Тема 10. Фагоцитоз

Цель занятия: изучить стадии фагоцитоза при воспалении и овладеть методикой определения фагоцитарного числа.

Фагоцитоз — активный физиологический процесс захвата и переваривания инородных тел фагоцитами с помощью фер­ментов. Фагоцитоз является одним из важнейших моментов иммунного ответа животных. Макрофаги — крупные клетки белой крови, способные к захватыванию и перевариванию микробов и инородных частиц. К макрофагам относятся и клетки PMC (ретикуломакрофагальной системы): ретикуло-эндотелий печени, селезенки, костного мозга, лимфатических узлов, гистиоциты и клетки белой крови — моноциты. Микро­фаги — клетки белой крови (нейтрофилы), способные к за­хватыванию микроорганизмов. Хемотаксис — способность некоторых химических веществ притягивать или отталкивать лейкоциты. Фагоцитоз — защитная реакция организма. Ак­тивность фагоцитоза определяется фагоцитарным числом. Фа-гоцитариое число — отношение числа микробов, фагоцитиро­ванных лейкоцитами, к числу подсчитанных в мазке лейко­цитов, т. е. количество микробов, которое в среднем прихо­дится на один лейкоцит. Фагоцитарная активность — отно­шение количества лейкоцитов, участвующих в фагоцитозе, к числу подсчитанных лейкоцитов; выражается в процентах. Фагоцитарная интенсивность — отношение количества микро­бов, фагоцитированных лейкоцитами, к числу лейкоцитов, принимающих участие в фагоцитозе. Существуют следующие методы определения фагоцитарного числа: in vivo (в организ­ме) и in vitro (вне организма).

Оснащение: микроскоп, предметные стекла с лункой, по-

35

кровное стекло, предметное стекло обезжиренное, 3% взвесь эритроцитов курицы в физиологическом растворе — 4 мл, шприц на 5 мл с иглой, хирургический пинцет, ножницы глаз­ные прямые, пипетки пастеровские стерильные, 0,02% раствор краски нейтральрот — 4 мл, вазелин в чашечке, краска Ро­мановского— Гимзы — 20 мл, йодная настойка, вата, лейко­циты лошади, сыворотка крови лошади, взвесь микробов, шлифованное стекло, чашки Петри, дистиллированная вода, термостат, спиртовка, иммерсионное масло, часовое стекло, мясопептонный бульон стерильный—10 мл, морская свинка.

Опыт 1. Фагоцитоз макрофагами эритроцитов курицы

Порядок работы. Морской свинке вводят в полость живота 10 мл стерильного мясопептонного бульона. Прокол производят иглой по средней линии живота, в нижней его ча­сти, в положении животного вниз головой. Спустя сутки в по­лость живота вводят 4 мл 3% взвеси эритроцитов курицы, затем каждые 15 мин стерильной пастеровской пипеткой на­бирают 1—2 мл экссудата из брюшной полости. Из экссуда­та изготовляют препарат висячей капли и мазки. Окрашен­ные мазки рассматривают под микроскопом под иммерсией. В тетрадях зарисовывают различные стадии фагоцитоза.

Опыт 2. Определение фагоцитарного числа in vitro

Порядок работы. Для выполнения данной работы необходимо иметь три компонента: лейкоциты, сыворотку крови лошади или какого-либо другого животного, взвесь микробов.

Получение лейкоцитов. У лошади из яремной вены берут 20—35 мл крови и разливают по 8—10 мл в центрифужные пробирки, в которые предварительно вносят 1—2 мл 4% р-ра лимоннокислого натрия, чтобы предупредить свертывание крови.

Осторожно перемешав содержимое, пробирки вставляют в гнезда центрифуги и центрифугируют 6—10 мин. По окон- чании центрифугирования плазму, находящуюся сверху, от­сасывают пипеткой с расширением посредине. В центрифуж­ные пробирки приливают физиологический раствор, вновь центрифугируют и отсасывают жидкость, скопившуюся над

36

лейкоцитами. Наконец, в пастеровскую пипетку насасывают лейкоциты, находящиеся над эритроцитами.

Получение сыворотки. Описанным выше способом берут у лошади 20—25 мл крови, сливают в сухие центрифужные пробирки, ждут, пока кровь свернется, после чего обводят тонкой стеклянной палочкой края образовавшегося сгустка. Затем пробирки с кровью центрифугируют. Сыворотка в про­бирках образует верхний слой.

Получение эмульсии микробов. В пробирку с суточной культурой стрептококка, посеянной на агаре, наливают фи­зиологический р-р, микробы смывают, взвесь их сливают в плоскодонную колбу и тщательно взбалтывают.

