5. Среды для замораживания и хранения спермы притемпературе -196ºС

Компоненты среды	Быка				Жеребца	Барана
	ЛЖГ	ЛГЖ1	ЛГЖ2	ЛФРМГЖ	ЛХЦЖ	ВИКА	ГЖУК	ЛЖГТЦГ
Вода дистиллированная, мл Лактоза, г 11%-ный раствор лактозы или сахарозы, мл Сахароза, г Фруктоза, г Раффиноза пятиводная, г Натрий-кальциевая соль ЭДТА, г Трилон Б, г Трис-(оксиметил)-амино-метан, г Натрий лимоннокислый, г Магний сернокислый, г Гидрокарбонат натрия, г Лимонная кислота, г Гуммиарабик, г Ксилит, г Декстрин, г Токоферол (25-30%-ный масляный раствор), мл Желток куриного яйца, мл Глицерин, мл Спермосан-3, тыс. ЕД Способ расфасовки спермы	100 11,5 20 5 50,0 гранулы	63 30,0 7,0	100 6,0 1,4 5,0	1000 80,5 12,0 19,5 0,1 200 50 500-700 соломинки	100 11,0 0,1 0,089 0,008 2,0 1,6 3,5 25-30 гранулы, пакеты	до 100 9,84 0,84 10,0 5,0 25 гранулы	100 8,4 0,135 0,105 0,26 5,0 20,0 6,0 25 гранулы	100 14,5 0,6 0,27 6,0 20,0 17,0 25 гранулы
		облицованные гранулы

Вначале сперму разбавляют средой Ml при 32°С и охлаждают в течение 45-50 мин до 4°С в холодильнике путем использования льда; предварительно сперму помещают в ванночке с водой, имеющей температуру 32°С. Охлажденную сперму окончательно разбавляют средой №2 при 4°С в соотношении 1:1, при этом среду добавляют двумя равными порциями с интервалом 15 мин. После этого охлаждение продолжают в течение 3-3,5 ч.

Расфасовывают сперму в соломинки объемом 0,5 или 0,25 мл; заранее их маркируют и стерилизуют, после заполнения спермой свободный конец запаивают ультразвуком. Подготовленные таким образом соломинки располагают горизонтально на специальной охлажденной подставке, которую переносят в сосуд Дьюара на металлическую сетку (рис. 42,г). Температуру устанавливают в зависимости от объема соломинок -120°С и -140°С соответственно для соломинок 0,25 и 0,5 мл, выдерживают их в течение 10-12 мин, затем переносят в жидкий азот для хранения.

Среда "Криоцифос" – более простая по составу, чем "Лецифос", не содержит молоко, обладает хорошими визуальными свойствами и существенно облегчает микроскопическую оценку качества спермы. В вариант 479 среды добавляются антибактериальные препараты: пенициллин, стрептомицин, линкомицин и спектиноми-цин, а в вариант 480 – тилозин, гентамицин, линкомицин и спектиномицин.

Многие организации по искусственному осеменениию используют и другие двухфракционные среды. Не Н держащую глицерина фракцию А используют для Сачального разбавления и охлаждения спермы, фракцию В с удвоенным содержанием глицерина добавляют после охлаждения спермы до 5°С. Введение глицериновой фракции после охлаждения уже разбавленной спермы предотвращает возможные повреждения спермиев и обеспечивает проявление действия антибиотиков. Наиболее простая по составу среда желточно-цитратно-глицериновая:

Фракция А:

2,9%-ный цитратный буфер 400 мл

Желток свежих (1-2 дня) куриных яиц 100 мл

Фракция В:

Цитратный буфер 330 мл

Желток 100 мл

Глицерин 70 мл

При использовании желточно-цитратно-глицериновой среды сначала готовят цитратный буфер. На аналитических или других точных весах отвешивают 29 г натрия цитрата (Na₈C₆H₈O₇ х 2Н₂0) ХЧ или ЧДА. Навеску вносят в мерную колбу на 1 л и добавляют приблизительно 500 мл дистиллированной (ультрачистой) воды. Помешиванием раствора добиваются растворения кристаллов цитрата натрия. Затем добавляют необходимое количество воды, постоянно помешивая магнитной мешалкой. Приготовленный буфер переносят в емкость для хранения и стерилизуют автоклавированием или вакуумной фильтрацией через мембранный фильтр 0,45 мкм в стерильную химическую колбу. Определяют осмотическое давление и рН. Хранят в прохладном месте или рефрижераторе до момента использования (одна-две недели).

Свежие (1-2 дня) куриные яйца моют теплой водой с детергентом, затем промывают теплой и дистиллированной водой, обеззараживают 70%-ным этиловым спиртом и высушивают.

Если после предварительной оценки сперма признана годной, ее непосредственно в спермоприемнике разбавляют 1:1 или 1:2, переносят в градуированный смеситель и определяют объем эякулята. После этого добавляют остальное количество разбавителя.

При использовании желточно-цитратно-глицериновой и молочной сред для быка антибиотики добавляют непосредственно в сперму, осторожно смешивают и выдерживают 3-5 мин до момента разбавления. На каждый мл спермы берут 100 мкг тилозина, 500 мкг гентамицина и 300-600 мкг линкоспектина, растворенных в 0,02 мл бидистиллированной стерильной воды. Весовые количества антибиотиков необходимо приводить в соответствие с их активностью, которая может различаться в зависимости от партии препарата. Все антибиотики должны быть проверены на безвредность для спермиев. Гентамицин и тилозин могут сохраняться в растворе при 5,5°С в течение 8 дней, в парах жидкого азота – до б мес.

После выдержки 3-5 мин проводят предварительное разбавление спермы фракцией А, содержащей в расчете на 1 мл такие же количества антибиотиков; степень разбавления от 1:1 до 1:4. Обычно объем этой фракции составляет около 50% от всего объема среды. Разбавленную сперму выдерживают минимум 2ч.

Фракция Б может содержать 5-10% антибиотиков, определенной для фракции А. Фракция Б добавляется из расчета 1:1 по отношению к объему спермы + фракция А. Финальная концентрация антибиотиков — 50 мкг тилозина, 250 мкг гентамицина и 150-300 мкг линкоспектина в расчете на каждый мл замороженной спермы.

Разбавляют сперму с расчетом получения 10-15 млн. спермиев с прямолинейно-поступательным движением при подвижности не менее 4 баллов. Для расчета степени разбавления используют формулу

CхAхV

Р = ---------------- ,

0,015

где: Р – количество разбавителя для 1 мл спермы, С – концентрация спермиев в сперме, млрд./мл, А – подвижность спермиев после размораживания (4 балла), V– объем дозы спермы, мл.

Финальное соотношение фракции А + сперма и фракции В – 1:1. При таком соотношении содержание компонентов (в %) в смеси: буфер цитратный – 73, желток – 20 и глицерин – 7. В эту среду (в одну или обе фракции) нередко включают фруктозу или глюкозу конечная концентрация в среде от 1 до 1,25%. Желточно-цитратно-глицериновая среда должна иметь Н 6 8-6,9 и осмотическое давление 285-300 миллиосмомолей.

В мировой практике широко используется и молочная среда. Так, в США в 1992 г. 1/4 часть всей спермы была разбавлена молочной средой. Единственный серьезный недостаток этой среды - наличие оптически различимых жировых шариков, которые затрудняют оценку подвижности спермиев.

Свежее или пастеризованное молоко содержит вредные для спермиев энзимы, но при нагревании его в течение 10 мин при 92-95 °С они разрушаются. Рекомендуется использовать свежее, пастеризованное, гомогенизированное цельное молоко жирностью около 3,5%. Его прогревают в закрытом двойном стеклянном бойлере (кипятильнике), затем охлаждают до комнатной температуры. Охлажденное молоко переливают в стерильную колбу, оставляя пену в бойлере, или при необходимости фильтруют через стерильный фильтр. Готовят две фракции среды.

Фракция А:

Прогретое молоко 500 мл

Фракция Б:

Прогретое молоко 430 мл

Глицерин 70 мл

Для разбавления и замораживания спермы по байсогальской технологии используют среду, предложенную Литовским НИИЖ – ЛЦГЖС или ЛФРМГЖ (табл. 5). Свежеполученную сперму, соответствующую стандарту, разбавляют в соотношении 1:1 при температуре 27±1 С и оставляют при 18-20°С на 15 мин. Для такого первичного разбавления расходуют 20% рассчитанного объема среды. После выдержки добавляют оставшееся количество (80%) этой же среды при 18-20°С. Степень ^разбавления устанавливают из расчета, чтобы в одной соломинке (0,25 мл) после оттаивания содержалось не менее 15 млн. подвижных спермиев. Разбавленную сперму расфасовывают в промаркированные на машине М6-МНС и простерилизованные в течение 4 ч в бактерицидной камере соломинки, которые закупоривают с обеих сторон стеклянными шариками. Делается это одновременно при помощи автоматического устройства М6-МУ2-С (см. рис. 43). Во время расфасовки следят, чтобы столбик воздушного пузырька в соломинке был длиной 10±2 мм. После заполнения спермой воздушный пузырек перемещают встряхиванием в середину соломин, которые помещают в пластмассовые коробки и охлаждают в холодильнике-витрине 3-4 ч при 4-5°С. Замораживание проводят в стационарных хранилищах азота(ХБ-0,5 илиКВ-6202). Уровень жидкого азота поддерживают на расстоянии 6-8 см от щита замораживающего устройства. На высоте 13 мм от щита (месторасположение соломин) температура должна быть от -150 до -180°С. Выдерживают при такой температуре 7 мин, после чего соломинки размещают в специальные стаканы для хранения в жидком азоте.

Для разбавления и замораживания спермы в облицованных гранулах применяют лактозо-желточно-цит-ратно-глицериновую среду, которая состоит из двух взаимодополняющих частей (№ 1 и № 2, табл. 5). Разбавление проводят в спермоприемнике или специальном пакете. Каждую часть среды заливают дополна в отдельные устройства из эластичной полиэтиленовой пленки, которые соединены эластичными трубками с патрубками цилиндра-дозатора. Устройство со средой № 1 размещают в термостате при температуре 35°С, другое устройство со средой № 2 – при 18-22°С. Свежеполученную сперму разбавляют средой № 1 в соотношении 1:1 и выдерживают при комнатной температуре в течение 5—10 мин до окончания оценки эякулята. Затем дополнительно разбавляют средой № 2 до требуемого количества спермиев в дозе. Сперму расфасовывают в полимерную трубку диаметром 3,8-4 мм, с толщиной стенки 120 мкм. Перед использованием трубку стерилизуют ультрафиолетовым облучением в течение 25 мин, вкладывают ее в автомат ПРЖ и соединяют с муфтой спермоприемника. Весь разбавленный эякулят вдавливают в трубку, после чего ее подводят к сварочному узлу автомата, который разделяет ее на дозы объемом 0,25—0,33 мл с одновременной герметизацией их краев. При наличии специального приспособления каждая спермодоза маркируется. Спермодозы из приемного бункера автомата переносят в алюминиевые тубы диаметром 40 мм, которые закрывают поролоновыми пробками, и ввинчивают в обоймы устройства для эквилибрации и замораживания спермы (рис. 46). Устройство помещают в холодильник и выдерживают при температуре 2-5°С в течение 4-6 ч при постоянном вращении обоймы. Охлажденные тубы снимают с аппарата, крепят к ним стержни-держатели и переносят в заполненный жидким азотом широкогорлый сосуд ("Харьков-31''). Обойму с тубами погружают в азот на максимальную глубину так, чтобы он не попадал внутрь освобожденных от поролоновых пробок туб через верхний край; в таком положении тубы выдерживают 8-10 мин, затем полностью погружают в жидкий азот и хранят до проверки качества спермы. Тубы с пригодной для осеменения спермой закрывают поролоновыми пробками, отсоединяют от обоймы и переносят в стационарное хранилище спермы.

