- •Калининград
- •Оборудование рабочего места студента
- •Правила работы в микробиологической лаборатории
- •Методы антисептической обработки рук лабораторных работников, контамнированных исследуемым материалом, культурами патогенных микробов
- •Микроорганизмы по степени опасности заражения работающих с ними лиц подразделяют на 4 группы
- •Морфология бактерий и микроскопические методы исследований в микробиологии
- •Основные задачи микроскопии:
- •При работе с микроскопом производят следующие действия:
- •Процесс приготовления мазка состоит из трех этапов:
- •Техника приготовления препарата.
- •Техника окраски по Граму (модификация Синева)
- •Выявление вирусов по цитопатическому эффекту
- •Выделение чистой культуры аэробных бактерий
- •Методы, применяемые для выделения чистой культуры:
- •Методы культивирования облигатных внутриклеточных бактерий (риккетсий, хламидий) и вирусов
- •Выделение чистых культур бактерий по методу Дригальского.
- •Особенности физиологии анаэробных бактерий
- •Методы создания анаэробных условий
- •Влияние физических факторов на микроорганизмы
- •Стерилизации паром
- •Контроль стерилизации
- •Определение чувствительности бактерий к антибиотикам
- •Микрофлора воды.
- •Микрофлора рук и предметов окружающей среды
- •Педиатрические аспекты
- •Экспериментальное заражение животных и бактериологическое исследование трупов
- •Фагоцитоз с культурой стафилококка
- •Изучение функционального состояния фагоцитов по кислородному метаболизму (метод хемилюминесценценции)
- •Реакцию агглютинации применяют для:
- •Реакция агглютинации для определения резус-фактора.
- •Непрямые (пассивные) реакции агглютинации.
- •Реакция радиального гемолиза в геле.
- •Механизм действия адъювантов:
Механизм действия адъювантов:
• создание "депо" антигена в месте введения препарата, в результате чего пролонгируется действие антигена на иммунную систему организма;
• усиление воспалительной реакции и активизация иммунокомпетентных клеток и угнетение функции Т-супрессоров;
• активация процесса захвата антигена и его переработки макрофагами.
Адъюванты повышают иммуногенность вакцин в десятки и более раз, особенно молекулярных белковых антигенов (анатоксинов), которые без адъювантов быстро расщепляются ферментами организма. Примеры: АД, АДС, АС-анатоксины, стафилококковый анатоксин.
Ассоциированные вакцины и поливакцины. Препараты, которые содержат комплекс различных антигенов и применяются для одновременной иммунизации против нескольких инфекций. Примеры: АКДС, сек-стаанатоксин (сорбированные на гидроокиси алюминия столбнячный, бо-тулинический А, В, Е и гангренозные перфрингенс и нови-анатоксины);
полиомиелитная-живая пероральная вакцина из 3-х аттенуированных штаммов вирусов I, II, III типов; живая вакцина против кори, краснухи, паротита.
Различают первичную иммунизацию (вакцинацию) и повторную иммунизацию (ревакцинацию). При первичной иммунизации создается первичный активный искусственный иммунитет и повышенная способность реагировать на антиген (иммунологическая память), в результате чего при ревакцинации организм более активно и быстро отвечает на антиген. Вакцины, анатоксины обеспечивают выработку специфического активного искусственного иммунитета спустя 2-3 недели после первичной иммунизации и через 2-7 после ревакцинации (повторной иммунизации).
В нашей стране, в соответствии с принятым федеральным законом №157, ФЗ "Об иммунопрофилактике инфекционных заболеваний", проводится обязательная вакцинация против туберкулеза, гепатита В, полиомиелита, коклюша, дифтерии, столбняка, кори, коревой краснухи, паротита. В "календаре" (с 2002г.) указаны схемы и сроки прививок с момента рождения и в определенные периоды жизни каждого человека.
