностью безрецидивного периода в течение 1 года. Тогда же H.Tappeiner и A.Jodlbauer ввели термин "фотодинамическое действие" ("photodynamische wirkung").

1903 - Tappeiner H. Jesionek H. Therapeutische Versuche mit fluoreszierenden Stoffen. Munch. Med. Wschr. - 1903. - Vol. 50. p.2042-2044.

1904 - Tappeiner H. Jodlbauer A. Uber die Wirkung der photodynamischen (fluoreszierenden) Stoffen auf Protozoen und Enzyme. Dtsch. Arch. Klin. Med. - 1904. - Vol. 80. p.427-437.

1905 - Jesionek H. Tappeiner H. Zur Behandlung der Hautcarcinome mit fluoreszierenden Stoffen. Dtsch. Arch. Klin. Med. - 1905. - Vol. 82. p.223-226.

1908 - Первое сообщение о фототоксичности гематопорфирина сделал W.H.Hausmann в 1908 г. Он установил, что гематопорфирин - это активный сенсибилизатор для парамеций и эритроцитов. Незадолго до 1910 г. автор провел оригинальные эксперименты на белых мышах. Мышам вводили гематопорфирин и затем облучали солнечным светом. Это приводило к развитию реакций, которые изменялись в зависимости от количества фотосенсибилизатора или от света. W.H.Hausmann предположил, что первичный эффект ФДТ был обусловлен повреждением периферических сосудов.

1910 - Hausmann W.H. Die sensibilisierende Wirkung des Hamatoporphyrins. Biochem Z. 1910. Vol. 30. p.276-316.

1910 - Hausmann W.H. Die sensibilisierende Wirkung tierischer Farbstoffe und ihre physiologische Bedeutung. Wien. Klin. Wochenschr. 1908. Vol. 21. p.1527-1529.

1913 - Впервые действие гематопорфирина на человеческий организм испытал в сенсационном эксперименте на себе самом F.Meyer-Betz. 14 октября 1912 г. он ввел себе внутривенно 0,2 г гематопорфирина и продемонстрировал солнечную фоточувствительность в виде отека и гиперпигментации, которые продолжались в течение 2 месяцев. Последующие исследования подтвердили, что системное применение гематопорфирина вызывает интенсивную фотосенсибилизацию различных тканей, в том числе кожи.

1913 - Meyer-Betz F. Untersuchung uber die biologische (photodynamische) Wirkung des Hamatoporphyrins und anderer Derivate des Blutund Gallenfarbstoffs. Dtsch. Arch. Klin. Med. - 1913. Vol. 112. P.476-503.

1987 - Bonnett предложил использовать в качестве сенсибилизаторов тетрагидроксифенилхлорин и соответствующий ему бактериохлорин. Эти соединения имеют интенсивные максимумы в области 650 нм и 735 нм и обладают относительно низкой фототоксичностью.

2001 - Ackroyd R. Kelty C. Brown N. Reed M. The history of photodetection and photodynamic therapy / Photochem. Photobiol. 2001. Vol. 74. p.656-669.

185

3.2.1 Порфирины в тканях.

Порфирины обладают высокой селективной способностью накапливаться в опухолевых клетках.

В 1924 году автофлуоресцению злокачественной опухоли описал французский врач A.Policard из Лиона. Автофлуоресценция была вызвана наличием эндогенных порфиринов. Он наблюдал автофлюоресценцию в некротизированной части удаленной саркомы крысы. Автофлюоресценция порфиринов наблюдалась при освещении лампой Вуда. В 1954 году A. Policard установил, что введенный в организм гематопорфирин накапливается в опухолевой ткани, и при облучении синим светом обусловливает флуоресценцию в красной области спектра. Это позволяет использовать его для выявления опухолей и определения их границ.

1924 - Policard A. Etudes sur les aspects offerts par des tumeurs experimentales examines a la lumiere de Wood. CR Soc. Biol. - 1924. - Vol. 91. p.1423-1424.