Длительное хранение замороженной спермы в жидком азоте в условиях крупных племлредприятий и их филиалов осуществляется в специально оборудованных помещениях (хранилищах), в которых установлены стационарные емкости типа ХБ-0,5, КВ-6202 и др. Хранят сперму в закрытых канистрах или пластмассовых стаканах, в которых имеются съемные перегородки. С помощью перегородок в каждом стакане можно сделать до четырех отделений и хранить в них несколько эякулятов. Заполненные стаканы помещают один на другой в металлические футляры, которые должны быть полностью погружены в жидкий азот. К держателям футляров при помощи прочных нитей прикрепляют этикетки с номерами быков. Сперму, замороженную в гранулах, нередко хранят в марлевых мешочках.

В племпредприятиях в спермобанке сперму быков хранят, как правило, до завершения оценки их по качеству потомства. Сперму производителей, не получивших положительной племенной оценки, выбраковывают, сперму быков-улучшателей используют по мере поступления заказов на нее из хозяйств.

На пунктах искусственного осеменения сперму хранят в сосудах Дьюара СДС-50, СДС-20, "Харьков-34А" и др. В них можно и транспортировать сперму. Эти сосуды представляют собой стальные или алюминиевые двустенные емкости с вакуумно-порошковой либо многослойно-вакуумной изоляцией. Вместимость их варьирует от 4 до 50 л, суточный расход жидкого азота колеблется от 1 до 3% в зависимости от размеров и качества изоляции. Периодически сосуды пополняют жидким азотом. Азот доставляют на пункты искусственного осеменения в транспортных резервуарах на автомобилях-азотовозах.

Один раз в год сосуды Дьюара подвергают профилактической дезинфекции 96%-ным спиртом, 4%-ным раствором перекиси водорода или ультрафиолетовым облучением при помощи переносного бактерицидного устройства, предложенного В.А.Серединым. Перед дезинфекцией сосуды освобождают от спермы, выливают из них остатки жидкого азота, отогревают в закрытом помещении не менее двух суток и моют горячей (не более 70°С) водой.

Разбавление и хранение спермы барана и козла. При искусственном осеменении овец широко используют свежеполученную неразбавленную сперму, которая обеспечивает наиболее высокую оплодотворяемость маток. Разбавление и хранение спермы несколько ухудшает результаты. Однако рациональное использование ценных производителей легче достигается при условии разбавления и хранения спермы. Для разбавления и хранения ее при температуре не ниже 0°С используют синтетические среды ГЦЖ и ГФЖ (табл. 4). Разбавляют сперму в соотношении 1:1 - 1:2 при 25-ЗСГС. После разбавления в течение 4 ч ее можно использовать для осеменения, если хранить при температуре не ниже 16°С. Если же сперму охлаждают до 2-5°С, срок хранения увеличивают до 24 ч. Хранят ее в пищевых термосах со льдом. Перед помещением в термос флаконы со спермой обертывают ватой или вставляют в гнезда в специальных поролоновых амортизаторах и затем упаковывают в полиэтиленовые мешочки. Мешочки кладут на лед в термос и сверху тоже помещают небольшое количество льда.

В США для разбавления спермы используют чаще желточно-цитратный или желточно-фосфатный буфер. Цитратный буфер готовят из расчета 36 г трехзамещенного пятиводного (Na3C6H5O7 х 5 V2H2O) или 30 г лвухводного (Na₃C₆H₅0₇ х 2Н₂О) цитрата натрия в 1 л дистиллированной или ультрачистой воды. Фосфатный буфер готовят путем растворения 2 г Na₂HPO₄ х 12Н₂О и 0 2 г КН₂Р0₄ на 100 мл дистиллированной или ультрачистой воды. Раствор стерилизуют и добавляют в момент разбавления спермы 20% (к объему) желтка свежего куриного яйца.

Рекомендуется и молочная среда. Свежее гомогенизированное или снятое пастеризованное молоко доводят до температуры 92-95°С и выдерживают в течение 10 мин. Охлаждают до комнатной температуры, устраняют пену путем фильтрации и добавляют антибиотики. Обычно используют стрептомицин и пенициллин из расчета 1000 мкг и 1000 ЕД/мл среды.

После получения сперму постепенно охлаждают. В момент разбавления сперма и среда должны иметь комнатную температуру. Степень разбавления 1:2 или 1:3. Охлаждают разбавленную сперму постепенно до 2-5⁰С. Желательно флаконы со спермой поместить в химический стакан с водой температурой 32-35'С и поместить в холодильник на 2 ч.

Сперму козла разбавляют в 5-20 раз. Из одного эякулята можно получить до 40 доз, а в неделю от одного самца во время полового сезона до 300 доз.

Замораживание спермы барана практикуется реже, чем спермы быка. Это связано с недостаточно стабильными результатами осеменения маток замороженной спермой, а также с особенностями организации искусственного осеменения в овцеводстве и сроков его проведения. Для разбавления и замораживания рекомендуются синтетические среды ВИКА (с антиоксидантом), ГЖУК-трис-буферная (с полисахаридом декстрином) и ЛЖГТЦГ (с полисахаридом гуммиарабиком).

При приготовлении среды ВИКА (табл. 5) токоферол может быть заменен ди-трет-бутил-крезолом (ДТБК) в количестве 0,05 г. Раствор сахарозы и натрий-кальциевую соль ЭДТА стерилизуют в водяной бане в течение 15 мин. Желток эмульгируют с токоферолом в стерильном мерном стакане в водяной бане при 37°С в течение 5-7 мин, постоянно помешивая стеклянной палочкой. Затем в этот стакан последовательно вносят простерилизованный раствор сахарозы с солью ЭДТА, спермосан-3 и глицерин. После получения спермы барана ее выдерживают не более 15 мин и разбавляют одномоментно в соотношении 1:2 при концентрации спермиев 2,5-3,3 млрд. в 1 мл и 1:3 при концентрации более 3,3 млрд. в 1 мл. Среду с температурой 30°С добавляют в сперму осторожно по стенкам спермоприемника.

При использовании ЛЖГТЦГ-среды сперму разбавляют в два приема: сначала ЛЖ-средой (вода дистиллированная 100 мл, лактоза – 12 г, желток – 20 мл) в соотношении 1:0,5 при температуре 28±2°С, затем добавляют один объем ЛЖГТЦГ-среды при 20±2°С. Техника приготовления этих сред более сложная, что обусловлено требованиями длительной стерилизации в водяной бане (30 мин для ЛЖ-среды и 60 мин для ЛЖГТЦГ-среды) всех компонентов, кроме желтка и спермосана, контроля испарения воды в процессе стерилизации путем взвешивания колбы с содержимым и восполнения воды при значительных ее потерях.

ГЖУК-трис-буферной средой свежеполученную сперму разбавляют одномоментно в соотношении 1:3 при концентрации спермиев 3-4 млрд. в 1 мл и 1:4 при концентрации их свыше 4 млрд. в 1 мл.

Разбавленную сперму охлаждают в течение 2-3 ч до 2-4°С. При этом флаконы (полиэтиленовые капельницы) со спермой погружают в кювету с теплой (20-25°С) водой и ставят в бытовой холодильник. После охлаждения кювету с флаконами погружают в тающий лед до момента замораживания спермы.

Сперму замораживают на поверхности сухого льда или на охлажденной до -80°С фторопластовой пластине. Для обеспечения такой температуры пластину после охлаждения в жидком азоте поднимают и устанавливают с помощью штатива на уровне верхнего края широкогорлого сосуда и выдерживают 4-6 мин. Потом в лунки пластины накапывают сперму по 0,2 мл. Как только сперма затвердеет, пластину опускают ниже и выдерживают над поверхностью жидкого азота на расстоянии 3-5 см в течение 1,5-2 мин, затем погружают на 1 мин в жидкий азот. После окончания замораживания пластину извлекают из азота и собирают гранулы в алюминиевые тубы или мешочки из тонкой алюминиевой фольги. Емкости должны быть промаркированы. Замороженную сперму помещают в сосуд Дьюара на карантинное хранение на 28 дней.

Разбавление и хранение спермы хряка. Для разбавления и хранения спермы хряка при температуре 16-20°С в течение 3 сут используют синтетические среды ГХЦС и ГХЦ (см. табл. 4). К разбавлению допускаются эякуляты с концентрацией спермиев не менее 100 млн. в 1 мл спермы. Разбавляют сперму через 20-30 мин после получения и определения ее качества. Степень разбавления варьирует от 1:1 до 1:9. После разбавления в 1 мл спермы должно содержаться около 50 млн. спермиев, а в дозе для осеменения (100-150 мл) – не менее 3 млрд. клеток. Разбавленную сперму расфасовывают в стеклянные колбы или полиэтиленовые флаконы и хранят в темноте при 16-20°С в стерильном боксе-термостате или в специальных термосах для хранения и транспортировки. Колбы закрывают не герметично (целлофаном или пергаментной бумагой), без закрепления резиновыми кольцами. На флаконы слегка навинчивают крышки. Во время хранения сперму осторожно перемешивают не менее двух раз в сутки. При хранении и транспортировке необходимо строго следить за температурным режимом. Отклонение температуры от оптимальной (16-20°С) отрицательно влияет на оплодотворяющую способность спермы. Транспортируют сперму хряка в специальных термосах (рис. 48), бытовых сумках-холодильниках, термосах-ящиках, в которых для теплоизоляции применяется поролон. На период транспортировки колбы и флаконы плотно укупоривают, а после доставки на пункт ослабляют, снимают резиновые кольца, фиксирующие бумагу на колбах, или расслабляют крышки флаконов, сперму транспортируют через 30 мин после разбавления. Допускается кратковременное (1-3 ч) постепенное снижение температуры до 14-15"С или повышение до 24°С.

При необходимости хранения спермы при более низких температурах (но не ниже 5°С) к 1 л среды добавляют 30-40 мл желтка куриных яиц. После разбавления ГХСЦ- или ГХЦ-средами с желтком сперму хряка хранят в термосах со льдом. Тающий лед кладут на дно термоса, примерно на одну четверть объема,- покрывают влагонепроницаемым материалом, а сверху настилают сухую серую вату слоем 1-1,5 см. На эту прокладку помещают флаконы со спермой. При таких условиях достигается близкая к рекомендуемой скорость охлаждения: около 4-5°С в час – до 18°С и 2°С в час - до 6-10°С. Весь период охлаждения длится 7-8 ч. Флаконы должны быть заполнены не полностью. Один раз в день необходимо сперму слегка взбалтывать.

Рис. 48. Термосы и сосуды Дьюара для хранения и транспортировки спермы производителей:

а - термос для спермы хряков; сосуды Дыоара СДС-5 (б), СДС-20 (в), СДС-50 (г), "Харьков-34А" (д) и стационарное хранилище ХБ-0,5 (е)

Способы замораживания спермы хряков и длительного хранения ее разработаны, однако практического применения в странах СНГ пока не имеют.

Разбавление и хранение спермы жеребца. Для разбавление и кратковременного (в течение 48 ч) хранения спермы при температуре 2-5°С используется да ЛХЦЖ (табл. 5). Разбавляют свежеполученную сперму с подвижностью спермиев не ниже 6 баллов и концентрацией 150 млн. в 1 мл в соотношении 1:3 при 25-30°С. Охлаждают разбавленную сперму постепенно. При этом особое внимание уделяют подготовке термосов и теплоизоляционных прокладок, лед в термосе помещают в полиэтиленовых мешочках.