Возраст |
Вакцинация |
Новорожденные (до12 часов жизни) |
Первая вакцинация против вирусного гепатита В |
Новорожденные (3-7 дней) |
Вакцинация против туберкулеза |
1 месяц |
Вторая вакцинация против вирусного гепатита В |
3 месяца |
Первая вакцинация против дифтерии, коклюша, столбняка, полиомиелита |
4,5 месяца |
Вторая вакцинация против дифтерии, коклюша, столбняка, полиомиелита |
6 месяцев |
Третья вакцинация против дифтерии, коклюша, столбняка. Третья вакцинация против гепатита В. |
12 месяцев |
Вакцинация против кори, краснухи, эпидемического паротита |
18 месяцев |
Первая ревакцинация (повторная вакцинация) против дифтерии, коклюша, столбняка, полиомиелита |
20 месяцев
|
Вторая ревакцинация против полиомиелита |
6 лет
|
Ревакцинация против кори, краснухи, эпидемического паротита |
7 лет
|
Ревакцинация против туберкулеза, Вторая ревакцинация против дифтерии и столбняка |
13 лет
|
Вакцинация против краснухи (девочки), вакцинация против гепатита В (ранее не привитым) |
14 лет
|
Третья ревакцинация против дифтерии, столбняка, туберкулеза, полиомиелита |
Взрослые
|
Ревакцинация против дифтерии и столбняка каждые 10 лет после последней ревакцинации |
Вакцины лечебные назначают при затяжных формах инфекций (дизентерия, бруцеллез, орнитоз, сап, брюшной тиф), для активации иммунитета и десенсибилизации организма. Лучший лечебный эффект имеют ауто-вакцины, т.е. вакцины, приготовленные из собственных микроорганизмов, вызвавших заболевание (фурункулез).
Иммунные сыворотки и гамма - глобулины. Применяются для экстренной защиты (пассивная иммунизация) организма от заболевания (лиц, пребывающих в инкубационном периоде или уже заболевших). По механизму действия сыворотки бывают антитоксические (противодифтерийная, противостолбнячная, противоботулиническая) и антимикробные (противоменингококковая).
Из сывороток получают концентрированный препарат - гамма-глобулин. Гетерологичный гамма-глобулин получают из сыворотки гипериммунизированных животных (против бешенства, сибирской язвы). Гомоло-гичный гамма-глобулин получают из плацентарной и донорской крови 1юдей, имеющих высокие титры антител против определенных антигенов противогриппозный, противокорввый, противостолбнячный гамма глобулин). Гомологичные гаммаглобулины (и антисыворотки), в отличие от гетерологичных, при введении почти не вызывают аллергических осложнений).
К иммунобиологическим препаратам также относятся бактериофаги и эубиотики.
Бактериофаги - препараты, в которых содержатся вирусы бактерий, способные поражать бактерии. Применяют для профилактики и лечения эяда бактериальных инфекций (брюшной тиф, дизентерия, холера, гноите инфекции). Эти препараты также назначаются с профилактической целью контактным в очагах.
Лечебный и профилактический эффект фагов умеренный, поэтому их применяют в комплексе с другими лечебными и профилактическими препаратами.
Диагностические бактериофаги используются для фагодиагностики и фаготипирования бактерий, что имеет эпидемиологическое значение.
Эубиотики-препараты, приготовленные из живых, выращенных на питательных средах непатогенных бактерий, относящихся к облигатным представителям нормальной микрофлоры человека (бифидумбактерии, лактобактерии, кишечная палочка, энтерококки). Соответственно препараты эубиотиков называют: "Бифидумбактерин", "Лактобактерин" "Колибактерин", 1 доза эубиотиков составляет 107 -108 микробных клеток. Их применяют через рот, два-три раза в день, длительными курсами (1-6 месяцев). В аптечную сеть для реализации поступают в основном сухие лиофилизированные препараты. Но более эффективными являются жидкие свежеприготовленные эубиотики, поскольку, кроме бактерий, в жидкости уже содержатся в большом количестве биологически активные вещества. Часто их называют «заквасками», потому что с их помощью можно заквашивать молоко, используя в качестве лечебно-профилактического продукта. Эубиотики восстанавливают видовой и количественный состав бактерий, нарушенный в результате дисбактериоза, повышают устойчивость организма к инфекциям.
Пробиотики кроме живых микроорганизмов, входящих в состав нормальной микрофлоры человека или выделенных из внешней среды, могут содержать ферменты, биологическиактивные вещества и другие компоненты, способствующие формированию нормального микробиоценоза. Например: "Бактисубтил", "Линекс".
Для иммунокоррекции применяются также и многие другие неспецифические иммуностимулирующие препараты различного происхождения.
Тималин. Представляет собой комплекс полипептидных фракций, выделенных из вилочковой железы крупного рогатого скота. Регулирует количество Т- и В- лимфоцитов, стимулирует реакцию клеточного иммунитета, усиливает фагоцитоз.
Тактивин. Препарат полипептидной природы, получен из тимусов крупного рогатого скота. Нормализует качественные и количественные показатели Т системы иммунитета, стимулирует продукцию лимфокинов, в том числе интерферонов.
Левомизол. Тетрагидро-6-фенилимидазо-тиазоло гидрохлорид. Стимулирует регуляторную функцию Т-лимфоцитов, нормализует клеточный иммунитет.
