- •Глава 1. Предмет и задачи медицинской микробиологии и иммунологии
- •Мир микробов. Общие сведения
- •Микробиология — наука о микробах
- •Иммунология — наука об иммунитете
- •Связь микробиологии с иммунологией
- •История развития микробиологии и иммуно тогии
- •Isbn 5-225-04208-2 © Издательство «Медицина»,
- •Глава 1. Предмет и задачи медицинской микробиологии и иммунологии
- •Мир микробов. Общие сведения
- •Микробиология — наука о микробах
- •Связь микробиологии с иммунологией
- •История развития микробиологии и иммуно тогии
- •Глава 2. Классификация и морфология микробов
- •Систематика и номенклатура микробов
- •Классификация и морфология бактерий
- •Строение и классификация простейших
- •Основные методы изучения морфологии микробов
- •Глава 3. Физиология микробов
- •Физиология бактерий
- •Рост и размножение бактерий
- •Особенности физиологии грибов и простейших
- •Глава 4. Экология микробов
- •Распространение микробов в окружающей среде
- •Микрофлора почвы
- •4 1.2. Микрофлора воды
- •Микрофлора продуктов питания
- •Действие излучения
- •Действие химических веществ
- •Действие биологических факторов
- •Уничтожение микробов в окружающей среде
- •Стерилизация
- •Дезинфекция
- •Асептика и антисептика
- •Санитарная микробиология
- •Микробиологический контроль лекарственных средств
- •Глава 5. Генетика микробов
- •5‘ Конец
- •Фосфат fc-q
- •Особенности генетики вирусов
- •4. Применение генетических методов в диагностике инфекционных болезней
- •Метод молекулярной гибридизации
- •Глава 6. Биотехнология. Генная инженерия
- •Предмет и задачи биотехнологии
- •3. Объекты и процессы в биотехнологии
- •Генетическая инженерия в биотехнологии
- •Глава 7. Противомикробные препараты
- •Химиотерапевтические лекарства
- •Глава 8. Учение об инфекции
- •Понятие об инфекционной болезни
- •Участники инфекционного процесса
- •Стадии инфекционного процесса и его уровни
- •Патогенные и условно-патогенные микробы
- •Роль окружающей среды
- •Характерные особенности инфекционных болезней
- •8 7. Формы инфекционного процесса
- •Глава 9. Учение об иммунитете
- •Виды иммунитета
- •Созревание, размножение, дифферениировка
- •Патология иммунной системы
- •Реакции антиген — антитело и их практическое применение
- •Реакция преципитации
- •Реакция с использованием меченых антител или антигенов
- •Глава 10. Иммунопрофилактика и иммунотерапия болезней человека
- •Вакцины
- •Убитые вакцины
- •Лекарственные формы вакцин
- •Массовые способы вакцинации
- •10.2.7. Производство вакцин и их контроль
- •Бактериофаги
- •Эубиотики
- •Диагностические препараты
- •Классификация микробов по степени их биологической опасности. Номенклатура микробиологических лабораторий
- •112. Санитарно-техническое оснащение лаборатории
- •Правила работы в микробиологической лаборатории
- •Принципы микробиологической диагностики инфекционных болезней
- •11.S. Принципы иммунологической диагностики болезней человека
- •Глава 12. Возбудители кишечных инфекций
- •Возбудители бактериальных кишечных инфекций
- •Возбудители эшерихиозов
- •Возбудители дизентерии
- •Возбудители брюшного тифа и паратифов
- •Возбудители кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза
- •1.7. Возбудители бруцеллеза
- •Возбудитель хеликобактериоза
- •Возбудители лептоспироза
- •Вирусы энтеральных гепатитов
- •Возбудитель лямблиоза
- •Глава 13 возбудители респираторных инфекционных болезней
- •Возбудители вирусных респираторных инфекций
- •Вирусы гриппа
- •2.2. Вирусы — возбудители других острых респираторных вирусных инфекций
- •Вирус эпидемического паротита
- •Вирус краснухи
- •Вирус оспы обезьян
- •Вирус ветряной оспы и опоясывающего герпеса
- •Глава 14. Возбудители кровяных инфекционных болезней
- •Возбудители бактериальных кровяных инфекций
- •Возбудитель туляремии
- •Возбудители риккетсиозов
- •Глава 15. Возбудители инфекционных болезней наружных покровов
- •Возбудители грибковых инф кций
- •Глава 16. Общие черты зоонозных инфекций
- •Глава 17. Онкогенные вирусы
- •Глава 18. Медленные вирусные инфекции
- •9Теории 210
Реакции антиген — антитело и их практическое применение
В основе гуморального иммунитета лежит взаимодействие антитела с антигеном. Реакция in vitro между антигеном и антителом двухфазная — специфическая и неспецифическая фазы. В специфическую фазу происходит быстрое специфическое связывание активного центра антитела с соответствующей детерминантой антигена. Затем наступает неспецифическая фаза, которая развивается более медленно и требует присутствия электролитов и оптимального pH среды. Внешне неспецифическая фаза может проявляться разнообразными видимыми даже невооруженным глазом физическими явлениями, например образованием хлопьев (феномен агглютинации) или преципитата в виде помутнения и т.д.