Для замораживания и длительного хранения в жидком азоте сперму разбавляют ЛХЦЖ-средой с добавлением глицерина (табл. 5). Разбавляют также в соотношении 1:3, одномоментно. Разбавленную сперму объемом не более 100 мл при высоте слоя 2,5 см в колбе выдерживают в холодильнике 2 ч и замораживают на поверхности сухого льда или в алюминиевых пакетах в парах жидкого азота. При замораживании в форме гранул сперму наносят каплями по 0,2 мл в лунки на поверхность сухого льда; выдерживают в течение 5 мин, после чего гранулы собирают и упаковывают в алюминиевые тубы или пластмассовые стаканы и помещают на хранение в жидкий азот. В каждой упаковке должно быть 125—130 гранул, что составляет около 25 мл оттаянной спермы. При использовании алюминиевых тубов (пакетов) в зависимости от их величины сперму расфасовывают по 25 или 13 мл. В обоих случаях толщина пакета со спермой не должна быть больше 5 мм. Перед использованием пакеты охлаждают, а после заполнения спермой осторожно вытесняют из них воздух и дважды закатывают концы. Пакеты со спермой помещают в специальные держатели с пенопластовыми поплавками и переносят в широкогорлый сосуд Дьюара (рис. 47). Выдерживают в течение 5-7 мин в парах жидкого азота на расстоянии 10-12 мм от его поверхности. После этого пакеты помещают в жидкий азот на хранение. При замораживании спермы в гранулах и в пакетах в одной спермодозе ( 125-130 гранул, один пакет объемом 25 мл или 2-3 пакета по 13 мл) должно содержаться около 800 млн. спермиев, а после оттаивания - 300-400 млн. подвижных спермиев.

Подготовка к использованию и оценка сохраняемой спермы. Основными критериями качества используемой для осеменения спермы являются процент подвижных спермиев и общее число таких клеток в спер-модозе. Для более полной оценки определяют степень бактериальной загрязненности спермы, абсолютный показатель живучести (при температуре 2-5°С или при 38°С), максимальную продолжительность жизни (выживаемости) спермиев и другие свойства. Используют и более сложные методы изучения морфологических изменений в спермиях после замораживания и оттаивания.

Если сперма хранится при температуре не ниже 0°С, то от каждого разбавленного эякулята оставляют для биологического контроля 0,5-1 мл спермы быка, до 0,5 мл спермы барана, 10 мл спермы хряка и 3-5 мл спермы жеребца. Подвижность спермиев быка при хранении спермы в течение 3 сут при 2-5°С или при комнатной температуре должна быть не ниже 7 баллов, спермиев жеребца при хранении спермы в течение 2 сут при 2-5°С - не ниже 5 баллов, спермиев барана при хранении спермы в течение 24 ч - не менее 8 баллов, спермиев хряка при хранении спермы при 16-20°С в течение 3 сут – не менее 7 баллов.

Подвижность спермиев оценивают по общепринятой методике. Но при оценке спермы хряка рекомендуется добавлять подщелоченный глюкозо-солевой раствор (100 мл дистиллированной воды, 0,45 г хлорида натрия, 3 г глюкозы, 50-70 мг гидрокарбоната натрия). К одной капле спермы добавляют 5-10 капель раствора. Нагревают мазок в течение 3-5 мин при 40-42°С. Такое разбавление и нагревание необходимо для того, чтобы в сохраняемой сперме нарушить хелатно-ион-ный комплекс, освободить катионы и активизировать ферментные системы спермиев.

При работе с замороженной спермой следует соблюдать ряд условий. Прежде всего нельзя допускать повышения температуры спермы до момента ее оттаивания. Для этого упаковки со спермой в сосуде Дьюара приподнимают только на высоту, позволяющую извлечь спермодозу, но не вынимают из горловины сосуда. Инструмент для фиксации и приподнятия упаковки и для взятия спермодозы (гранулы, соломинки, пакет и т.д.) перед использованием протирают спиртовым тампоном и охлаждают в жидком азоте. Взятую спермодозу немедленно помещают в биотермостат.

Биологическое исследование замороженной спермы быков проводят первый раз через 24 ч после замораживания и повторно – при передаче на стационарное хранение. В течение карантинного хранения (28 дней) исследуют сперму на бактериальную загрязненность, определяют подвижность и процент живых (эозинот-рицательных) спермиев, их выживаемость. Из каждого замороженного дуплетного эякулята берут две дозы спермы. Для определения выживаемости спермиев после оттаивания сперму инкубируют в водяной бане (биотермостате) в течение 5 ч. Исходная подвижность спермиев должна быть не менее 4 баллов, выживаемость не менее 5 ч; эозинотрицательных спермиев должно содержаться более 40%.

Сперму, замороженную в гранулах объемом 0,2 мл, оттаивают следующим образом. Одну гранулу помещают в ампулу с 1 мл 2,9%-ного раствора натрия лимоннокислого, подогретого в биотермостате до 38-40°С. Не доставая ее из воды, осторожно вращают кончиками пальцев до полного оттаивания спермы. После этого ампулу вынимают из воды и оставляют при комнатной температуре. Время оттаивания 6-8 с.

Оттаивание спермы в соломинках проводят в водяной бане, в микротермостатах различной конструкции при температуре 38°С в течение 11-12 с. Время оттаивания уменьшать нельзя. Соломинки помещают заводской пробкой вниз, а лабораторной - вверх. За период выдержки сперма достигает температуры выше 0°С.

Для оттаивания облицованные гранулы берут из емкости пинцетом с плоскими браншами и помещают в подогретую до 40°С воду на 8-10 с. Затем извлекают гранулы из воды, поверхность оболочки вытирают стерильной салфеткой, после чего вскрывают ножницами. Если сперма расфасована в оптически прозрачную трубку, после оттаивания ее оценивают под микроскопом через прозрачную стенку.

Качество замороженной спермы жеребца оценивают через 24 ч после замораживания. Оттаивают несколько гранул или контрольный пакет. В таком пакете объем спермы может быть уменьшен до 5 мл. Для хранения допускают сперму с подвижностью спермиев не ниже 2,5 балла. Сперму, замороженную в алюминиевых пакетах (тубах), оттаивают в водяной бане при 40°С в течение 45-50 с; при этом пакет слегка покачивают. За это время температура спермы достигает 20-25°С. Пакет извлекают из воды, вытирают насухо салфеткой или полотенцем, а один край его протирают спиртовым тампоном и отрезают стерильными ножницами. Сперму, замороженную в гранулах, оттаивают в стерильных колбах. Для этого тубу или стакан с гранулами корнцангом вынимают из жидкого азота, освобождают от поролоновой пробки и быстро пересыпают гранулы в колбу объемом 500 мл, погруженную в водяную баню с температурой 40°С, и добиваются однослойного расположения гранул. Колбу выдерживают в воде, слегка покачивая, до полного оттаивания спермы.

Оценка замороженной спермы барана проводится в течение срока карантинного хранения. Определяется бактериальная загрязненность, подвижность спермиев после оттаивания, абсолютный показатель живучести и выживаемость (в часах) и другие свойства. Для определения подвижности спермиев оттаивают одну гранулу из каждого замороженного эякулята. Оттаивание проводят в пенициллиновом флаконе, в который вносится 0,8-1 мл натрия цитрата. Флакон подогревают в водяной бане до 40°С. Охлажденным корнцангом извлекают гранулу из сосуда Дьюара и помещают во флакон. Подвижность оттаянной спермы должна быть не ниже 4 баллов, абсолютный показатель живучести при 2-5°С – 250 и 300 (при использовании сред ЛЖГТЦГ и ГЖУК), выживаемость соответственно 100 и 140 ч.

Для быстрого оттаивания спермы в условиях пункта искусственного осеменения используют специальные устройства с отделением жидкой фракции от охлажденных гранул (рис. 49). В простейшем оттаивателе температура воды в межстеночной полости должна быть 70-80°С. Гранулы засыпают во внутреннюю кювету так, чтобы все они (не более 20) соприкасались с ее стенками. Оттаянную сперму собирают в подставленный флакон (накопитель). Оттаиватель в виде металлической трубки с перехватом в середине и с навинченным (или надетым) накопителем спермы помещают в глубокий химический стакан с подогретой до температуры 40-42°С водой. В верхнюю часть оттаивателя засыпают гранулы (не более 15) и постоянно вращают его до полного оттаивания спермы. Более совершенный электрический оттаиватель ОГСБ-2М. За один прием оттаивают не более 20 гранул, или около 4 мл спермы, которой достаточно для осеменения 10-20 овец. Гранулы достают из емкостей охлажденной сетчатой ложечкой. Оттаянную сперму используют в течение 15 мин. При оценке подвижности спермиев к капле спермы добавляют каплю раствора натрия цитрата.

О СЕМЕНЕНИЕ КОРОВ И ТЕЛОК

Процесс введения спермы в половые пути самки является очень важным этапом метода искусственного осеменения. Сперма должна быть введена в наиболее подходящее место и в оптимальное время в период Половой охоты.

Способы осеменения. Для осеменения коров и телок используется цервикальный метод осеменения, т.е. в шейку матки. Существуют три принципиально различающихся по технике исполнения способа введения спермы в цервикальный канал: визо-цервикальный ректо-цервикальный и мано-цервикальный. Введение спермы во влагалище в тех дозах, которые обычно используются при цервикальном осеменении, оказывается малорезультативным. Независимо от способа введения спермы осеменение коров и телок должно проводиться на пункте или в подготовленном для этой цели помещении, где содержатся животные, с соблюдением технологических и ветеринарно-санитарных требований. При осеменении необходимо предупреждать болезненные и стрессовые реакции у животных, а также исключить возможность распространения инфекционных заболеваний. При маршрутно-кольцевом обслуживании нескольких пунктов специалист по искусственному осеменению может перевозить только сосуд со спермой. Другие необходимые инструменты и материалы должны быть на каждом пункте. Оттаянную сперму необходимо использовать в течение 10-15 мин.

Визо-цервикальный способ осеменения – наиболее простой и доступный, использовался в начале широкого внедрения искусственного осеменения в практику скотоводства. В странах СНГ нередко используется и в настоящее время. При этом способе во влагалище коровы или телки вводят теплое стерильное влагалищное зеркало, которое предварительно увлажняют горячим изотоническим раствором натрия хлорида или натрия гидрокарбоната. При осеменении в недостаточно освещенном помещении к зеркалу присоединяют осветитель. Зеркало размещают во влагалище так, чтобы можно было видеть отверстие шейки матки. Затем через зеркало шприц-катетер вводят в шейку матки на глубину 4-6 см и нажатием на поршень выдавливают дозу спермы. Перед введением спермы зеркало немного извлекают и уменьшают степень раскрытия влагалища.

Для асептического проведения осеменения этим способом необходимо влагалищное зеркало и шприц-катетер обрабатывать перед осеменением каждого животного. Зеркало (металлическое) обычно стерилизуюткипячением в дистиллированной воде, шприц-катетер - кипячением или 70%-ным спиртом. Наружную поверхность катетера протирают тампоном, смоченным 96%-ным спиртом, канал его промывают 1%-ным раствором натрия хлорида или 2,9%-ным раствором натрия цитрата.

Цервикальное осеменение при помощи влагалищного зеркала или светопроводного расширителя осуществляется просто и легко (рис. 50). Однако оно имеет ряд недостатков. Один из них — необходимость мытья и стерилизации влагалищного зеркала после каждого введения животному. А для обработки шприца-катетера необходимо иметь 70% -ный спирт и тампоны, пропитанные 96%-ным спиртом, ежедневно готовить изотонический раствор натрия хлорида или натрия цитрата и промывать шприц-катетер перед каждым осеменением. Это трудоемко и неудобно. При нарушении техники осеменения (несоответствие размеров зеркала просвету половых путей, грубое и неумелое введение его, недостаточное подогревание и т.д.) у животного возникает ответная реакция. Она приводит к повышению тонуса мышечных элементов половых путей, изменению положения влагалищной части шейки матки относительно стенок влагалища, возможному сужению цервикального канала. Эти изменения, а также проявляющееся беспокойство животных затрудняет введение осеменительного инструмента на достаточную глубину и рациональное размещение в цервикальном канале спермы. Нередко сама извитость канала является причиной этого. Все это сказывается на оплодотворяемости, которая после первого осеменения после отела обычно не превышает 50%.

