2. Значение проведения мониторинга состояния окружающей среды для предотвращения распространения инфекционных заболеваний

Ответ. Влияние деятельности человека на окружающую среду принимает различные формы. Многие из них широко известны, однако эксперты, похоже, недавно обнаружили еще один побочный эффект этого взаимодействия, который имеет прямые последствия для здоровья людей. Программа ООН по окружающей среде (ЮНЕП) предупреждает, что исчезновение лесов, строительство дорог и дамб, распространение городов, расчистка естественной среды обитания для развития сельского хозяйства и горнодобывающей промышленности, а также загрязнение прибрежных вод содействуют формированию условий, при которых могут бурно развиваться новые и старые патогены — бактерии, вирусы и болезнетворные микроорганизмы. ЮНЕП отмечает, что сохранившиеся нетронутыми природная среда и ландшафты, как правило, держат возбудителей инфекции под контролем, но в случае причинения им ущерба, их изменения или деградации происходит нарушение естественного баланса, в результате чего запускается механизм распространения среди людей новых и уже существующих болезней. ЮНЕП также указывает на возможную связь с изменением климата, которое может привести к изменению температуры и созданию благоприятных условий для таких переносчиков инфекционных заболеваний, как комары, или к экологическому стрессу и изменению природной среды в такой степени, что люди вынуждены мигрировать в качестве «экологических беженцев». Всемирная организация здравоохранения отметила, что за последние два десятилетия появилось по крайней мере 30 новых заболеваний, которые «представляют угрозу для здоровья сотен миллионов человек». Источником всех патогенных микроорганизмов является человек и животные. Вода, почва, воздух чаще выступают как факторы передачи инфекционных болезней. Однако регистрируются случаи, когда объекты окружающей среды выполняют роль основных источников заболеваний. Микроорганизмы от человека могут долго сохраняться в окружающей среде, например: сальмонелла в холодной стоячей воде - до 2-ух лет, а в почве - до 10 мес.; дизентерийная палочка в почве - 10-20 дней.

