Занятие № 15 Тема: Микробиологическик и молекулярно-биологические основы химиотерапии инфекционных заболеваний. Антибиотики. Принцип рациональной антибиотикотерапии

Цель занятия: Ознакомиться с химио- и антибиотикотерапией инфекционных заболеваний. Изучить методы определения чувствительности микробов к антибиотикам: метод дисков и метод серийных разведений. Определить чувствительность золотистого стафилококка к антибиотикам методом дисков.

План занятия

1. Общая характеристика химиопрепаратов.

2. Понятие «антибиотик», основные источники получения антибиотиков. Природные, полусинтетические и синтетические антибиотики.

3. Требования, предъявляемые к антибиотикам, классификация антибиотиков по происхождению, химическому строению, спектру действия.

4. Механизмы действия антибиотиков на микроорганизмы.

5. Лекарственная устойчивость бактерий, механизмы и пути распростронения.

6. Рациональные пути профилактики формирования резистентных штаммов и преодоления сформировавшейся микробной устойчивости.

7. Побочное действие антибиотиков.

8. Методы определения чувствительности микробов к антибиотикам (диско-диффузионный метод, метод серийных разведений, молекулярно-генетическая диагностика).

Задания для самостоятельной работы студентов

Задание №1

Изучить демонстрационный набор препаратов антибиотиков и распределить их в зависимости от механизма действия.

Задание №2

Провести определение чувствительности к антибиотикам методом дисков. Определить по демонстрационным посевам чувствительность микробов к антибиотикам диско-диффузионным методом.

Рис. Определение чувст-виительности к антибио-тикам на агар Мюллер-Хинтон

Для этого на плотных питательных средах сплошным газоном произведен посев изучаемой культуры, на поверхность которой наложены диски с антибиотиками. Результаты оцениваются после суточной инкубации в термостате. Точное измерение диаметра зон торможения роста является чрезвычайно важным при определении чувствительности к антибиотикам с помощью метода дисков. Возможно использование прибора для бесконтактного измерения ( нет необходимости открывать чашку Петри) зоны торможения роста с точностью до 0,1мм за 10сек (рис.)

П ри наличии антибиотикочувствительности вокруг диска есть зона задержки роста не менее 15 мм в диаметре.

Полученные данные занести в таблицу.

Задание №4

Определить чувствительность эпидермального стафилококка к ампициллину методом серийных разведений.

Б

Прибор для автоматичес-кого измерения зон задержки роста бактерий

ыли приготовлены серийные разведения антибиотика в пробирках с МПБ. В каждую пробирку внесено определенное количество стафилококка. После суточной инкубации в термостате определить наличие или отсутствие роста бактерий по степени прозрачности бульона. Определить минимально подавляющую концентрацию (МПК) и рассчитать терапевтическую дозу. Данные внести в таблицу:

Таблица. Схема метода серийных разведений.

№ п/п	Разведение антибиотика	Концентрация антибиотика ЕД/мл	Исследуемая культура, мл	Рост бактерий (помутнение среды)
1	1:100	100	0,1	-
2	1:200	50	0,1	-
3	1:400	25	0,1	-
4	1:800	12,5	0,1	-
5	1:1600	6,25	0,1	+
6	1:3200	3,12	0,1	+
7	1мл бульона без антибиотика (контроль)	-	0,1	+

«+» - рост бактерий, «--« - отсутствие роста

МПК – наименьшая концентрация антибиотика, в присутствии которого угнетается видимый рост микробов. Терапевтическая доза в 2-4 раза выше МПК.

Задание №5

Определение содержания антибиотика в сыворотке крови больного.

Методика: берется два ряда пробирок. В первом ряду разводится исследуемая сыворотка, к которой добавляют среду с глюкозой и индикатором феноловым красным и стандартизованную взвесь стафилококка в концентрации 1000 м.к./ мл для определения наибольшего разведения сыворотки, задерживающее рост тест-микроба. Во втором ряду готовят разведения стандарта антибиотика (ампициллина), к которому добавляют те же ингредиенты, что и в первый ряд с целью определения наименьшей концентрации антибиотика, дающего отсутствие роста стафилококка.

Для установления концентрации антибиотика в сыворотке больного необходимо умножить полученную МПК ампициллина на наибольшее разведение сыворотки, задерживающее рост тест-микроба.