Р екто-цервикалъный способ – наиболее надежный из всех используемых в скотоводстве способов осеменения, предложен в 1937 г. датскими ветеринарными специалистами; заключается во введении осеменитель-ного инструмента со спермой в шейку матки, которую фиксируют рукой через прямую кишку. Этот способ завоевал широкое признание. В большинстве стран мира он является единственным способом, который в одинаковой мере пригоден как для осеменения коров и телок, так и для пересадки зародышей реципиентам.

Для осеменения этим способом руку в перчатке вводят в задний участок прямой кишки животного. Затем несколько отодвигают ее (руку) назад и располагают так, чтобы большой палец разместился в области промежности выше угла половой щели, а остальные четыре пальца надавливали на нижнюю стенку прямой кишки впереди ануса. Это приводит к раскрытию половой щели. Подготовленный инструмент для осеменения (полистироловая пипетка, соединенная с помощью специальной муфты с полиэтиленовым шприцем; металлический инструмент типа ШО-3 или ШО-4 с полипропиленовой соломиной, зафиксированной в инструменте с помощью защитного чехла; специальный металлический инструмент для облицованных гранул) (см. рис. 52) вводится в половые пути по верхней стенке преддверия влагалища вначале под углом 30-40°, чтобы не попал в отверстие мочеиспускательного канала, а затем - горизонтально до упора в свод влагалища. Если инструмент упирается в складку стенки влагалища, необходимо осторожно рукой через стенку прямой кишки надавить на передний конец инструмента и продвинуть его вперед. Иногда это удается сделать только после отодвигания шейки матки вперед и распрямления верхней стенки влагалища. Можно осеменительный инструмент продвигать в половые пути раньше, чем будет введена рука в прямую кишку. Для этого одной рукой раскрывают половые губы, а другой инструмент направляют во влагалище по верхней стенке. Затем руку вводят в прямую кишку. Чтобы рука легче проходила через анальное отверстие, перчатку слегка намыливают или смазывают вазелином. Перед введением можно смазать и анальное отверстие.

Манипуляции по освобождению прямой кишки от каловых -масс следует проводить тогда, когда сильно затруднено фиксирование шейки матки; введенный инструмент при этом оберегают от загрязнения.

После полного введения инструмента во влагалище рукой через прямую кишку фиксируют шейку матки и направляют инструмент в цервикалъный канал. Это наиболее трудная и ответственная операция. Чтобы мастерски овладеть ею, необходим большой практический навык. Для начинающих осваивать этот способ можно рекомендовать два следующих приема (рис. 51). Если по толщине шейка матки не слишком большая, то сначала необходимо отодвинуть и прижать ее к боковой стенке таза. При работе правой рукой прижимают шейку к левой стенке, если левой – то к правой стенке. Затем полностью обхватывают заднюю часть шейки так, чтобы указательный, средний и безымянный пальцы размещались снизу шейки, а большой палец фиксировал ее сверху. Мизинец должен находиться сзади устья шейки матки, и на нем располагают конец инструмента. Изменяя положение кисти руки с шейкой матки в сагиттальной плоскости, можно выбрать такой момент, когда кончик осеменительного инструмента совпадет с наружным отверстием шейки, после чего его достаточно легко ввести в заднюю часть цервикаль-ного канала. Подталкивая инструмент вперед, руку в прямой кишке перемещают на переднюю часть шейки, фиксируют ее и, изменяя положение относительно инструмента в различных направлениях, "насаживают" на него полностью. Когда пальцы ощутят инструмент через тонкую стенку тела матки, его несколько отодвигают назад и, надавливая на поршень шприца или толкатель другого инструмента, медленно вводят сперму. Рекомендуется при этом инструмент постепенно извлекать из цервикального канала так, чтобы по крайней мере часть вводимой спермы осталась между складками шейки матки. Это способствует формированию первичного депо спермиев. Более глубокое расположение такого депо, чем при естественном осеменении, позволяет существенно уменьшить объем вводимой спермы и количество в ней подвижных спермиев без снижения оплодотворяемости осемененных животных. Иногда диаметр шейки матки настолько велик, что трудно обхватить заднюю часть ее рукой. В этом случае четырьмя пальцами прижимают влагалищную часть шейки ко дну таза, а большим пальцем отыскивают наружное отверстие шейки и под контролем его направляют инструмент вперед. После этого, манипули-уя передней частью шейки матки, полностью вводят его в цервикальный канал (рис. 51).

Б ольшие затруднения могут быть и при осеменении тех животных, у которых шейка матки слабо выражена. Отыскание ее влагалищной части и фиксация кистью руки необходимы для последующего введения инструмента в цервикальный канал.

П

Рис. 51. Ректо-цервикальный способ осеменения коров:

а - прощупывание отверстия шейки матки большим пальцем левой руки; б - захват шейки матки рукой с контролем наружного отверстия и конца пипетки мизинцем; в - введение пипетки в цервикальный канал; г - неправильный захват шейки матки при введении пипетки; д - складки влагалища, препятствующие продвижению пипетки к шейке матки; е - осеменение

ри использовании ректо-цервикального способа сперму можно ввести в половые пути на различную глубину. Когда не был достаточно хорошо выяснен механизм передвижения спермиев, стремились сперму вводить глубже, полагая, что это необходимо для сохранения энергии спермиев и более быстрого продвижения их к месту оплодотворения. Однако данные многих экспериментов показывают, что при введении спермы в цервикальный канал отдельные спермин могут достигать яйцепроводов уже через несколько минут. Перемещение их происходит в основном за счет мышечных сокращений матки. Но биологическая важность быстрого переноса спермиев в яйцепроводы не велика. В естественных условиях спермин попадают в половые пути во время охоты, т.е. за 10—12 ч до овуляции. В таких случаях скорость передвижения их не может быть определяющим оплодотворение фактором. И неудивительно, что не обнаружено различий в оплодотворяемости после введения коровам в естественную охоту спермы в шейку, тело или рога матки. Но при условии искусственного осеменения животных в синхронизированную половую охоту скорость передвижения и число поступивших к месту оплодотворения спермиев может иметь решающее значение. По нашим данным, в синхронизированный половой цикл наиболее высокая оплодотворяемость (53,8%) была у телок, которым при осеменении в фиксированное время сперму вводили в тело матки, несколько ниже (45,6%) – при введении в среднюю или переднюю часть цервикального канала и самая низкая (26,8%), когда сперму вводили в заднюю часть шейки. И хотя глубина введения спермы нами лишь контролировалась, а не выбиралась специально, что было обусловлено отсутствием или нормальным проявлением специфических изменений в половых органах в ответ на введение простагландина и степенью раскрытия цервикального канала, значение ее в успехе оплодотворения было очевидным.

При выборе места размещения спермы учитывают возможность воздействия и других факторов. Слизистая оболочка шейки менее чувствительна к повреждениям, чем слизистая оболочка тела и рогов матки. Поэтому по мере увеличения глубины введения инструмента в половые пути увеличивается и опасность их травмирования. Вместе с этим повышается и опасность инфицирования. Ряд инфекций легче передается при осеменении в матку зараженной спермой, но заражение почти невозможно при введении такой спермы в шейку матки. Это связано с антибактериальными свойствами цервикального секрета. При цервикальном осеменении устраняется и опасность вызывания прерывания беременности, наступившей ранее. А такая опасность существует, так как около 4,5% стельных коров проявляют течку и могут быть осеменены. Такое случайное осеменение в тело или рога матки приводит к прерыванию беременности. Все эти обстоятельства указывают на то, что наиболее рациональным при этом способе осеменения является введение спермы в переднюю часть шейки матки.

Результативность ректо-цервикального способа осеменения коров и телок выше, чем других способов. При благоприятных условиях при первом осеменении после отела оплодотворяется 55-60% и более коров, т.е. столько же, сколько и после естественного осеменения. Это, а также использование одноразового стерильного инструмента или минимального количества инструмента многоразового пользования и легкость его стерилизации, предупреждение раздражения, травмирования и инфицирования половой системы, приспособленность ко всем технологиям расфасовки и хранения спермы, контролируемое введение спермы в половые пути и небольшие затраты труда и времени при осеменении животного являются основными достоинствами ректо-цервикальноги способа.

Мано-цервикалъный способ применяется только для осеменения коров с достаточно широким половым каналом. Животных с узким каналом, а также телок целесообразно осеменять другими способами.

При осеменении мано-цервикальным способом сперму вводят в канал шейки матки с помощью короткого полиэтиленового катетера с присоединенной к нему ампулой непосредственно рукой. На руку надевают стерильную полиэтиленовую перчатку. Для введения спермы в облицовячных гранулах используется специальный инструмент – зоошприц, который состоит из цилиндрического корпуса, съемного фланца и толкателя (рис. 52).

Сначала готовят животное: фиксируют хвост, наружные половые органы обмывают теплой водой (при необходимости с мылом) и дезинфицируют раствором фурацилина. Техник-осеменатор извлекает из упаковки полиэтиленовую ампулу, срезает колпачок наискось острым скальпелем или ножницами и соединяет ампулу с катетером. Затем набирает сперму, опять вкладывает в упаковку и кладет на подставку. На руку надевает полиэтиленовую перчатку, увлажняет ее 1%-ным раствором натрия хлорида или натрия гидрокарбоната и осторожно вводит во влагалище коровы. После нахождения влагалищной части шейки матки пальцами обхватывает ее и, поворачивая руку относительно продольной оси в одну и другую стороны, делает массаж. В это время корова обычно успокаивается и до конца осеменения стоит неподвижно. Шейка матки и матка периодически сокращаются. В момент расслабления матка проявляет всасывающую функцию. В это время техник,

н е вынимая кисти руки из влагалища, другой рукой подает подготовленный для осеменения инструмент и располагает его на ладони так, чтобы большой палец прижимал ампулу, а кончик катетера находился вблизи указательного пальца. Не меняя положения инструмента, вводит кисть руки до шейки матки и под контролем указательного пальца продвигает катетер на глубину 1,5-2 см в цервикальный канал. Затем^ кончиками пальцев снова начинает массировать шейку матки, а ладонью подталкивает ампулу так, чтобы катетер вошел в канал на всю глубину (6-7 см). После этого ампулу приподнимает вверх на 2-3 см и выдавливает сперму из нее большим и указательным пальцами в момент расслабления матки (рис. 53). Чтобы сперма не оставалась, ампулу надо сжимать, начиная с верхнего угла донышка по направлению к шейке. После введения спермы ампулу не разжимают и вместе с катетером извлекают из цервикального канала. Далее рекомендуется инструмент положить на дно влагалища и дополнительно помассировать шейку матки и только после этого извлечь руку с инструментом из влагалища.

Многие считают, что этот способ полнее других имитирует естественное осеменение, а массаж влагалищной части шейки матки снимает оборонительную реакцию самки на введение руки и инструмента, усиливает моторику матки, способствует засасыванию спермы и продвижению ее к яйцепроводам. Это, а также достаточно глубокое введение спермы в цервикальный канал и использование одноразовых стерильных инструментов обеспечивают близкую к стандартной оплодотворяемость коров – около 55%. Однако при недостаточной асептике возникает опасность инфицирования половых путей коровы.

Объем вводимой спермы и число спермиев в дозе При цервикальном методе осеменения животному необходимо ввести такое количество спермы, которое бы полностью разместилось в складках слизистой оболочки шейки матки. В зависимости от способа расфасовки спермы и конструкции инструмента для осеменения корове или телке вводят от 0,25 до 1,2 мл разбавленной спермы. При использовании полипропиленовых соломинок та часть инструмента, в которой располагают соломинку, почти целиком вводится в шейку матки, и сперма без потерь выдавливается стилетом (толкателем) в канал шейки матки. Объем ее минимальный и обычно составляет 0,25 мл. При визо-цервикальном способе используют длинный стеклянный катетер со шприцем. Несмотря на небольшой внутренний диаметр катетера, в просвете его размещается значительное количество спермы, которое остается здесь после осеменения. Чтобы ввести в шейку матки хотя бы минимальное количество спермы, необходимо увеличить объем дозы. Это достигается за счет оттаивания гранулы объемом 0,2 мл в 1 мл изотонического раствора натрия цитрата или за счет увеличения объема гранулы до 0,5 мл при замораживании спермы.