Ход определения. В пастеровскую пипетку до метки, на­несенной карандашом, в три приема последовательно всасы­вают равные объемы лейкоцитов, сыворотки и взвеси микро­бов. Перечисленные ингредиенты выдувают на часовое стек­ло и тщательно перемешивают (путем повторного насасыва-ния в пипетку с последующим выдуванием).

Полученную равномерную смесь лейкоцитов, сыворотки и микробов собирают в пипетку, запаивают тонкий конец ее над огнем спиртовки и ставят в термостат на 20—25 мин при температуре 38°С.

Вынув пипетку из термостата, отламывают ее тонкий ко­нец и выдувают первую каплю смеси на часовое стекло, вто­рую и последующие капли наносят на предметные стекла, чтобы получить из них мазки. Высушивают мазки быстрым проведением через пламя горелки, фиксируют в р-ре спирт-эфира — смеси Никифорова — в течение 15—20 мин, окрашивают по Филипсону (используется краска Романовско­го— Гимзы, из нее готовят спиртовый р-р: 1 часть краски, 3 части спирта, а из спиртового готовят водный раствор в со­отношении 1:1). Окрашиваются мазки вначале в спиртовом р-ре в течение 1 мин, затем 5—7 мин в водном р-ре.

Смыв краситель и высушив мазки, препарат просматри­вают под микроскопом с иммерсионной системой. Обращают внимание на лейкоциты с находящимися в их цитоплазме микробами. Отсчитывают 100 лейкоцитов, делают вывод о фагоцитарном числе, фагоцитарной активности, фагоцитар­ной интенсивности.

37

Опыт 3. Модель фагоцитоза (опыт Данилевского),

Порядок работы. В чашку Петри помещают кри­сталлик двухромовокислого калия, наливают 10% р-р азот­ной кислоты и вводят каплю ртути на расстоянии 1,5—2,0 см от кристаллика. По мере растворения кристаллика изменяет­ся форма капли ртути — она становится амебовидной, пере­двигается по направлению к кристаллику, окружает его, что в некотором отношении напоминает процесс фагоцитоза.

Амебовидное движение ртути объясняется тем, что при растворении двухромовокислого калия в азотной кислоте об­разуются комплексные соединения, изменяющие поверхност­ное натяжение ртути в различной степени и в различных ча­стях капли. Такие же соотношения имеют место между лей­коцитами и поверхностно-активными веществами в очаге вос­паления.

Контрольные вопросы

1. Классификация фагоцитов.

2. Стадии фагоцитоза.

3. Учение И. И. Мечникова о фагоцитозе.

4. Факторы, способствующие фагоцитозу.

Контрольные вопросы по модулю № 1 Общее учение о болезни

1. Понятие о болезни, патологической реакции, патологи-­ ческом процессе и патологическом состоянии.

2. Основные этапы развития патологии. Задачи патологи­ ческой' физиологии. Взаимоотношение местного и общего в патологии.

3. Вклад отечественных ученых (С. П. Боткина, И. М. Се­- ченова, iB. В. Пашутина, И. И. Мечникова, И. П. Павлова, Н. Н. Сиротинина и др.) в развитие материалистического учения о болезни.

4. Роль нервной и гуморальной регуляции в развитии бо­- лезни. Типы высшей нервной деятельности и их значение в патологии.

5. Основные периоды и исход болезни. Факторы, опреде­- ляющие особенности развития и исход болезни,

38

6. Ремиссия болезни, рецидив, обострение, осложнение.

7. Клиническая и биологическая, естественная и патологи-­ ческая смерть. Признаки смерти. Восстановление жизненных функций при оживлении-

8. Общие принципы классификации болезней (по проис­- хождению и течению).

9. Наследственно обусловленные и врожденные болезни.

10. Влияние доместикации и промышленного животновод-­ ства на заболеваемость животных.

11. Общий адаптационный синдром. Роль гипоталамогипо- физарнадреналовой системы при состоянии напряжения (стресс).

Общая этиология и патогенез

12. Общее понятие об этиологии и патогенезе болезней. Методологические извращения в понимании причинности бо­- лезни (монокаузализм, конституционализм, кондиционализм).

13. Роль этиологического фактора в развитии патологиче­- ского процесса.

14. Основные понятия: патогенный фактор, причины и ус­- ловия возникновения болезни, патогенез и саногенез.

15. Основное звено патогенеза и причинно-следственные связи.

16. Значение изменения функции нервной системы в раз­- витии болезни (следовых реакций, доминанты, свойства сум­- мировать раздражения, нарушения нервной трофики).

17. Влияние вида, породы, возраста, пола животных на возникновение и течение болезни.

18. Внешние и внутренние барьерные системы организма животных.

19. Защитные, компенсаторные и восстановительные реак­- ции организма.