II этап бактериологического метода –выделение чистой культуры

Выполняется на жидких (тиогликолевая среда, среда Китта-Тароцци, сердечно-мозговой бульон) или полужидких средах (с добавлением 0,5% агар-агара). Материал из изолированной колонии переносят в пробирку с одной из указанных сред, которые затем желательно поместить в анаэростат. Чистые культуры получают через 3-5 дней культивирования при температуре 37° С.

III этап бактериологического метода – идентификация чистой культуры.

Для определения вида выделенной при анаэробном культивировании чистой культуры используется определение комплекса морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических и других фенотипических свойств.

4. Условно-патогенные грамположительные микроорганизмы как возбудители Гнойно-воспалительных процессов полости рта.

4.1. Стафилококки

Стафилококки относят к семейству Microсоссасеае, роду Staphylococcus. Бактерии распространены повсеместно; колонизируют кожные покровы и поверхности слизистых оболочек человека и животных.

Морфология.

В мазках расположены одиночно, парами или гроздьями, неподвижными клетками диаметром 0,5-1,5 мкм, образуют скопления, напоминающие гроздья винограда в результате деления во взаимно перпендикулярных плоскостях, грамположительны.

Культуральные свойства.

Стафилококки устойчивы к повышенному содержанию хлорида натрия и хорошо растут на средах с содержанием 5-10% NaCl. На плотных средах через 18-24 ч культивирования в аэробных условиях бактерии формируют мутные круглые ровные колонии кремового, жёлтого или оранжевого цвета. Стафилококки каталаза-положительны, оксидаза отрицательны.

По наличию коагулазы все стафилококки разделяют на две группы. Среди коагулаза-положительных стафилококков поражения у человека вызывает лишь S. aureus; среди коагулаза-отрицательных видов — S. epidermidis и S. saprophyticus

Биохимические свойства Бактерии проявляют высокую биохимическую активность: восстанавливают нитраты, вырабатывают H₂S, разлагают мочевину и ферментируют многие углеводы с образованием кислоты.

Антигеннные свойства У стафилококков выделяют более 50 антигенных субстанций, разделяемых на родовые, видовые и типовые Аг. Видоспецифичными Аг стафилококков могут служить тейхоевые кислоты. Для S. aureus видоспецифичным Аг также является белок А.

Резистентность к факторам внешней среды. Стафилококки хорошо переносят высушивание, сохраняя вирулентность; погибают при прямом воздействии солнечного света в течение 10-12 ч., довольно устойчивы к нагреванию— при 70-80 °С погибают за 20-30 мин, при 150 °С — за 10 мин; сухой жар убивает их за 2 ч. Бактерии менее устойчивы к действию дезинфицирующих средств, но резистентны к чистому этанолу.

Роль в патологии

Золотистый стафилококк (S. aureus) вызывает кожные гнойничковые инфекции, раневые инфекции, бактериемию, эндокардиты, пневмонии, остеомиелиты, перитониты, инфекции мочевыводящей системы, пищевые токсикоинфекции, инфекции глаз, инфицирование сосудистых протезов.

S. saprophyticus колонизирует кожные покровы половых органов и слизистую оболочку мочеиспускательного канала. Колонизацию эпителия мочевыводящих путей обусловливают поверхностные рецепторы, а также ферменты патогенности, вызывают циститы, пиелонефриты и эндокардиты.

Факторы патогенности

Адгезины — поверхностные белки, взаимодействующие с различными веществами слизистых оболочек, протеогликанами соединительной ткани, белками внеклеточного матрикса и др.

Капсула защищает бактерии от комплемент-опосредованного поглощения полиморфно-ядерными фагоцитами, способствует адгезии микроорганизмов.

Компоненты клеточной стенки стимулируют развитие воспалительных реакций: усиливают синтез ИЛ-1 макрофагами, активируют систему комплемента и служат мощными хемоаттрактантами для нейтрофилов.

Тейхоевые кислоты активируют систему комплемента по альтернативному пути, свёртывающую и калликреин-кининовую системы, а также облегчают адгезию бактерий к эпителиальным поверхностям.

Белок А неспецифически связывает Fc-фрагменты молекул IgG , активирует систему комплемента по классическому и альтернативному путям, усиливает активность естественных киллеров.

Ферменты

Каталаза разрушает Н₂0₂, защищая бактерии от действия токсических кислородных радикалов.

 - лактамазы разрушают молекулы β-лактамных антибиотиков.

Липазы облегчают адгезию и проникновение в ткани.

Коагулаза вызывает свёртывание плазмы крови, образуется фибриновая плёнка, защищающая микроорганизм.

Ферменты патогенности - гиалуронидаза, дезоксирибонуклеаза, фибринолизин, стафилокиназа, лецитиназа и др.