Количество подвижных спермиев в дозе при глубоком введении спермы в канал шейки матки может быть ограничено 10 млн. (в отдельных случаях допускается 8 млн.), но при введении в задний участок цер-викального канала (при визо-цервикальном способе) целесообразно увеличение числа спермиев в дозе до 15-20 млн. Это позволяет при благоприятных обстоятельствах достигнуть максимально возможной для данного способа осеменения оплодотворяемости самок. Увеличение же объема спермы или количества подвижных спермиев в дозе не приведет к повышению результатов.

Оптимальное время осеменения. Одним из главных условий достижения высокой оплодотворяемости является правильный выбор времени осеменения в период половой охоты. При выборе оптимального времени для осеменения учитывают следующие факторы:

сроки выхода яйцеклетки из фолликула (по отношению к началу или концу охоты), приобретение готовности к оплодотворению и продолжительность сохранения способности к оплодотворению;

время, необходимое для приобретения спермиями готовности к оплодотворению (капацитации), и продолжительность жизни их в половых путях самки;

последовательность изменений условий среды в матке и яйцепроводах самки в период половой охоты и влияние этой среды на передвижение и выживаемость спермиев.

Благоприятные возможности для оплодотворения создаются в том случае, когда введение спермы в половые пути самки и овуляция будут взаимосвязаны во времени, а в половых клетках произойдут соответствующие изменения. Средой для таких изменений в гаметах является секрет яйцепроводов и матки. Воздействие секрета важно для начала акросомной реакции в спермиях и выхода ферментов гиалуронидазы и акрозина. И хотя окончательные изменения в спермиях происходят только после проникновения ими через оболочки яйцеклетки, подготовка к ним протекает раньше. Для того чтобы такие предварительные изменения произошли, спермиям быка необходимо побыть в половых путях самки по крайней мере 6-8 ч. Секрет шейки матки более важную роль играет в механизме передвижения спермиев. Кроме того, шейка матки является важнейшим резервуаром спермиев, особенно в первые 24 ч после осеменения. Вначале половой охоты цервикальный секрет водянистый, обильный, а спустя 6 ч после окончания охоты его немного и он слишком вязкий. Эти периоды не являются подходящими для осеменения. Наиболее благоприятны последние 12 ч перед окончанием охоты. В течение 8 ч после осеменения спермин из первичного депо (шейки матки) поступают и накапливаются в достаточном количестве в перешейке яйцепроводов; распределение их становится упорядоченным, хотя группировка может продолжаться и дольше, капацитация завершается. До овуляции остается менее суток и возможности сохранения оплодотворяющей способности спермиев достаточно хорошие. Выход же яйцеклетки стимулирует активность спермиев и часть из них вскоре оказывается в ампуле вблизи места оплодотворения. В лучистом венце яйцеклетки к моменту вхождения в ампулу яйцепровода начинаются такие изменения, которые облегчают прохождение спермиев между клетками. Способность к оплодотворению у яйцеклетки сохраняется в течение менее 12 ч, и поэтому осеменение даже после окончания охоты в течение 6 ч (т.е. за 4-6 ч до овуляции) нередко оказывается результативным.

В практических условиях не всегда удается точно определить начало половой охоты и поэтому рекомендуется осеменение проводить вскоре после выявления (утром или вечером), а затем повторно через 10-12 ч. Однако такое двукратное осеменение не имеет преимуществ перед однократным, проводимым в оптимальное время.

Организация осеменения в хозяйствах. В Беларуси и других странах СНГ в скотоводстве применяются следующие формы организации искусственного осеменения маточного поголовья: стационарная, внутрихозяйственная маршрутно-кольцевая и кооперативная. Внедрение той или иной формы обусловлено размерами фермы, системой содержания животных, производственным направлением и специализацией, организацией труда и наличием кадров.

Стационарная форма распространена более широко. Применяется она в крупных комплексах по выращиванию нетелей и производству молока, на других фермах с привязным содержанием и поголовьем более 200 коров и телок. При этой форме специалист по осеменению (техник-осеменатор) включен в штатное расписание фермы. В его обязанности входит выявление маток в охоте и осеменение, оказание помощи ветеринарным специалистам в проведении акушерской и гинекологической диспансеризации коров и телок и лечении бесплодных животных. Кроме того, совместно с бригадиром фермы он составляет графики запуска и отелов, ведет учет и нумерацию новорожденных. При наличии на ферме менее 100 коров обязанности техника-осеменатора по совместительству исполняет бригадир.

Нередко за техником-осеменатором закрепляют две или даже три близко расположенные небольшие фермы. Обслуживание их одним человеком составляет элемент внутрихозяйственной маршрутно-кольцевой формы- Однако в полном объеме эта форма предполагает обслуживание одним или группой специалистов всех ферм в хозяйстве. Для такой работы привлекаются, как правило, высококвалифицированные ветеринарные врачи, зооинженеры, ветфельдшеры со специальной подготовкой. В их распоряжение выделяют автомобиль и необходимое оборудование. По установленному маршруту и в строго определенное время специалист по осеменению посещает все фермы и проводит осеменение выявленных в охоте коров и телок. Выявление животных в охоте проводится бригадиром и другими работниками ферм. Выбранных животных они переводят в места для осеменения или же соответствующим образом метят и записывают в журнал. После приезда на ферму техник-осеменатор исследует выделенных животных и при наличии у них признаков половой охоты осеменяет и делает необходимые записи в журнале.

При этих двух формах организации осеменения и наличии в хозяйстве или на одной крупной ферме (комплексе) большого числа коров и телок (более 600-800 животных) создается звено (группа) по воспроизводству. В состав звена помимо одного или нескольких техников-осеменаторов включают ветврача-гинеколога и зоотехника-селекционера. На звено возлагается обязанность осуществлять всю работу по воспроизводству животных в хозяйстве; осеменять маток и вести учет результатов осеменения, проводить акушерскую и гинекологическую диспансеризацию и лечение животных с заболеваниями половых органов, отбирать животных для выбраковки и т.д.

При кооперативной форме осеменение животных проводится специалистами кооперативов. Кооперативы создаются заинтересованными хозяйствами на базе госплемпредприятий или районных станций по племенной работе и искусственному осеменению. В штат кооператива включают высококвалифицированных специалистов, владеющих ректо-цервикальным способом осеменения и имеющих опыт работы по воспроизводству животных. За одним специалистом закрепляют несколько ферм одного или двух хозяйств с общим числом животных, подлежащих осеменению, до 1800. Посещение ферм проводится по установленному маршруту, протяженность которого не должна превышать 120 км. В зависимости от объема работы кооператив формирует два-три или более маршрутов. В обязанности специалиста, обслуживающего маршрут, входит не только осеменение животных, но и учет результатов осеменения, проведение диагностики стельности и бесплодия, выявление причин нарушения воспроизводительной функции и разработка мероприятий по их устранению.

ОСЕМЕНЕНИЕ ОВЕЦ И КОЗ

О семенение овец сезонное: при планировании ягнения в январе осеменение маток проводят в августе, при ягнении в феврале - осеменяют в сентябре. Благоприятные условия осени способствуют повышению плодовитости по сравнению с другими периодами на 15-20%. Осеменение проводят на протяжении двух половых циклов (35-40 дней). По окончании работы пункта организуют вольную случку маток, неоплодотворившихся после искусственного осеменения. В племенных хозяйствах для этой цели в течение 15-25 дней используются бараны, по качеству не уступающие основным, в других хозяйствах - не ниже I класса.

Массовое проявление охоты у овец наблюдается через 35-40 дней после отбивки молодняка. С этого времени (за 1,5-2 мес до начала искусственного осеменения) формируют маточные отары, маткам улучшают условия кормления и содержания, проводят выбраковку больных и непригодных к воспроизводству животных. За 1-1,5 мес заканчивают массовые диагностические исследования, прививки и другие ветеринарно-профилактические обработки овец и приступают к подготовке баранов-производителей.

Осеменение коз проводят в сентябре-ноябре. Способы осеменения. При осеменении овец и коз применяют влагалищный и цервикальный методы. Яркам и переяркам из-за узости преддверия влагалища сперму вводят без применения влагалищного зеркала во влагалище (пара-цервикально). Для взрослых маток наИг более подходящим является цервикальный метод. При обоих методах для введения спермы используют стеклянный шприц-катетер (микрошприц) с дозирующим приспособлением, шприц-полуавтомат, металлический шприц (рис. 54).

П ри влагалищном методе осеменения катетер вводят по верхней стенке преддверия влагалища и влагалища до упора, затем отводят назад примерно на 1 см и выталкивают сперму, .надавливая пальцем на поршень. Если влагалищное осеменение практикуют часто, то изготавливают укороченный шприц-катетер. Для этого в обычном инструменте отрезают тонкую изогнутую конечную часть катетера, а место среза шлифуют или оплавляют на пламени. Объем вводимой во влагалище неразбавленной спермы – 0,15-0,20 мл, разбавленной и сохраняемой при 2-5°С – 0,2 мл, замороженной спермы – 0,4 мл.

При цервикальном методе используют влагалищный расширитель с продольной прорезью вверху или металлическое влагалищное зеркало. Инструмент, обеззараженный и подогретый (металлическое зеркало), увлажняют 1%-ным раствором натрия хлорида и вводят во влагалище (рис. 55). После отыскания шейки матки канюлю (кончик) шприца-катетера направляют в цервикальный канал и вводят на максимальную глубину (1-3 см). Чтобы сперма не вытекала из шейки матки, перед нажатием на поршень зеркало слегка оттягивают назад. При пользовании влагалищным расширителем перед введением спермы сначала извлекают расширитель, после чего, осторожно надавливая на поршень шприца, вводят необходимое количество спермы. При цервикальном осеменении вводят самке неразбавленной спермы 0,05 мл, разбавленной и охлажденной до 2-5°С – 0,1-0,15 мл и замороженной спермы – 0,2 мл. Если не удается ввести инструмент в канал шейки матки, то сперму выдавливают на наружную часть шейки, увеличивая при этом дозу вдвое.

Перед осеменением каждой овцы катетер аккуратно вытирают тампоном, пропитанным 70%-ным спиртом, оберегая канюлю от попадания в нее спирта. После расходования всего эякулята шприц-катетер промывают 1%-ным раствором натрия хлорида, затем обеззараживают 70%-ным спиртом. Влагалищное зеркало моют горячей водой, насухо вытирают полотенцем и обеззараживают на огне с некоптящим пламенем.

Осеменяют овец в манеже пункта искусственного осеменения. Для фиксации животных устанавливают станок. Размещают его напротив окна или осветительной лампы. Маток поочередно фиксируют в станке или конвейерной установке для подачи их в манеж к рабочему месту техника-осеменатора. Во многих хозяйствах комната-манеж располагается в кошаре и проемом в стенке сообщается с другим неотапливаемым помещением, куда загоняют маток в охоте. В этом помещении имеется станок для фиксации овец. Осеменение их проводят через проем.