Связывание детерминанты антигена (эпитопа) с активным центром /ЬЛ-фрагмента антител обусловлено ван-дер-ваальсовыми силами, водородными связями и гидрофобным взаимодействием. Прочность и количество связавшегося антигена антителами зависят от аффинности, авидности антител и их валентности (см. раздел 9.6).
Иммунные реакции используют при диагностических и
специфическая |
неспецифическая |
|||
активная |
пассивная |
активная |
пассивная |
|
Толерогены |
Антилимфо- цитарная сыворотка Антилимфо- цитарный иммуноглобу лин Моноклональные антитела к рецепторам лимфоцитов |
Облучение Плазмаферез |
Гормоны коры надпочечников Половые гормоны |
иммунологических исследованиях у больных и здоровых людей. С этой целью применяют серологические методы (от лат. serum — сыворотка и logos — учение), т.е. методы изучения антител и антигенов с помощью реакций антиген — антитело, определяемых в сыворотке крови и других жидкостях, а также тканях организма.
Обнаружение в сыворотке крови больного антител против возбудителя или его антигена позволяет поставить диагноз болезни. Серологические исследования применяют также для идентификации антигенов микробов, различных БАВ, групп крови, тканевых и опухолевых антигенов, И К, рецепторов клеток и др.
При выделении микроба от больного проводят идентификацию возбудителя путем изучения его антигенных свойств с помощью иммунных диагностических сывороток, т.е. сывороток крови гипериммунизированных животных, содержащих специфические антитела. Это так называемая серологическая идентификация микроорганизмов.
В микробиологии и иммунологии нашли широкое применение реакции агглютинации, преципитации, нейтрализации, реакции с участием комплемента, с использованием меченых антител и антигенов (радиоиммунологический, иммунофермен- тный, иммунофлюоресцентный методы). Все перечисленные реакции различаются по регистрируемому эффекту и технике постановки, однако все они основаны на реакции взаимодействия антигена с антителом и применяются для выявления как антител, так и антигенов.Реакция агглютинации (РА) — простая по поста новке реакция, при которой происходит связывание антителами корпускулярных антигенов (бакте рий, эритроцитов и других клеток, индифферентных нерастворимых частиц с адсорбированными на них антигенами, а также макромолекулярных агрегатов).
Реакция агглютинации проявляется образованием хлопьев или осадка. Ее используют для определения антител в сыворотке крови больных, например, при бруцеллезе (реакции Райта, Хеддельсона), брюшном тифе и паратифах (реакция Видаля) и других инфекционных болезнях, а также при определении возбудителя, выделенного от больного. Эту же реакцию применяют для определения групп крови с использованием моноклональных антител против аллоантигенов эритроцитов.
Применяются различные варианты реакции агглютинации: развернутая, ориентировочная, непрямая и др.
Для определения у больного антител ставят развернутую реакцию агглютинации: к разведениям сыворотки крови больного добавляют взвесь убитых микробов (диагностикум) и через несколько часов инкубации при 37 °С отмечают наибольшее разведение (титр) сыворотки, при котором произошла агглютинация, т.е. образовался осадок.
Характер и скорость агглютинации зависят от вида антигена и антител. Примером являются особенности взаимодействия О- и Н- антигенов со специфическими антителами: реакция с О диагно- стикумом (бактерии, убитые нагреванием) происходит в виде мелкозернистой агглютинации; реакция с Н диагностикумом (бактерии, убитые формалином) крупнохлопчатая и протекает быстрее.