В 1942 году Auler и Banzer из Берлина описали красную флуоресценцию экзогенно введенных порфиринов в злокачественных опухолях.

-Auler B.A. Banzer G. Untersuchungen ueber die Rolle der Porphyrine bei geschwulskranken Menschen und Tieren. Z. Krebsforsch. 1942: 53: 65-68.

В 1948 году Figge исследовал термотропные свойства порфиринов, и применил их для диагностики и лечения опухолей. Они вводили различные порфирины, в том числе гематопорфирин, копропорфирин, протопорфирин и цинкгематопорфирин 240 мышам с экспериментально индуцированными и трансплантированными опухолями. Присутствие каждого из порфиринов было обнаружено в опухоли каждого типа. Флуоресценция проявлялась в течение 24-48 часов после введения и продолжалась 10-14 дней. Флуоресценции не наблюдалась в других нормальных тканях, кроме лимфатических узлов, сальника, фетальной и плацентарной ткани и в заживающих ранахю

1948 - Figge H.J. Weiland G.S. Manganiello L.J. Cancer detection and therapy, affinity of neoplastic, embryonic and traumatized tissues for porphyrins and metalloporphyrins. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1948: 68: 640-641.

1948 - Figge H.J. Weiland G.S. The affinity of neoplastic emplastic embryonic and traumatized tissie for pirphyrins and metallporphyrins. Anatomical record. 1948. 659.

1951 - Manganiello L.O.J. Figge F.H.J.(1951) Cancer detecting and therapy II. Methods of preparation and biological effects of metalloporphyrins. Bulletin of the School of Medicine. University of Maryland. 1951. 36. 3-7.

В 1955 г. группе из 11 больных раком гематопорфирин был введен внутривенно в дозах от 300 до 1000 мг за 12-72 ч до операции. Яркая красная флюоресценция визуализировалась во время операции при облучении ближним ультрафиолетовым светом. Было сделано заключение, что красную флюоресценцию гематопорфирина и его тенденцию концентрироваться в опухолях можно использовать, чтобы во время операции выявить невидимые глазом опухоли и определить их границы. Мелкие или незаметные лимфатические узлы также можно обнаружить с помощью этой фотодинамической техники.

1955 - Rasmussen D.S. Ward G.E. Figge F.H.J. Fluorescence of human lymphatic and cancer tissues following high doses of intravenous hematoporphyrin. Cancer. 1955. Vol. 1. P.78-81.

В 1961 году Lipson et al. основываясь на работах S. Schwartz, синтезировал препарат, состоящий из мономеров и олигомеров гематопорфирина, который был назван «производное гематопорфирина» (ПГП, НрD).

1966 - Lipson R.L. Gray M.L. Baldes E.J. Hematoporphyrin derivative for detection and management of cancer. Proceedings of the IXth International Cancer Congress. 1966. p.323.

186

1983 - J. Surg. Oncol. 1983. 24. p.173-176. В работе предлагается использование порфиринов.

1984 - Aizawa К. Kato Н. Ono J. et al. Porphyrin localization and treatment of tumors. -N.Y. 1984. p.227.

1986 - Болодон В.Н. Воробей А.В. Черницкий Е.А. Влияние анестетиков на сенсибилизируемое порфиринами фотоповреждение клеток. Биофизика. 1986. 31. № 6. с.990-992.

1989 -Барабаш Р.Д. Норманский В.Е. Андреева К.П. и др. Патогенез сенсибилизированного порфиринами летального и сублетальногофотоповреждения. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. М, Медицина, 1989, с.436.

1989 - Барабаш Р.Д. Петухов М.И. Норманский В.Е. Сравнительные свойства порфириновых фотосенсибилизаторов, применяемых для лазерной фотодинамической терапии опухолей. Тез. конф.: "Лазеры в народном хозяйстве", 1989, с.100.