Выборка маток в охоте, и оптимальное время осеменения. Выявление овец в охоте проводится баранами-пробниками. В качестве пробников используют взрослых энергичных животных. Готовят их из расчета один баран на 80-100 маток. В племенных хозяйствах баранов-пробников вазектомируют (производят резекцию кусочков спермиопроводов по методу А.Я.Краснитского). Перед началом работы как неоперированным, так и вазектомированным баранам подвязывают под брюхо фартуки для предотвращения коитуса. Чтобы облегчить процесс выборки овец в охоте, баранам-пробникам прикрепляют в области груди красящие метчики. Делая садку на овец, бараны метят их (окрашивают) с помощью таких устройств. Если вазектомированным баранам не подвязать фартук, то у них торможение половых рефлексов возникает не так быстро и проявляется на так часто, как у баранов с фартуками. Более того, многократный коитус усиливает моторику матки у овец и ускоряет овуляцию, что позволяет ограничиться однократным осеменением вместо обычного двукратного. С целью поддержания половой активности в течение всего случного сезона невазекто-мированным баранам-пробникам дают возможность сделать одну садку в неделю на матку в охоте или же от него получают в искусственную вагину один-два эякулята.

Выбирают овец в охоте один раз (иногда два раза) в сутки, обычно утром. Для проведения выборки в первые 8-10 дней загон (баз) разделяют на две части. Пробников используют поочередно, по группам. Матку считают в охоте, если она не убегает при вскакивании на нее барана, а стоит спокойно. Таких маток вылавливают и размещают по углам загона. Когда поголовье неосеменных овец уменьшится, выборку проводят в одном загоне, но площадь его постепенно ограничивают переносными щитами по мере перевода овец в группу осеменения. При выборке надо следить, чтобы овцы в загоне не собирались группами, а были распределены в нем равномерно. По окончании выборки маток в охоте баранов-пробников удаляют из отары, а маток выпускают на пастбище. Овец в охоте перегоняют на пункт осеменения. Осемененных овец содержат отдельно до следующего утра, после выборки животных с продолжающейся охотой их соединяют с ранее осемененными овцами. Из них формируют отдельную отару. С 1-го дня после начала искусственного осеменения организуют выявление овец, проявляющих половую охоту повторно. Осемененных маток метят специальной краской "Овцевод".

У коз половая цикличность нередко нерегулярная. Повторно охота наступает через 19-21 день, у 10% животных –через 5-9 дней. Среди осемененных коз выборку животных в охоте начинают с 5-го дня от начала осеменения.

У овец для накопления достаточного количества спермиев в яйцепроводах с последующей максимальной оплодотворяемостью требуется удлиненный промежуток времени (до 24 ч). Мобилизация спермиев происходит из первичного депо в области шейки матки или из области соединения матки с яйцепроводами. Скорость передвижения их в начале половой охоты, как и у крупного рогатого скота, не имеет решающего биологического значения, так как овуляция происходит только в конце половой охоты (за 6 ч до окончания), а иногда и через несколько часов после ее окончания. Для капацитации спермиям барана достаточно побыть в половых путях самки 1-1,5 ч.

Однако первые спермин, достигшие яйцепроводов в результате наиболее быстрого передвижения, как правило, не участвуют в оплодотворении, так как происходит их ранняя гибель. Быстрый перенос спермиев к мес-ДИТ0плодотворения может иметь значение при осеменении в конце охоты, когда оплодотворение начинается с момента овуляции или вскоре после нее. Способность яйцевой клетки к оплодотворению сохраняется 10-15 ч.

Исходя из этих данных, считается оптимальным временем для осеменения период в пределах 9-12 ч после начала охоты. Обычно же осеменяют овец дважды: первый раз сразу после выборки в охоте, второй раз спустя 8-10 ч, маток с продолжительной охотой осеменяют и третий раз. Второе осеменение через 24 ч допускается при использовании свежеполученной спермы высокого качества.

Организация искусственного осеменения овец в хозяйствах. Организация осеменения овец зависит от производственного направления и специализации хозяйства, системы содержания животных, размеров отары. В племенных хозяйствах открывают стационарные и передвижные пункты и за каждым из них закрепляют не более одной отары. В ведущих племзаводах рекомендуется создавать центральные пункты (лаборатории) искусственного осеменения. Они должны обеспечить рациональное использование баранов. В пред-случной период лаборатория может использовать от таких животных сперму, разбавлять для кратковременного (в течение 2-4 ч) хранения и транспортировать ее в близлежащие товарные хозяйства, а в зимний период заготавливать замороженную сперму. В товарных хозяйствах с численностью более 300 овец целесообразно иметь стационарный пункт и осеменение проводить свежеполученной спермой от имеющихся в хозяйстве ценных баранов. При отсутствии необходимого количества производителей можно использовать завозимую из других хозяйств или племпредприятия охлажденную или замороженную сперму. Для обеспечения высокой оплодотворяемости маток желательно ограничивать срок хранения охлажденной спермы 3-4 ч. При содержании овец на отгонных пастбищах оборудуются стационарные или передвижные пункты искусственного осеменения: деревянные домики или вагончики. 1ункт может обслуживать две-три отары. При наличии в хозяйстве двух или более отар организуют цик личное осеменение. При этой форме новые отары овец формируются последовательно из осемененных во всех первоначальных группах животных. В комплексе с поголовьем 3 тыс. овец отара может быть сформирована за 7-10 дней, с поголовьем 5-6 тыс. маток - за 3-5 дней.

ОСЕМЕНЕНИЕ СВИНЕЙ

Искусственное осеменение свиней применяется в крупных специализированных хозяйствах промышленного типа (свиноводческих комплексах) с большой концентрацией поголовья. Но современный уровень развития метода и его техническая оснащенность позволяют внедрять искусственное осеменение в практику небольших свиноводческих ферм колхозов, совхозов, фермерских и индивидуальных хозяйств путем транспортировки и использования спермы хряков, содержащихся в племпредприятиях или селекционно-гибридных центрах.

С пособы осеменения. При искусственном осеменении свиней сперма вводится в матку. В практике применяется два способа осеменения: фракционный и нефракционный. При обоих способах используется разбавленная сперма с содержанием подвижных спермиев в 1 мл около 50 млн., но объем вводимой спермы различный.

При фракционном способе сначала вводится разбавленная сперма в объеме 50 мл взрослым маткам и 40 мл молодым свинкам, затем глюкозо-солевой раствор (1 л дистиллированной воды, 30 г глюкозы, 4,5 г натрия хлорида) соответственно 100 мл и 70-80 мл. Для осеменения используется прибор УЗК-5 (рис. 56). В комплект прибора входит один металлический и 10 пластмассовых катетеров в пластмассовых чехлах. В предохранительный колпак прибора помещается два флакона: один с разбавленной спермой, другой – с глкжозо-солевым раствором (заполнителем). Содержимое флаконов выдавливается путем нагнетания в них воздуха при помощи шаров Ричардсона.

При нефракционном способе осеменения разбавленную сперму вводят в один прием. Дозу спермы определяют из расчета 1 мл на 1 кг массы животного, но не более 150 мл. Для введения спермы также применяют прибор УЗК-5 или полиэтиленовые приборы, состоящие из тонкостенных флаконов емкостью 100-150 мл с навинчивающимися крышками и катетеры с соединительными муфтами (конструкции ВИЖ или ПОС-5) Простерилизованные катетеры хранятся в полиэтиленовых чехлах. Перед осеменением ножницами отрезают часть чехла и извлекают конец катетера с соединительной муфтой и навинчивают ее на флакон вместо крышки. Чехол оставляют на катетере до момента введения в половые пути самки.

Маток в охоте перегоняют в манеж для осеменения и размещают в индивидуальных станках. Для перегона отдельных животных может быть использована специальная клетка. Она не имеет пола и слегка приподнята над землей, так как с боков посередине длины прикреплены два колеса, на которых ее можно катить в любом направлении. Загнанное в клетку животное не может повернуться и при движении идет по земле. Направляется клетка перекидной ручкой, которая крепится сверху посередине и благодаря которой человек может толкать ее, находясь с задней (по отношению к животному) стороны. В клетке можно и осеменять маток, если ее (клетку) приставить торцовой частью к какой-либо стенке. Но более удобно и надежно фиксировать свиноматок во время осеменения в специальном устройстве. Такое устройство похоже на обычную клетку для взвешивания животного, но оборудовано лямками, которые не позволяют свиноматке лечь. Если манеж не оборудован станками или устройствами для фиксации, животных осеменяют в станках, где их содержат. Однако это менее желательно, так как практически невозможно обеспечить необходимые санитарно-гигиенические условия в момент осеменения и соответствующим образом зафиксировать животное. Хотя свиньи в охоте проявляют состояние неподвижности, большинство из них (особенно молодые) во время осеменения пытаются двигаться, и это создает трудности для удержания техником-осеменатором катетера в нормальном положении.

Перед осеменением наружные половые органы матки обрабатывают лигнином или раствором фурацили-на 1:5000. После этого усиливают состояние неподвижности матки надавливанием на крестец рукой или левым плечом, в то время как другой - раздвигают половую щель и вводят в нее катетер. При осеменении крупных свиноматок техник может сесть на заднюю часть уловища животного спиной к его голове. Присутствие в момент осеменения хряка вблизи усиливает проявление неподвижности. Катетер продвигают по верхней стенке влагалища до упора в шейку матки. В период половой охоты складки (выросты) шейки матки значительно расходятся и катетер с суживающегося кпереди влагалища может проскочить один-два "замка" шейки. Легче это происходит, если на конце катетера имеется утолщение в виде головки, оливообразное расширение, баллончик для накачивания воздуха или если конец сделан в форме полового члена хряка. При прохождении сначала первой, а затем второй складки ощущается небольшое сопротивление, которое преодолевается легким подталкиванием вперед. Расширение на конце катетера предупреждает вытекание спермы. Катетер со спиралевидным концом одновременно продвигают и вращают в левую сторону до столкновения со складками шейки матки. У молодых маток кончик катетера может упираться в начало цервикального канала.

После введения катетера в половые пути матки флакон со спермой приподнимают выше спины животного, переворачивают его вверх дном и, слегка нажимая рукой, начинают вводить сперму. При фракционном способе осеменения после введения катетера до упора в шейку матки техник открывает зажим флакона со спермой и начинает нагнетать во флакон воздух. Если канал шейки матки открыт, то сперма будет поступать в матку, и уровень ее во флаконе заметно понизится. После введения дозы спермы (половина стеклянного флакона) техник закрывает этот зажим, одновременно открывает зажим другого флакона и вводит необходимое количество заполнителя. Сперму и заполнитель необходимо вводить медленно. У взрослых свиноматок благодаря интенсивным всасывающим движениям матки сперма часто поступает самотеком через открытый канал шейки матки, но у молодых свинок это бывает реже. При осеменении в оптимальное время для введения спермы требуется 3-4 мин. Если канал шейки закрывается, то сперма начинает вытекать из влагалища. В этом случае давление на флакон (или давление воздуха) уменьшают, выжидают 10-20 с (иногда до 40 с), пока опять канал не расслабится, а затем продолжают введение.

Перед осеменением сперму, сохраняемую при 16-20°С, помещают в водяную баню (30-35°С) не менее чем на 10 мин. За это время флакон переворачивают несколько раз для того, чтобы сперма подогревалась равномерно. Неподогретая сперма, введенная в половые пути свиноматок, часто рефлекторно выталкивается обратно. Одновременно подогревают не более 5 доз спермы, чтобы использовать ее в течение получаса.

Время осеменения свиноматок. Осеменяют маток обычно в первую охоту после отъема поросят. Кормление подсосных маток должно быть полноценным, чтобы к этому моменту они имели хорошую упитанность и в течение последующих 4—7 дней проявили половую охоту. Маток слабоупитанных выделяют в отдельную группу и улучшают им кормление. Половая охота у свиней длится 40-60 ч, а овуляция происходит через 30-36 ч после начала охоты. Продолжается овуляция не более 7 ч. При выборе оптимального времени осеменения, кроме того, учитывают и то, что в матку вводится большой объем спермы. При естественном осеменении отмечается последовательность выделения различных фракций, и эта последовательность может повторяться, вследствие чего рога матки раздуваются и уже к концу коитуса (или осеменения) сперма омывает соединение матки с яйцепроводом. Вследствие отека слизистой оболочки матки в этом месте вход в яйцепровод ограничен, что способствует накоплению спермиев в заднем участке истмуса яйцепровода. Это место оказывается не только резервуаром для спермиев, но и своеобразным барьером для них. Клетки с поврежденной наружной плазматической мембраной не проходят этот барьер. В то же время нормальные спермин могут постепенно проникать глубже в истмическую часть яйцепровода. Причем для дальнейшего передвижения решающее значение имеют концентрация и собственная подвижность спермиев. Очевидно, при естественном осеменении, когда вводится большое количество спермиев, происходит регулирование поступления их к месту оплодотворения, что предотвращает полиспермию.