Натрия нуклеинат. Натриевая соль нуклеиновой кислоты, получаемой гидролизом дрожжей и дальнейшей очисткой. Стимулирует деятельность костного мозга, вызывает лейкоцитарную реакцию, стимулирует лейкопоэз.
Продигиозан. Высокополимерный липополисахаридный комплекс, выделенный из микроорганизмов Serratia marcescens. Стимулирует факторы неспецифической и специфической резистентности организма. Активирует Т- систему и функцию коры надпочечников.
Пирогенал. Липополисахарид, микроорганизмов Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhi. При введении в организм вызывает повышение температуры и сдвиги в функциях организма: лейкопения, сменяющаяся лейкоцитозом, увеличение проницаемости тканей, улучшение восстановительных процессов.
Полиоксидоний. Синтетический полимер. Стимулирует активность макрофагов, а также Т- и В-лимфоцитов.
Миелопид. Комплекс пептидов из костного мозга. Оказывает влияние на все компоненты иммунной системы.
Ликопид. Производное мурамилпептидов клеточной стенки бактерий L. bulgaricus, стимулирует функцию макрофагов.
Цели занятия:
1. Ознакомить студентов с критериями необходимости изучения иммунного статуса у определенной категории больных, с принципами и методами проведения этих исследований.
2. Познакомить студентов с иммунобиологическими препаратами, применяемыми для иммунопрофилактики, иммунотерапии (иммунокоррекции) инфекционных заболеваний у человека.
Учебно-целевые задачи:
Знать:
1. Иммунодефицитные состояния: классификация, причины и механизм их возникновения, принципы и методы диагностики.
2. Принципы и методы повышения специфической и неспецифической резистентности к инфекционным заболеваниям человека.
3. Препараты, применяемые для создания активного и пассивного иммунитета и повышения эффективности неспецифической защиты от инфекций. Их классификацию и принципы получения.
4. Календарь прививок.
Уметь:
1. Обосновать необходимость проведения обследования иммунного статуса пациента, дать объективную оценку по результатам иммунограммы.
2. Обосновать необходимость применения вакцин, сывороточных и иммуностимулирующих (неспецифических) препаратов.
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
Для оценки функционального состояния иммунной системы и диагностики патологических изменений её активности разработаны специальные клинические и лабораторные методы, которые предполагают дифференцированную характеристику функциональной активности Т- и В-систем иммунитета. Количественная оценка Т-лимфоцитов:
1. Реакция спонтанного розеткообразования с отмытыми эритроцитами барана (Е-розетки).
2. Идентификация с помощью СD-маркёров.
Количественная оценка В-лимфоцитов:
1. Реакция розеткообразования с эритроцитами, сенсибилизированными 1д и комплементом (ЕАС-розетка).
2. Идентификация с помощью СD-маркёров.
Функциональная оценка Т-звена иммунитета:
1. Реакция бласттрансформации Т-лимфоцитов в результате неспецифической стимуляции Т-митогенами: фитогемагтлютинин (ФГА), конканавалин А (Кон).
2. Реакция лимфоцитотоксичности в смешанной культуре лимфоцитов (М1-С).
3. Продукция Т-лимфоцитами лимфокинов.
Функциональная оценка В-звена иммунитета:
1. Определение уровня основных классов иммуноглобулинов методом радиальной иммунодиффузии (реакция Манчини).
2. Неспецифическая стимуляция лимфоцитов В-митогенами (LPS PWM).
В основе определения принадлежности лимфоцитов к той или иной субпопуляции лежат следующие характеристики:
1. Наличие на поверхности лимфоцитов антигенных маркеров (СD-антигены: сеll differentiation antigens или cluster definition- антигены кластеров дифференцировки клеток), которые представляют собой гликопротеины (gp), специфичные для определенной стадии дифференцировки (СD-"кластер" дифференцировки. Такие антигены выявляются с помощью люминесцирующих моноклональных антител.
2. Наличие на поверхности лимфоцитов рецепторов, с помощью которых лимфоциты распознают антигены и некоторые другие химические структуры:
а) рецептор для эритроцитов барана - специфический маркер для Т-лимфоцитов человека (В-лимфоциты его не имеют) выявляется с помощью розеткообразования с эритроцитами барана (Е-розетки).
б) Fс-рецептор для Fс фрагмента иммуноглобулинов. Он присутствует у В-лимфоцитов. Если эритроциты барана обработать иммуноглобулинами, то В-лимфоциты способны образовывать розетки с такими эритроцитами (антительные Е-розетки).