1990 - Барабаш Р.Д. Скобелкин O.K. Петухов М.И. и др. Фармакокинетика гематопорфирина и его производного, флюоресцеина при развитии карциносаркомы. Фармакология и токсикология, 1990, N3, с.24-26.

1990 - Барабаш Р.Д. Литвин Р.Д. Андреева К.П. и др. Фармакокинетика флюоресцеина, гематопорфирина и его производного при развитии грануломы. Фармакология и токсикология.

1990. т.53. с.45-50.

1991 - Зорин В.П. Хлудеев И.И. Горбацевич В.Н. и др. Механизмы проникновения и локализации производных порфирина в опухолевой ткани. Современное состояние и перспективы развития фармакокинетики. Сб. работ III Всесоюзн. конф. 1991. с.98.

1991 - Бахтияров О.Р. Садыков Р.А. Порфирины и лазерное излучение в диагностике и лечении злокачественных опухолей. Сов. мед. 1991, №11, с.35-37.

1992 - Henderson B.W. Dougherty T.J. How does photodynamic therapy work? Photochem Photobiol. - 1992. - Vol.55. p.145-157.

1993 - Jori G. Reddi E. The role of lipoproteins in the delivery of tumour-targeting photo-sensitizers Int. J. Biochem. - 1993. - Vol.25. p.1369-1375.

1998 - C F Polo, A L Frisardi, E R Resnik, A E Schoua and A M BatlleFactors influencing fluorescence spectra of free porphyrins. Clinical Chemistry April 1988 vol. 34 no. 4 757-760.

1996 - Странадко Е.Ф. Астраханкина т.А. Фотодинамическая терапия рака кожи. -М. 1996. 2002 - Странадко Е.Ф. Исторический очерк развития фотодинамической терапии. Лазерная медицина. 2002. т.6. №1. с.4-8.

2003 - Странадко Е.Ф. Рябов М.В.. Новая лазерная технология в медицине-Фотодинамическая терапия. Анналы хирургии. 2003. №2. с.16-20.

2011 - Москва - Российский Онкологический центр

Дутикова Юлия Вячеславовна. Механизмы гибели опухолевых клеток при действии новых модифицированных порфиринов. Диссертация кандидата биологических наук. Москва. 2011.

187

Индуцированная автофлюоресценция протопорфирина.

В 1990 году канадские ученые (Kennedy et al. 1990) обнаружили, что можно искусственно усилить накопление протопорфиринов в ткани путем введения предшественника - 5-аминолевулиновой кислоты (5-АЛК). Стимулируется интенсивная выработка эндогенных порфиринов в организме пациента. Это открытие стало толчком для развития флуоресцентной диагностики новообразований на основе 5-АЛК индуцированной флуоресценции, и сегодня именно эта методика наиболее распространена в онкологии.

Рис. 3-24. Флуоресценция basal carcinoma с использованием 5-aminolevulinic acid methyl ester (5- ALA ME), через три часа после введения препарата.

1995 - Ronald Sroka, Reinhold Baugartner, Wolfgang Beyer, Liebwin Gossner, Tarek Sassy, Susanne Stocker. Pharmacokinetic of Endogenous Porphyrins Induced by 5-Aminolevulinic Acid as Observed by Means of Laser Induced Fluorescence from Several Organs of Tumour-Bearing Mice, BIOS'95, 4- 10 Feb. 1995, SPIE Proc. Vol. 2387, pp. 22-29.

2006 - Лихванцева В.Г. и др. Способ дифференциальной диагностики заболеваний кожи век на основе спектрального анализа флюоресценции, индуцированной 5-АЛК. Российский биотерапевтический журнал, 2008. т.7, №1, с.20-21.