Быстрое поступление спермиев в задний участок "провода и приобретение способности к оплодотворению в течение 2-3 ч предполагает возможность не слишком раннего осеменения, тем более что способность спермиев к оплодотворению сохраняется чаще всего не более 30 ч. Оптимальным временем для осеменения считается интервал в пределах от 12 до 16 ч перед овуляцией. Но это при условии проведения естественного осеменения или использования для искусственного осеменения свежеполученной спермы. Когда же осеменение проводится разбавленной или оттаянной после замораживания спермой, оптимальное время для осеменения будет несколько ближе к овуляции - за 6-8 ч до нее. Учитывая, что прогнозировать овуляцию трудно, нередко при определении оптимального времени осеменения исходят не из срока овуляции, а из времени начала проявления рефлекса неподвижности. В этом случае наилучшим сроком для осеменения взрослых маток является конец первых и начало вторых суток, а для молодых - после 30 ч от начала половой охоты.

В практических условиях выбор времени осеменения определяется кратностью выборки животных в охоте. При четырехкратном контроле молодых свинок можно осеменять в течение 17-18 ч, свиноматок - в течение 21-24 ч после определения состояния неподвижности. Если выборка проводится два раза в день (с промежутком 10-12 ч), то требуется двукратное осеменение: после выборки свиноматок в охоте утром осеменение их проводят вечером, а после вечерней выборки — утром следующего дня. Второй раз животных осеменяют, как правило, через 10-12 ч после первого осеменения. Молодых свиноматок, выбранных утром, Можно осеменять через 2-5 ч и повторно - на другой День утром. Если половая охота длится более 10ч после повторного осеменения, свиноматку целесообразно осеменить еще раз.

Организация осеменения в хозяйстве. В нашей Республике используется в основном хозяйственный способ. В хозяйстве собственными силами и средствами создается пункт (станция) искусственного осеменения. Обслуживается пункт группой специалистов, в задачу которых входит подбор племенных хряков, Их использование, обработка и хранение спермы, проведение осеменения. Сперму от хряков получают по мере необходимости, поэтому хранится она после разбавления не долго. Сервисный способ может быть использован при обслуживании небольших ферм совхозов и колхозов, в которых содержится небольшое количество свиноматок, а также фермерских и индивидуальных хозяйств, По заказам владельцев животных техник-осеменатор крупного пункта (или предприятия, если оно содержит хряков) может выезжать, взяв с собой сперму и инструмент, и осеменять выявленных в охоте животных.

ОСЕМЕНЕНИЕ КОБЫЛ

С пособы осеменения. При осеменении кобыл сперму вводят в матку (маточный метод осеменения). В практике применяют два способа введения спермы: мануальный и визуальный. При мануальном способе используют резиновый катетер И.И.Иванова и шприц емкостью 30-50 мл или ампулу. Катетер представляет собой толстостенную мягкую резиновую трубку с узким внутренним каналом. Передний конец его сужен, задний – имеет выступ в виде кольца и расширенное отверстие канала для соединения с канюлей шприца. Катетер вводят рукой во влагалище кобылы. Указательным пальцем находят устье шейки матки и под контролем пальца продвигают катетер в цервикальный канал на глубину 10-12 см. К катетеру присоединяют шприц со спермой и, нажимая на поршень, вводят сперму в матку (рис. 57). При визуальном способе используют стеклянный или эбонитовый катетер длиной 50 см, шприц и влагалищное зеркало. Обеззараженное влагалищное зеркало вводят в половые пути и размещают его так, чтобы хорошо видна была шейка матки. Под контролем зрения катетер через зеркало направляют в цервикальный канал. После введения в матку к стеклянному катетеру посредством резиновой муфты присоединяют шприц. Эбонитовый катетер с канюлей шприца соединяют заранее при помощи металлического хомутика с резиновой прокладкой.

Перед осеменением кобылу заводят в специальный станок или же фиксируют с помощью случной шлеи. Спокойных животных удерживают за повод и поднимают их переднюю ногу, чтобы они не могли ударить техника-осеменатора. Конюх забинтовывает хвост кобылы и отводит его в сторону: вульву обмывает теплой водой и вытирает насухо ватой. После этого техник-осеменатор при участии помощника, который подает ему инструмент для осеменения, проводит осеменение кобылы.

Для осеменения одного животного необходимо от 20 до 40 мл спермы. Крупным, старым, а также жеребившим кобылам следует вводить максимальную дозу спермы.

Оптимальное время осеменения. У кобыл половая охота длится значительно дольше, чем у других животных, – в среднем 5-6 дней. На протяжении всего этого периода степень проявления признаков ее прогрессирующе увеличивается. Это послужило основанием различать несколько степеней охоты. Охота первой степени: при приближении жеребца кобыла стоит спокойно, однако не проявляет других признаков. Охота второй степени: кобыла допускает жеребца, поднимает хвост, отмечается мигание половой щели. Охота третьей степени: те же признаки и выделение мочи и слизи в момент мигания половой щели. Охота четвертой степени: в дополнение к перечисленным признакам - при обнюхивании жеребцом кобыла клонится в его сторону, раскидывает тазовые конечности, во время садки стоит спокойно.

По мере нарастания признаков охоты в яичниках происходит созревание фолликулов. Ректальной пальпацией можно определить степень их зрелости. Вначале созревания фолликула (диаметр 1-1,5 см) яичник принимает форму неправильного боба (за счет увеличения одной его стороны): эта часть проявляет признаки незначительного размягчения. Зреющий фолликул приводит к увеличению яичника и изменению его формы до грушевидной; в самом фолликуле заметно зыбление (флюктуация) жидкости. Почти зрелый фолликул - шарообразный, хорошо флюктуирует и придает яичнику явно грушевидную форму. Полностью созревший фолликул имеет форму шара, стенки его истончены, флюктуация легко ощущается. При овуляции напряженность стенок фолликула ослабевает, уменьшается его размер и изменяется форма. После окончания овуляции сильно уменьшается в размерах и яичник. Происходит овуляция примерно за одни сутки до окончания охоты.

В период осеменения необходимо у всех кобыл охоту выявлять не реже чем через день, но лучше ежедневно, чтобы не пропустить тех животных, у которых она продолжается всего 2-3 дня. При выявлении признаков охоты проверку продолжают ежедневно, чтобы определить оптимальное время осеменения. Осеменяют первый раз кобыл при ярком проявлении признаков охоты (3-й и 4-й степени) и затем повторяют осеменение через каждые 36-48 ч до затухания признаков охоты. Такие длительные промежутки между осеменениями возможны благодаря тому, что спермин жеребца сохраняют способность к оплодотворению в половых путях кобылы до 72-120 ч. Если пальпацией определяют степень зрелости фолликула, то первое осеменение проводят при наличии почти зрелого или полостью созревшего фолликула; повторно осеменяют через 1~2 дня, если овуляция не наступила.

Организация искусственного осеменения. В хозяйствах осеменение кобыл практикуется редко, хотя каких-либо особых условий для его проведения не требуется. Государственные заводские конюшни, где содержат высококлассных племенных жеребцов-производителей, могут организовывать основные пункты искусственного осеменения, получать сперму, разбавлять ее для хранения при 4°С в течение 48 ч или же замораживать и хранить в жидком азоте. Заготовленная сперма может быть использована для осеменения кобыл в хозяйствах по их заявкам.

ОРГАНИЗАЦИЯ ИСКУССТВЕННОГО ОСЕМЕНЕНИЯ

В Беларуси искусственное осеменение животных организуется и проводится как важное государственное мероприятие, направленное на совершенствование породных и повышение продуктивных качеств животных. Руководит этой работой Управление по племенному делу Министерства сельского хозяйства и продовольствия. В областях имеются племживобъединения. В их ведении находятся племпредприятия и их посредники - районные станции по племенной работе и искусственному осеменению. Управление иплемобъединения координируют работу центров и пунктов трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота.

Племпредприятия имеются в каждой области. Все они специализированы на осеменении крупного рогатого скота. В селекционно-гибридных центрах и крупных свиноводческих комплексах созданы собственные станции (пункты) искусственного осеменения свиней, а на конных заводах и в овцеводческих хозяйствах -пункты искусственного осеменения кобыл и овец. В опытной станции по птицеводству и ряде других птицеводческих предприятий организовано искусственное осеменение кур, индеек, уток.

Племпредприятия осуществляют свою деятельность непосредственно через пункты искусственного осеменения коров и телок, которые имеются на фермах почти всех сельскохозяйственных предприятий республики. Основными задачами племпредприятий и районных станций являются:

• оказание помощи хозяйствам в зоне их деятельности в открытии пунктов искусственного осеменения ц создании нормальных условий для их функционирования;

• обеспечение пунктов напрямую или через объединение "Агрозооветснаб" необходимым инструментом, реактивами и материалами, криогенным оборудованием и хладагентом (жидким азотом);

• обеспечение хозяйств спермой высококлассных племенных производителей;

• составление плана племенной работы и искусственного осеменения животных, осуществление контроля за его выполнением;

• организация курсов по подготовке и повышению квалификации специалистов по искусственному осеменению (эта работа проводится самостоятельно или совместно со специальными средними и высшими учебными заведениями);

• внедрение в практику своей работы, а также работы пунктов искусственного осеменения животных новейших достижений науки и передового опыта по воспроизводству и искусственному осеменению.

Племпредприятие – это специализированное сельскохозяйственное предприятие закрытого типа, где сконцентрированы все лучшие быки-производители региона (а на некоторых племпредприятиях – и производители других видов животных). Деятельность его направлена на максимально эффективное использование генетического потенциала лучших племенных животных. Это достигается путем создания для них нормальных условий кормления и содержания, поддержания хорошего состояния здоровья, оптимального режима полового использования и применения современных технологий обработки, хранения спермы и рационального ее использования в хозяйствах.

На территории племпредприятия, разделенной на три зоны, размещены объекты различного назначения. В зоне А (строго изолированной) находятся помещения для содержания племенных производителей и ремонтного молодняка с выгульными двориками и устройствами для принудительного моциона, лабораторно-тенологический корпус, карантинное помещение для нения спермы в течение 28 дней, ветеринарный пункт. Вся эта зона огорожена сплошным забором. Вход в нее допускается только через зону Б (условно изолированную), а въезд – через контрольно-дезинфекционные пункты. На границе этих двух зон расположены помещение для длительного (стационарного) хранения спермы и изолятор с боксами. В зоне Б, также огороженной забором, передают сперму для транспортирования в хозяйства. Производственные объекты зоны Б связывают зону А с зоной В (условно открытой), в которой размещены рабочие места для административно-управленческого персонала и специалистов племпредприятия, транспортный цех, объекты теплообеспечения, помещения для обработки и дезинфекции сосудов Дьюара и другого оборудования, поступающего из хозяйств. Карантинный двор с постройками и погрузочно-разгрузочной площадкой для вновь поступающих производителей, цех кормопроизводства, жилые дома и другие постройки социально-бытового назначения размещены за пределами огороженных зон племпредприятия.

Такое размещение объектов различного назначения позволяет строго выполнять регламентированные ветеринарно-санитарные правила и требования ветеринарного устава, предупреждать занос возбудителей заразных болезней. На территорию племпредприятия запрещается доступ людей и транспорта, не связанных с обслуживанием животных, а также содержание на территории других видов скота и птицы. При входе в племпредприятие оборудован санпропускник, а для въезда на его территорию – дезбарьер в виде бетонированной ванны размером 4x9 м с подогревом в зимнее время; ванна заполняется дезраствором 2-3%-ного едкого натра с добавлением 10% поваренной соли.