Токсины

Мембранотоксины (стафилолизины, или гемолизины). Стафилолизины обусловливают гемолитическую активность стафилококков на средах с кровью.

α-токсин имеет наибольшее значение, его часто выявляют у бактерий, выделенных из клинических образцов, взаимодействует с клеточной мембраной, разрушая её.

β-токсин (сфингомиелиназа), холодовой гемолизин.

µ-токсин — двухкомпонентный гемолизин.

δ-токсин — агрегат низкомолекулярных соединений, проявляющих детергентные свойства; последние обусловливают цитотоксичность широкого спектра.

• ЭксфолиатиныАиВ. Эксфолиатины вызывают разрушение эпидермиса и отслойку рогового слоя. Синтез токсина А (термостабильного) контролируют хромосомные, а токсина В (термолабильного) — плазмидные гены.

• Токсин синдрома токсического шока— энтеротоксин F) — экзотоксин, обусловливающий развитие специфического симптомокомплекса. Синтез токсина кодируют гены умеренных фагов.

• Лейкоцидин. Мишени действия токсина — нейтрофилы и макрофаги. Он нарушает водно-электролитный баланс в клетке, повышает внутриклеточное содержание циклического АМФ.

• Энтеротоксины А, В, С, D, Е — термостабильные низкомолекулярные белки. Основные продуценты — бактерии III фагогруппы. Токсины ответственны за развитие пищевых отравлений. Наиболее часто регистрируют интоксикации, вызываемые энтеротоксинами А и D.

Роль в патологии

Бактерии способны поражать практически любые ткани организма человека. Инфекции, вызываемые S. aureus, включают более 100 нозологических форм.

• Внебольничные пневмонии, вызванные S. aureus, регистрируют достаточно редко, но в стационарах этот микроорганизм — второй по значимости возбудитель после синегнойной палочки.

• Стафилококковые бактериемии у госпитализированных больных развиваются при проникновении S. aureus через катетеры, из ран или очагов кожных поражений. Циркуляция возбудителя в кровотоке приводит к развитию метастатических поражений различных органов.

• Золотистый стафилококк — основной возбудитель инфекций опорно-двигательного аппарата (остеомиелиты, артриты и др.); в частности, он вызывает 70-80% септических артритов у подростков, реже у взрослых (особенно страдающих ревматизмом или с протезированными суставами).

• Приблизительно у 10% больных с бактериемией может развиться эндокардит. В результате инфекций придаточных пазух носа, носоглотки, уха и сосцевидного отростка, а также бактериемии возбудитель может проникать в ЦНС и вызывать образование эпидуральных абсцессов и гнойных внутричерепных флебитов.

• Синдром токсического шока — эндотоксиновая инфекция, развивающаяся при заражении штаммами, синтезирующими токсин TSST-1 и энтеротоксины В и С, пищевые отравления.

Микробиологическая диагностика

Бактериологический метод - выделение возбудителя и его идентификация. Посев биоматериала проводят на простые питательные среды, обычно на тиогликолевую среду и кровяной агар. Используют молочно-солевой (или молочно-желточно-солевой) агар и солевой агар с маннитом, на них рост контаминирующей микрофлоры угнетает высокая концентрация NaCl. На молочно-солевом агаре (МСА) хорошо проявляется способность к пигментообразованию и разложению лецитина (лецитовителазная активность), используют дифференциально-диагностическую среду - агар с колистином и налидиксовой кислотой.

Через 18-24 ч S. aureus образует гладкие выпуклые мутные колонии диаметром около 4мм. Бактерии синтезируют жёлтый пигмент, цвет колоний варьирует от белого до оранжевого, на кровяном агаре колонии S. aureus окружены зоной полного гемолиза.

Стафилококки хорошо растут на бульоне, сначала вызывая его равномерное помутнение, на среде с желатином вызывают через 24-28 ч разжижение среды.

Для внутривидовой дифференцировки S. aureus применяют коагулазный тест, cпособность ферментировать маннит в анаэробных условиях, лецитовителазную активность, способность синтезировать ДНКазу, способность агглютинировать сенсибилизированные эритроциты барана.

Для экспресс-идентификации применяют тест латекс-агглютинации с использованием коммерческих наборов частиц латекса, нагруженных антителами к антигенам стафилококков.

Рис. 1

Микробиологическое исследование при стафилококковой инфекции

Гной, раневое отделяемое, экссудат, мокрота, моча и др.

Характер колоний

Мазок,

Лецитиназная активность (ЖСА)

Гемолиз (кровяной агар)

Предварительный ответ

4; —— ——

Бактериоскопическое исследование

Мазок, окраска по методу Грама