I этап

II этап

т

Бактериологическое исследование

I Экспресс-методы диагностики

I 1

Биохимические, ммунохимические и молекулярно- биологические исследования определение исследования: ПЦР антигенов

стафилококков

Предварительный ответ

Предварительный ответ

Ориентировочное заключение

Первичный посев на ЖСА

и кровяной агар для получения

изолированных колоний

III этап

Учет результатов посева Пересев типичных колоний на скошенный агар (получение чистой культуры)

Определение чувствительности к антибиотикам Идентификация чистой культуры

По культуральным признакам

По биохимическим признакам

Фаготипирование

Определение продукции факторов вирулентности: плазмокоагулазы, лецитиназы, а-токсина

4.2. Cтрептококки

Стрептококки паразитируют на коже и слизистых оболочках человека, играют большую роль в патологии (вызывают скарлатину, гломерулонефрит, нагноительные заболевания кожи, обнаруживаются при роже, раневых инфекциях, септицемии, фарингитах, тонзиллитах).

Морфология. Стрептококки представлены неподвижными сферическими клетками мерой 0,5-2,0 мкм. В мазках они располагаются парами или короткими цепочками. Клеточная стенка содержит тейхоевые кислоты, углеводы и пептидогликаны, на её поверхности расположены фимбрии, а у патогенных видов имеется капсула. При неблагоприятных воздействиях стрептококки образуют L-формы.

Культуральные свойства.

Характерные особенности стрептококков — отсутствие каталазной активности и способность большинства видов лизировать эритроциты.

Стрептококки разделяют по гемолитической активности на агаре с добавлением эритроцитов барана. Соответственно выделяют α- (дают частичный гемолиз и позеленение среды), β- (полный гемолиз) и γ - (не дающие гемолиз) стрептококки.

Основные возбудители болезней человека — β -гемолитические виды.

Наибольшее распространение получила классификация Ребекки Лэнсфилд (1933), основанная на наличии группоспецифичных углеводов (С-полисахаридов) в клеточной стенке. В соответствии с этим выделяют 17 серогрупп, обозначаемых заглавными латинскими буквами. Внутри групп стрептококки разделяют на серовары по специфичности белковых М-, Р-, и T-антигенов. Зеленящие стрептококки и пневмококки лишены групповых антигенов, и не относятся ни к какой серологической группе.

Стрептококки группы А обнаруживают повсеместно, колонизируют кожные покровы и слизистые оболочки человека. Резервуаром служит больной человек или носитель; основные пути передачи — контактный (с заносом в рот грязными руками) и воздушно-капельный, а также через инфицированные пищевые продукты (молоко).

Факторы патогенности

1. Адгезия. Первый этап инфекционного процесса — адгезия микроорганизма к эпителию слизнстых оболочек. Основные адгезины — липотейхоевые кислоты. Не менее важную роль в прикреплении к субстратам играют гиалуронидаза, стрептодорназа.

2. Белок М (от англ, mucoid, слизистый, так как колонии штаммов-продуцентов имеют слизистую консистенцию) по структуре напоминает фимбрии грамотрицательных бактерий. Белок М - основной фактор вирулентности и типоспецифический антиген, проявляет свойства суперантигена, вызывая активацию лимфоцитов и образование антител, что играет важную роль в нарушении толерантности к тканевым изоантигенам и развитии аутоиммунной патологии.

3. Капсула — фактор вирулентности, защищает бактерии от антимикробного потенциала фагоцитов и облегчает адгезию к эпителию.

4. С5а-пептидаза — третий фактор патогенности, подавляющий активность фагоцитов. Фермент расщепляет и инактивирует С5а компонент комплемента.

5. Стрептолизин О проявляет свойства гемолизина, разрушая эритроциты в анаэробных условиях, проявляет иммуногенные свойства, титры антител к нему имеют прогностическое значение. Стрептолизин S резистентен к кислороду, не несёт антигенной нагрузки и вызывает гемолиз на кровяных средах. Оба фермента разрушают не только эритроциты, но и другие клетки.

6. Эритрогенные (пирогенные) токсины весьма схожи с токсинами стафилококков. Иммунологически их разделяют на три типа (А, В и С). Способность к образованию токсинов детерминирована заражением бактериальной клетки умеренным фагом, несущим ген токсинообразования.

7. Кардиогепатический токсин вызывает поражения миокарда и диафрагмы.

8. Ферменты патогенности. Стрептокиназа (фибринолизин) активирует плазминоген, гиалуронидаза, ДНКаза (стрептодорназа).

микробиологическая диагностика

Основу микробиологической диагностики составляет бактериологический метод.

Методы микробиологической диагностики:

Бактериоскопическое исследование. Мазки для первичной бактериоскопии готовят из патологического материала (за исключением крови), окрашивают по методу Грама и микроско-пируют. При положительном результате обнаруживают цепочки грамположительных кокков.

Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают на кровяной агар в чашку Петри. После инкубации при 37 °С в течение 24 ч отмечают характер колоний и наличие вокруг них зон гемолиза. Из части материала, взятого из колоний, готовят мазок, окрашивают по методу Грама и микроскопируют. Для получения чистой культуры 1—3 подозрительные колонии пересевают в пробирки со скошенным кровяным агаром и сахарным бульоном. В бульоне стрептококк в отличие от стафилококка дает придонно-пристеночный рост в виде хлопьев или зерен, оставляя среду прозрачной.

По характеру гемолиза на кровяном агаре стрептококки делятся на три группы:

1) негемолитические; 2) α -гемолитические, или зеленящие, образующие зеленоватую зону частич­ного гемолиза; 3) β-гемолитические, образующие вокруг колонии прозрачную зону гемолиза.

Через 24 ч на кровяном агаре стрептококки группы А образуют блестящие вязкие колонии. В жидких средах бактерии дают придонный рост. Для дифференцировки стрептококков группы А от других гемолитических стрептококков применяют тест чувствительности к бацитрацину. Стрептококки группы А чувствительны к бацитрацину, тогда как представители других серогрупп устойчивы.

Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация выделенной культуры по антигенным свойствам. Серогруппу стрептококков определяют в реакции преципитации.