2009 - Лихванцева В.Г. Осипова Е.А. Лощенов В.Б. Кузьмин С.Г. Ворожцов Г.Г. Способ дифференциальной диагностики новообразований рака кожи. Патент 2350262. 2009.+ Пациенту перорально вводят 5-аминолевулиновую кислоту и через 2 часа осуществляют лазерную спектроскопию новообразования и окружающей его здоровой кожи при длине волны 632.8 нм. Затем вычисляют индекс контрастности флуоресценции новообразования как соотношение величин интенсивностей флуоресценции протопорфирина IX в новообразовании и окружающей его здоровой коже. При величине индекса контрастности 1,4 диагностируют доброкачественные опухоли эпителиального генеза, при величине от 1,5 до 1,9 - кератоз, при величине 2.0 - беспигментные злокачественные опухоли эпидермиса. Спектрофлуориметр ЛЭСА.

2012 – Каллаев Камиль Кадырович (Москва, НИИ урологии) Интраоперационный фотодинамический контроль радикальности простатэктомии. Диссертация кандидата медицинских наук. Москва. 2012. С помощью лазерной флюоресцентной спектрометрии при выполнении лапароскопической и открытой радикальной простатэктомии исследовалась флуоресценция при использовании 5-аминолевулиновой кислоты.

188

3.2.2 Различные экзогенные флуорофоры (сенсибилизаторы) в тканях.

А - Флуоресцеин (Fluorescein).

Флуоресцеин - органическое соединение, флуоресцентный краситель. Относится к группе триарилметановых красителей. Обладаем желто-зеленой флуоресценцией. Динатриевую соль флуоресцеина (ураниН) используют для изучения путей следования подземных вод, путем подкрашивания воды. В аналитической химии флуоресцеин используется в качестве люминесцентного кислотно-основного индикатора. Изменение цвета флуоресценции происходит в интервале 4.0-5.0.

FITC - Fluorescein Isothyocyanate - изотиоцианатные производные флуоресцеина, широко используются в флуоресцентной микроскопии для окрашивания клеток. Максимум возбуждения - 419 нм, флуоресценции - 519 нм.

Б - Применение флуоресцеина в офтальмологии.

Флуоресцеин натрия (Флуоресцеин Новартис, Fluorescein sodium). Раствор флуоресцеина натрия является диагностическим красителем. При стимуляции флуоресцеина синим светом (абсорбция от 465 до 490 нм), наблюдается желто-зеленая флуоресценция с длиной волны от 520 до 530 нм. Метод флуоресцентной ангиографии (ФАГ) глазного дна позволяет диагностировать нарушение кровообращения в сетчатке. В офтальмологической практике флуоресцеин натрия используется для диагностики заболеваний глаз при внутривенном введении. После внутривенного введения флуоресцеин натрия быстро распределяется в организме и достигает сосудов сетчатки через несколько секунд. В плазме крови 50-84% препарата связывается с белками (особенно с альбумином) и около 15-17% - с эритроцитами. После введения флуоресцеина натрия кожа пациента временно приобретает желтоватый оттенок, исчезающий через 6-12 ч. Метаболизм - в организме препарат быстро метаболизируется до глюкуронида флуоресцеина, также обладающего флуоресцентными свойствами. Через 4-5 ч после введения препарат обнаруживается в плазме крови в основном в виде глюкуронида. Глюкуроновый метаболит в меньшей степени связывается с белками плазмы, чем флуоресцеин. Выведение: конечные T1/2 флуоресцеина натрия и его глюкуронового метаболита из плазмы составляют приблизительно 23,5 и 264 мин соответственно. За 48 ч происходит почти полное (на 90%) выведение флуоресцеина натрия и его метаболитов с желчью и мочой. Препарат определяется в моче в течение 24-36 ч с постепенным снижением его концентрации. В течение 24-36 ч после введения флуоресцеина натрия отмечается ярко-желтое окрашивание мочи. У пациентов с сахарным диабетом фармакокинетические параметры флуоресцеина натрия не изменяются.

Рис. 3-25. Спектр поглощения и флуоресценции для флуоресцеина (fluorescein).

189