Особое внимание обращают на состояние здоровья ввозимых в племпредприятие взрослых производителей и ремонтного молодняка. Такие животные подвергаются карантинированию в течение 30 дней, а при импорте их из других стран - в течение 60 дней. В смещения для содержания производителей их переводят только после истечения этого срока и проведения исследования на туберкулез и паратуберкулез, лептоспироз, лейкоз, бруцеллез, трихомоноз, кампилобактериоз, псевдомоноз, инфекционный ринотрахеит, на санитарное качество спермы. Баранов исследуют на бру. целлез, инфекционный эпидидимит, листериоз и вирусный аборт; хряков – на туберкулез, бруцеллез, лептоспироз и псевдомоноз; жеребцов – на сап, случную болезнь, бруцеллез и инфекционную анемию. В последующем исследования всех производителей повторяют в сроки, определенные "Ветеринарными правилами при воспроизводстве сельскохозяйственных животных" (1971).

Для контроля за чистотой содержания производителей и ветеринарно-санитарной оценки спермы один раз в квартал проводят бактериологическое исследование спермы и смывов с препуция. По результатам исследования сперму классифицируют на:

• незначительно загрязненную - при содержании в 1 мл до 0,1 тыс. микробов;

• слабо загрязненную – до 2 тыс. микробов в 1 мл; средне загрязненную – до 5 тыс. микробов в 1 мл; сильно загрязненную – более 5 тыс. микробов в 1 мл. Для использования допускают сперму с содержанием не более 5 тыс. непатогенных микробов в 1 мл и с коли-титром не более 1:10. Коли-титр смывов с препуция должен быть не более 1:100. В разбавленной и замороженной сперме не должно содержаться более 500 непатогенных микробов. На сперму, вывозимую за пределы области и республики, выдают ветеринарное свидетельство.

Количество и качество получаемой от производителей спермы в значительной мере зависит от полноценности кормления и условий их содержания. В племпредприятиях производителей всех видов кормят по нормам с учетом возраста, живой массы, состояния упитанности и частоты взятия спермы. Нормы кормления для каждого животного уточняются. При кормлении быков особое внимание обращают на содержание в рационе протеина, витаминов A, D, Е, макро- и микроэлементов. Вводят их в рацион обычно в виде полноценных концентрированных кормов и премиксов. В течение года не допускают резкой смены кормов. Зеленые и сочные корма дают в ограниченном количестве, а в ряде случаев их заменяют высококачественным сеном. При недостаточно полноценном растительном рационе дают корма животного происхождения (рыбную, кровяную, мясную и мясо-костную муку, порошок обезжиренного молока, обрат).

В племпредприятиях с ограниченной земельной площадью в течение всего года применяется привязно-стойловое содержание быков-производителей. Содержат их в сухих, светлых, хорошо вентилируемых помещениях. Полы в стойлах деревянные; размер стойла до 2,5 м в длину и 1,8-2 м в ширину. Привязывают быков двухконцевой цепной привязью за надетый на шею толстый ременный ошейник. Привязное содержание предполагает организацию принудительного моциона. Чаще моцион проводится на специальной площадке, оборудованной кормушками и автопоилками, с устройством электромеханического монорельсового (цепного или тросового) агрегата, а иногда - в кольцевом коридоре.

Баранов-производителей содержат зимой в чистых и сухих групповых станках по 5 гол. (из расчета не менее 2 м² площади на каждого). Весь световой день, а в хорошую погоду в течение суток они должны находиться в просторных сухих помещениях и только в ненастную погоду их следует загонять в помещение. В летнее время баранов выпасают на пастбищах (в жаркие дни - рано утром и вечером) и подкармливают концентрированными кормами. За 1,5-2 мес. до начала искусственного осеменения им постепенно увеличивают дачу грубых, сочных и концентрированных кормов. Включают в их рацион и корма животного происхождения.

Хряков содержат в индивидуальных или групповых станках; зимой - в чистых, светлых помещениях, летом - в хорошо оборудованных лагерях с навесами, рационы для них составляют из разнообразных кормов и делают не слишком объемными. В зависимости от интенсивности использования хряки получают на каждые 100 кг массы от 1,4 до 2,1 кг сухого вещества. Корма животного происхождения вводятся в рацион в количестве 20-25% по содержанию протеина или 8-10% по общей питательности.

Жеребцов содержат в просторных (16-18 м²) светлых денниках без привязи; полы застилают сухой соломой. В теплое время года они должны находиться в леваде большую часть дня, в зимнее время – не менее 4 ч. Моцион для жеребцов является важнейшим условием длительного сохранения здоровья и воспроизводительной способности. Организуют моцион ежедневно в течение 1,5-2 ч в виде легкой работы в упряжке или под седлом. Кормят жеребцов по индивидуальным нормам не реже 4 раз в сутки. В рацион их включают хорошее злаковое, бобовое или злаково-бобовое сено, 2-3 вида концентрированных кормов (овес, отруби пшеничные, просо, горох, кукурузу, ячмень, льняное семя), сочные и зеленые корма, в летнее время – траву. Корма животного происхождения (обрат в натуральном или сушеном виде, творог, куриные яйца, мясо-костную и рыбную муку) вводят в рацион за месяц до начала случки. Одним из важнейших условий успешного проведения искусственного осеменения является наличие в хозяйствах хорошо оборудованных пунктов или лабораторий по воспроизводству животных. Пункты строятся по типовым проектам, но допускается размещение их в переоборудованных помещениях, которые отвечают необходимым ветеринарно-санитарным и зоотехническим требованиям.

Пункт искусственного осеменения коров и телок (лабораторию по воспроизводству) следует располагать возможно ближе к помещениям, в которых содержатся животные, и к путям прогона, чтобы сократить время на привод животных в охоте или переходы специалиста к месту их осеменения. На фермах, где внедрена поточно-цеховая система производства молока, пункт должен примыкать к цеху раздоя и осеменения коров. На комплексах по выращиванию телок пункт располагают вблизи цеха содержания животных 14-18-месячного возраста: возле него устраивают специальные загоны с прогонами-коридорами для перевода животных в манеж пункта. К пунктам оборудуют хорошие подъездные пути для автомашин, транспортирующих жидкий азот для заправки сосудов Дьюара.

Стационарный типовой пункт искусственного осеменения имеет лабораторию, моечную, манеж, кладовую, помещение для коров и телок до и после осеменения, а также бытовые помещения. Нередко в хозяйствах осеменение животных проводится непосредственно на местах их содержания; в этих случаях на пункте устраивают только лабораторию, моечную и бытовое помещение.

В манеже пункта пол должен быть твердым, легко поддающимся чистке и мойке, а стенки до высоты 1,5 м от пола ^- облицованы плиткой или окрашены масляной краской светлых тонов. В манеже устанавливают станок с удобной и безболезненной для животных фиксацией. Лабораторию размещают в отапливаемой (18-23°С) светлой комнате площадью не менее 6 м². В ней должны быть шкафы и столы для посуды, инструмента, материалов, микроскопа, биотермостата для оттаивания спермы; бытовой холодильник, сушильный шкаф для стерилизации инструмента и посуды и т.д. Моечная должна располагаться рядом с лабораторией и иметь выход в манеж. В ней устанавливают оборудование, приборы и приспособления для мытья и стерилизации инструмента, посуды, для стирки халатов и полотенец.

При осеменении коров и телок на пастбище для каждого стада необходимо иметь передвижной пункт с одним или несколькими станками. В хозяйствах с мясным скотоводством, где осеменение сезонное, допускается устройство одного пункта из расчета на один-три маточных гурта. Пункт должен иметь карду-раскол, лабораторию (деревянное помещение – будку), станок с фиксирующим механическим приспособлением под навесом, индивидуальные станки-боксы (10-15 м²) под общим навесом для временного содержания коров и телок после осеменения.

Все пункты искусственного осеменения необходимо периодически доукомплектовывать современным оборудованием, инструментом, материалами, обновлять столы и мебель для хранения инструмента, растворов, материалов, а также для верхней и специальной одежды и обуви специалистов.

Пункты искусственного осеменения овец организуют в благополучных по заразным заболеваниям нси. вотных хозяйствах (фермах). В зависимости от формЬ1 организации осеменения, принятой в хозяйстве, объем работы и устройство пунктов различаются. При использовании транспортированной спермы баранов на пункте устраивают манеж площадью не менее 16м², лабораторию – 8 м², помещения (загоны) для осемененных и неосемененных маток по 18 м². При использовании неразбавленной свежеполученной спермы собственных баранов-производителей, кроме перечисленных, необходимо иметь еще и помещение для таких животных. Возле каждого пункта оборудуют помещения для кормов и загоны для основных баранов-пробников.

Лаборатория и манеж должны быть теплыми, сухими, светлыми. Пол в манеже делают твердым, удобным для чистки, не скользким. Сзади рабочего места техника на высоте 0,5 м от пола должно находиться окно. Территория пункта должна быть огорожена; при входе на территорию оборудуется дезковрик. При отсутствии типовых пунктов допускается использование переоборудованных помещений.

Станции (пункты) искусственного осеменения свиней организуют, как правило, в крупных специализированных свиноводческих предприятиях: селекционно-гибридных центрах, племенных репродукторах и промышленных комплексах. Станция включает следующие помещения: для содержания хряков, лаборатор-но-технологическое и санпропускник. В лабораторно-технологическом помещении устраивают предманеж-ную с душевой и сушилкой, манеж с кабинами и чучелами в них, моечную, стерилизационную, бокс для искусственных вагин, лабораторию, комнаты для техника и хранения и выдачи спермы, кладовую. В хозяйствах, в которых используют привозную сперму, пункт искусственного осеменения может иметь только лабораторию, моечную и манеж для осеменения маток.

Пункты искусственного осеменения лошадей при государственных заводских конюшнях (конезаводах) устраивают в типовых или приспособленных помещениях. В них оборудуют манеж, лабораторию, моечную» кладовую, комнату для хранения сбруи и фуража; возле пункта оборудуют выгульную площадку для жеребцов. Манеж для взятия спермы от жеребцов и осеменение кобыл площадью около 50 м² должен иметь высокий потолок (3,75 м). Для фиксации кобыл в манеже станавливают деревянный или металлический станок. На подпунктах, где осеменяют только кобыл, оборудуют отапливаемое помещение для хранения и подготовки инструмента и работы со спермой, а также помещение (манеж) для осеменения кобыл.

Разрешение на открытие пунктов искусственного осеменения сельскохозяйственных животных в хозяйствах выдает управление сельского хозяйства района на основании заключения специальной комиссии. Предоставление комиссией акта о готовности пункта к работе является основанием для оформления и выдачи соответствующего паспорта. В акте должно быть отражено: пригодность пункта (лаборатории по воспроизводству) для работы; обеспеченность его необходимым инструментом, материалами, оборудованием; наличие квалифицированных специалистов (техников) по искусственному осеменению; состояние зоотехнического учета и ведение нумерации животных; благополучие хозяйства (фермы) в ветеринарно-санитарном отношении. Для пунктов, работающих на привозной сперме, кроме того, обязательно наличие договора с плем-предприятием (другим хозяйством) на поставку спермы и проведение искусственного осеменения.

Специалист (техник) по искусственному осеменению, назначаемый для работы на пункте искусственного осеменения, в зависимости от характера выполняемых работ должен иметь высшее или среднее специальное (ветеринарная медицина, зоотехния) образование или получить специальную подготовку на курсах по программе для техников по искусственному осеменению. Обладание хорошими теоретическими знаниями и практическими навыками в области воспроизводства животных, владение в совершенстве техникой искусственного осеменения самок являются гарантией полной Реализации генетически обусловленного уровня воспроизводительной способности животных.