3. Методы оценки микробиологического загрязнения среды патогенами

Ответ. Все санитарно-микробиологические методы можно разделить на две большие группы: прямые и косвенные методы. Прямые методы - это методы непосредственного обнаружения патогенных микроорганизмов в окружающей среде. Однако прямое выявление патогенных микроорганизмов сопряжено с рядом трудностей, связанных, прежде всего, с низкой концентрацией данных микроорганизмов, которые, как правило, не могут размножаться в воздухе, воде и почве. Поэтому в санитарно-микробиологических исследованиях в основном применяют косвенные методы, указывающие на возможное присутствие патогенных микроорганизмов. Косвенные методы могут быть качественными и количественными. Качественные устанавливают лишь факт наличия или отсутствия микроорганизмов в исследуемом объекте. Количественные методы позволяют определить степень микробного загрязнения объектов окружающей среды и, следовательно, их потенциальную опасность для здоровья человека. К косвенным количественным методам относят: определение общего микробного числа (или общей микробной обсемененности, или общего количества бактерий); количественный учет санитарно-показательных микроорганизмов. Общее микробное число (ОМЧ) - количество микроорганизмов в единице объема исследуемого объекта. Выражается в кл/мл, кл/г, кл/м3 или КОЕ/мл, КОЕ/г, КОЕ/м3. При определении ОМЧ исходят из предположения, что, чем оно больше, тем выше вероятность попадания в объект патогенных микроорганизмов. Определение ОМЧ должно проводиться с соблюдением определенных правил: пробы, взятые асептично из разных участков исследуемого объекта, или средние пробы должны транспортироваться в лабораторию в условиях, исключающих добавочное загрязнение, а также размножение или отмирание микроорганизмов. В лаборатории пробы гомогенизируют, затем отмеряют определенные весовые или объемные количества материала и подвергают его исследованию. Существует два метода определения ОМЧ: метод прямого подсчета и метод количественного посева различных разведений образцов и проб исследуемого материала на питательные среды. Количественные показатели характеризуют степень обсемененности данного объекта микроорганизмами, т.е общее микробное число в единице веса (объема) - обычно в 1г (1см3). Существует два метода определения микробной обсемененности: метод прямого подсчета и метод количественного посева проб исследуемого объекта или его разведений на питательные среды. Прямой подсчет микроорганизмов в исследуемом объекте проводится под микроскопом в счетных камерах Горяева или в камерах, специально сконструированных для счета бактерий. Предварительно пробу исследуемого объекта подвергают обработке, чтобы получить гомогенную взвесь. Для лучшего учета бактерий в исследуемую суспензию добавляют краситель, чаще всего эритрозин. Можно проводить прямой подсчет и на мембранных фильтрах, через которые пропускают исследуемую жидкость или взвесь. Метод прямого подсчета применяется в экстренных случаях, когда необходимо срочно дать ответ о количественном содержании бактерий, например, при авариях в системе водоснабжения, при оценке эффективности работы очистных сооружений и т. п. Метод прямого подсчета кажется простым и удобным, однако он имеет ряд существенных недостатков, снижающих его ценность и из-за этого довольно редко используется. Существенным недостатком его является невозможность подсчитать бактерии, когда образуются их скопления или когда они «прилипают» к частицам исследуемого субстрата, не удается подсчитать мелкие микроорганизмы, не говоря уже о вирусах. И наконец, метод прямого подсчета не дает возможности отличить живые микроорганизмы от погибших. Создание автоматических приборов для регистрации общей микробной обсемененности, таких как фотоэлектрические и электронные счетчики, делает метод прямого подсчета более перспективным. Метод количественного посева исследуемого материала на плотные питательные среды применяется наиболее часто. Из приготовленных серийных десятикратных разведений исследуемой жидкости или суспензии по 1 мл переносят в стерильные чашки Петри (начиная с большего разведения, каждое разведение отдельной пипеткой) и заливают расплавленным и остуженным до 45—50 °С мясопептонным агаром - МПА (глубинный посев). Для равномерного смешивания чашки слегка двигают по поверхности стола и после застывания агара помещают в термостат. После инкубации подсчитывают число выросших колоний и с учетом разведения высчитывают число жизнеспособных микробов в единице объема исследуемого объекта. Если посевы выращивали при 30°С, то показателем общей обсемененности исследуемого материала является КМАФАнМ (или МАФАнМ). КМАФАнМ не определяют только у продуктов, при производстве которых используют заквасочные культуры. В зависимости от вида продукта и способа его производства этот показатель может свидетельствовать об общем санитарно- эпидемиологическом состоянии продукта, свежести или начальной стадии порчи внешне доброкачественного продукта, хотя во многих случаях метод считается приблизительным из-за невозможности выявить все микроорганизмы в объекте на одной питательной среде, т.к. их физиолого-биохимические свойства различны. Кроме того, режим инкубации также не соответствует требованиям всех микроорганизмов в ассоциации, не дают роста микробы, находящиеся в комочках исследуемого объекта, а если и наблюдается рост колоний, то, возможно, не из одной особи. Наконец, часть микроорганизмов теряет способность к размножению в силу антагонизма, конкуренции и других причин. Несмотря на недостатки этого показателя, для многих продуктов КМАФАнМ нормируется. Для количественной характеристики применяются две группы методик: определения титра и индекса. Титр - это тот наименьший объем исследуемого материала (в миллилитрах) или весовое количество (в граммах), в котором обнаружена хоть одна особь санитарно-показательного микроорганизма. Например, для определения титра кишечной палочки в воде засевают несколько разных объемов (от 100 до 0,1 или до 0,01 мл в зависимости от предполагаемой степени загрязнения объекта) в жидкие сахарные питательные среды. Размножение в них кишечных палочек регистрируется по наличию брожения-расщепления углевода до кислоты и газа. Пересев на плотные дифференциально-диагностические среды и идентификация выросших колоний позволяют выяснить те объемы, в которых присутствовала кишечная палочка. Затем с помощью специальных таблиц, определяют ко ли-титр. Набор таблиц входит в ГОСТ. Индекс - количество особей санитарно-показательного микроба, обнаруженного в определенном объеме (количестве) исследуемого объекта. Для воды, молока, других жидких продуктов - в 1 л, для почвы, и пищевых продуктов - в 1 г. Индекс - величина, обратная титру, поэтому перерасчет титра в индекс и обратно можно производить по формуле: Титр = 1000/индекс; Индекс = 1000/ титр. Соответственно для почвы и пищевых продуктов: Титр = 1/индекс; Индекс = 1/титр. Индекс чаще определяют путем применения мембранных фильтров или посева различных разведений исследуемых субстратов на питательные среды. Выбор того или иного санитарно-показательного микроорганизма зависит от исследуемого объекта и конкретной задачи. Соответственно говорят, например, о титре или индексе протея или маслянокислых бактерий и т.п. Нередко (и во многих ГОСТах это узаконено) одновременно исследуется и ведется количественный учет двух или более санитарно-показательных микроорганизмов. Качественные показатели указывают на отсутствие (присутствие) микробов конкретных видов в определенной массе продукта. Прямое выявление в пищевых продуктах патогенных или условно-патогенных микробов и их ядов проводится в соответствии с существующими нормативными документами. Обычно проверяют наличие микроорганизмов p.p.Salmonella, Staphylococcus, Cl.botulinum и их токсинов, Cl.perfringens, Bac.cereus и др. Согласно требованиям ГОСТов патогенные микроорганизмы и их токсины должны отсутствовать в определенном объеме (массе) материала, подвергнутого исследованиям (25, 50 г и т.д.).