Если необходимо определить возбудитель, выделенный от больного, ставят ориентировочную реакцию агглютинации, применяя диагностические антитела, т.е. проводят серотипирование возбудителя. Ориентировочную реакцию проводят на предметном стекле. К 1 капле диагностической иммунной сыворотки в разведении 1:10 или 1:20 добавляют чистую культуру возбудителя, выделенного от больного. Если появляется хлопьевидный осадок, то реакцию проводят в пробирках с увеличивающимися разведениями диагностической сыворотки, добавляя в каждую дозу сыворотки 2—3 капли взвеси возбудителя. Реакцию считают положительной, если агглютинация отмечается в разведении, близком к титру диагностической сыворотки. В контролях (сыворотка, разведенная изотоническим раствором хлорида натрия, или взвесь микробов в том же растворе) осадок в виде хлопьев должен отсутствовать.
Разные родственные бактерии могут агглютинироваться одной и той же диагностической агглютинирующей сывороткой, что затрудняет их идентификацию. Поэтому пользуются адсорбированными агглютинирующими сыворотками, из которых удалены перекрестно реагирующие антитела путем адсорбции их родственными бактериями. В таких сыворотках сохраняются антитела, специфичные только к данной бактерии. Получение таким способом монорецепторных диагностических агглютинирующих сывороток было предложено А.Кастелляни (1902).
Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РИГА) основана на использовании эритроцитов (или латекса) с адсорбированными на их поверхности антигенами или антителами, взаимодействие которых с соответствующими антителами или антигенами сыворотки крови больных вызывает склеивание и выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячеики в виде фестончатого осадка. РИГА применяют для диагностики инфекционных болезней, определения гонадотропного гормона в моче при установлении беременности, для выявления повышенной чувствительности к лекарственным препаратам и гормонам и в некоторых других случаях.
Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) основана на блокаде, подавлении вирусов антителами иммунной сыворотки, в результате чего вирусы теряют свойство агглютинировать эритроциты. РТГА применяют для диагностики многих вирусных болезней, возбудители которых (вирусы гриппа, кори, краснухи, клещевого энцефалита и др.) могут агглютинировать эритроциты различных животных.
Реакцию агглютинации для определения групп крови применяют для установления системы АВО (см. раздел 9.5.2.1) с помощью РА эритроцитов, используя антитела к группам крови Л(Н), 5(111). Контролем служит сыворотка, не содержащая антител, т.е. /45(IV) группы крови, антигены, содержащиеся в эритроцитах групп Л(Н), 5(111); отрицательный контроль не содержит антигенов, т.е. используют эритроциты группы О (I).
В реакции агглютинации для определения резус-фактора (см. раздел 9.5.2.1) используют антирезусные сыворотки (не менее двух различных серий). При наличии на мембране исследуемых эритроцитов резус-антигена происходит агглютинация этих клеток. Контролем служат стандартные резус-положительные и резус- отрицательные эритроциты всех групп крови.
Реакцию агглютинации для определения антирезусных антител (непрямую реакцию Кумбса) применяют у больных при внутри- сосудистом гемолизе. У некоторых таких больных обнаруживают антирезусные антитела, которые являются неполными. Они специфически взаимодействуют с резус-положительными эритроцитами, но не вызывают их агглютинации. Наличие таких неполных антител определяют в непрямой реакции Кумбса. Для этого в систему антирезусные антитела + резус-положительные эритроциты добавляют антиглобулиновую сыворотку (антитела против иммуноглобулинов человека), что вызывает агглютинацию эритроцитов. С помощью реакции Кумбса диагностируют патологические состояния, связанные с внутрисосудистым лизисом эритроцитов иммунного генеза, например гемолитическую болезнь новорожденных: эритроциты резус-положительно- го плода соединяются с циркулирующими в крови неполными антителами к резус-фактору, которые перешли через плаценту от резус-отрицательной матери.
Реакция коагглютинации — разновидность РА: клетки возбудителя определяют с помощью стафилококков, предварительно обработанных иммунной диагностической сывороткой. Стафилококки, содержащие белок А, имеющий сродство к иммуноглобулинам, неспецифически адсорбируют антимикробные антитела, которые затем взаимодействуют активными центрами с соответствующими микробами, выделенными от больных. В результате коагглютинации образуются хлопья, состоящие из стафилококков, антител диагностической сыворотки и определяемого микроба.