Тема 9. Морфологические и биохимические свойства гнойного экссудата

Цель занятия: изучить состав гнойного экссудата, его ферментативные свойства и реакцию среды.

В зависимости от причин, вызывающих воспаление, и осо­бенностей развития воспалительного процесса различают сле­дующие виды экссудатов: серозный, фибринозный, гнойный, геморрагический смешанный. Общая характеристика экссу­дата, динамика его развития, те или иные превращения од­ной разновидности в другую, конечная судьба связаны с об­щей характеристикой процесса, его причиной и состоянием организма. Воспалительный экссудат — жидкость, содержа­щая белок и форменные элементы, в основном лейкоциты.

Экссудат и обусловливает отечность ткани или заполняет свободную полость. Качественный состав экссудата отличен от транссудата. Гнойное воспаление сопровождается скопле­нием в воспалительном очаге гнойного экссудата (гноя).

Альтерация — повреждение структуры клеток, тканей, органов.

Гной - продукт воспаления, состоящий из гнойных телец, микробов, тканей, гнойной сыворотки.

Пролиферация — разрастание клеток, сопровождаемое их делением.

Регенерация — восстановление утраченных частей, кле­ток, тканей.

Флегмона — острое, разлитое, чаще гнойное воспаление рыхлой клетчатки.

Эрозия — поверхностное повреждение кожи или слизи­стой оболочки с нарушением целостности эпителия.

Эмпиема — скопление гноя в естественных полостях тела.

Оснащение: гной, микроскоп с иммерсионной системой, предметные стекла, иммерсионное масло, пробирки, набор пипеток, термостат, стекла со шлифованным краем, р-р Лю-голя, насыщенный р-р Судана III, спирт этиловый 50%, 96%; спирт метиловый; 1% р-р крахмала, 1% р-р казеина или раз­веденный водой куриный белок, яйца, 20% р-р формалина, 3% уксусная кислота, индикаторная бумага, дистиллирован­ная вода, краска Романовского—Гимзы.

Опыт 1. Морфология гноя

Порядок работы. Морфологические изменения лей­коцитов. Приготавливают из исследуемого гноя 3 мазка. Один из мазков высушивают на воздухе и фиксируют метиловым спиртом 10 мин, красят в течение 30—40 мин краской Рома­новского—Гимзы, смывают краску дистиллированной водой, высушивают на воздухе. Рассматривая мазок под микроско­пом (под иммерсионной системой), обращают внимание на различные стадии превращения лейкоцитов в гнойные тель­ца, на нити фибрина, капли жира, гликогена, кусочки рас­павшейся ткани, микроорганизмы.

Определение содержания гликогена в лейкоцитах. Второй мазок гноя фиксируют в 96% этиловом спирте 10 мин, кра­сят раствором Люголя в течение 20 мин, сушат на воздухе. Рассматривают мазок под микроскопом: находят лейкоциты,

32

33

содержащие гликоген, который окрашивается р-ром Люголя в коричневый цвет.

Определение жира в гнойных тельцах. Третий мазок гноя фиксируют 20 мин в 20% р-ре формалина, красят насыщен­ным р-ром Судана III в течение часа, ополаскивают ма­зок в 50% этиловом спирте, потом промывают дистилли­рованной водой, просушивают на воздухе. Рассматривают мазок под микроскопом, находят гнойные тельца, содержа­щие капли жира (жир окрашивается Суданом III в оранже­вый цвет).

Опыт 2. Определение рН гнойного экссудата

Порядок работы. Индикаторную бумагу опускают в исследуемый гной. Полученную окраску бумаги сравнива­ют с индикаторной шкалой (рН обычной тканевой жидкости 7,2—7,4). Гной при остром воспалении — 6,0—6,4, при хро­ническом — 6,6—6,9.

Опыт 3. Определение протеолитической активности гноя

Порядок работы. В одну пробирку наливают раз­веденный 1:10 гнойный экссудат в количестве 1 мл (опыт­ная), во вторую — 1 мл физраствора (контроль). Затем в обе пробирки приливают по 0,5 мл 1 % р-ра казеина или разве­денного дистиллированной водой белка куриного яйца. По­лученную смесь выдерживают 30 мин в термостате при тем­пературе 37—40°С и в каждую пробирку вносят по 3 капли 5% р-ра уксусной кислоты. Отсутствие помутнения указыва­ет на расщепление белка в пробирке, обусловленное наличи­ем протеолитических ферментов. (Определение основано на искусственном внесении в гнойный экссудат белка с последу­ющим контролем с помощью реактивов.).

Опыт 4. Определение амилолитической активности гноя

Порядок работы. Принцип определения сходен с предыдущим, но в качестве субстрата берется 1% р-р крах­мала. В первую пробирку наливают 1 мл гнойного экссудата и 0,2 мл 1% р-ра крахмала, во вторую (контрольную) —

34

физраствор и 0,2 мл 1% крахмала и на 30 мин помещают в термостат при 37°С, затем прибавляют 3 капли р-ра Люго­ля. Отсутствие синего окрашивания говорит о присутствии амилазы.

Контрольные вопросы

1. Определение понятий «экссудат» и «транссудат».

2. Факторы, вызывающие экссудацию.

3. Классификация воспалений по характеру экссудата.

4. Что такое эмиграция лейкоцитов? Теории, объясняющие эмиграцию.