в) С-рецептор для комплемента. Присутствует у В-лимфоцитов. Поскольку комплекс антиген-антитело способен присоединять комплемент, этот принцип используется для постановки ЕАС - розеток в целях выявления В-лимфоцитов (эритроциты барана сенсибилизируются антителами и комплементом).
Функциональные различия Т- и В-лимфоцитов можно выявить in vitro. Для этой цели чаще всего применяют реакцию бласттрансформации. Она основана на способности малых лимфоцитов при культивировании их in vitro превращаться под влиянием митогенного стимула в бластные формы, проявляющие при этом большую митогенную активность. В качестве митогенного стимула могут быть использованы аллогенные антигены гистосовместимости (микст-культура лимфоцитов - МLC) или некоторые субстанции растительной или бактериальной природы- Среди митогенов выделяют митогены для Т-лимфоцитов (ФГА и Кон А), и митогены для В-: лимфоцитов (ЛПС клеточной стенки бактерий и Р\Л/М - из растения фитолаки).
ДЕМОНСТРАЦИИ
1. Микропрепараты Е-РОК, ЕАС-РОК.
2. Микропрепараты реакции бласттрансформации лимфоцитов.
3. Реакция Манчини на стеклах с агарозным гелем для определения разных классов иммуноглобулинов.
4. Наборы вакцинных препаратов; наборы иммунных сывороток, гаммаглобулинов (лечебных и диагностических). Набор аллергенов.
5. Наборы эубиотиков, бактериофагов, цитокинов.
6. Таблицы, схемы, рисунки.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА
1. Микроскопия препаратов Е-РОК для подсчета Т-клеток.
2. Микроскопия препаратов ЕАС-РОК для подсчета В-клеток.
3. Микроскопия препаратов с реакцией бласттрансформации.
4. Учет реакции радиальной иммунодиффузии (реакцмя Манчини) для определения уровня различных классов иммуноглобулинов в сыворотке крови.
5. Оценка иммунного статуса по готовым бланкам иммунограммы больных.
6. Знакомство с наборами вакцинных препаратов, иммунных сывороток, иммуноглобулинов, аллергенов, неспецифических иммуномодуляторов.
7. Знакомство с препаратами эубиотиков, бактериофагов, цитокинов.
КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ
1. Что такое иммунный статус человека, какие показатели его характеризуют?
2. В каких случаях изучают иммунный статус?
3. Иммунодефицитные заболевания: принципы классификации, этиология и патогенез их развития.
4. Аутоиммунные заболевания: причины возникновения, применение иммунологических методов для их диагностики
5. По каким маркерам можно отличить Т- и В-лимфоциты?
6. Что такое антигены дифференцировки (СD-антигены), каково их практическое значение в клинической иммунологии, как их определить?
7. Что такое мембранные иммуноглобулины, для каких клеток они характерны и как их определить?
8. Что такое прямые (Е-РОК) и непрямые (ЕА-РОК, ЕАС-РОК) розетки, в каких случаях их определяют?
9. Как определить функциональную активность Т- и В-лимфоцитов in vitro и in vivo?
10. Что такое реакция бласттрансформации?
11. Какие митогены применяются в клинической иммунологии и с какой целью? (Классификация и примеры).
12. Как оценивается функциональная активность В-звена иммунной системы?
13. В чем суть реакции радиальной иммунодиффузии (р. Манчини) и с какой целью она ставится ?
14. Каковы принципы иммунокоррекции первичных и вторичных имму-нодефицитов?
15. Что такое вакцины (классификация) и каковы принципы их получения?
16. В каких случаях применяются лечебные вакцины?
17. Что такое химическая вакцина?
18. Каковы принципы получения генно-инженерных вакцин?
19. В каких случаях используется такой метод их получения?
20. Что такое анатоксин, как он получается и для чего применяется?
21. Что такое адъюванты, для чего они применяются, каков механизм их действия?
22. Что такое «адъювантная» болезнь, в каких случаях она может возникать?
23. Что такое «календарь прививок», какие вакцины при этом применяются?
24. Что такое «коллективный» иммунитет, как он создается и какое это имеет значение для предупреждения инфекционных заболеваний?
25. Какими недостатками обладают современные вакцины и каковы пути их устранения?
26. Как получить иммунные сыворотки и для чего они применяются?
27. Что такое гомологичные и гетерологичные гаммаглобулины, как они получаются, для чего используются?
28. Какие осложнения могут возникать у пациента после введения гете-рологичных сывороточных препаратов и как их избежать?
29. Какие препараты применяются для неспецифической иммунокоррекции и каков механизм их действия?