Работа 9 клеточные и ферментные яды

Ключевые слова: Строение фермента, простые и сложные ферменты (активный центр, кофермент, апофермент), принцип работы фермента (фермент, субстрат и продукт, фермент-субстратный комплекс, энергия активации,) классификация ферментов, трансферазы, изомеразы, оксидоредуктазы, каталаза, пероксидаза, клеточные и ферментные яды, компоненты крахмала (амилоза, амилопектин), продукты гидролиза крахмала (декстрин, мальтоза, глюкоза), химическое обнаружение крахмала и продуктов его гидролиза,

ХОД РАБОТЫ

1. Каждому из студентов взять 6 пробирок, налить в них по 2 мл 1% крахмального клейстера и прибавить к нему в одну пробирку кристалл тимола, в другую - 1 каплю толуола, в третью кристалл CuSO₄, в четвертую - на кончике шпателя - салицилат, в пятую - каплю раствора IKI , в последнюю пробирку не добавляют ничего, она служит контролем.

2. Затем в каждую пробирку прибавить 1,0 мл амилазы, встряхнуть содержимое и оставить приблизительно на 40 минут при комнатной температуре. Это время использовать для определения активности каталазы.

3. По истечении указанного времени во все пробирки прилить одинаковое количество (1-3) капель IKI.

Большинство реактивов в этом опыте являются ядами для клеток (толуол, тимол, салицилаты и бензоаты употребляются в лабораторной практике для стерилизации и длительного сохранения стерильности некоторых растворов). Однако эти вещества, отравляя клетки, не затрагивают обычно ферментативную активность, хотя некоторые ферменты инактивируются уже толуолом. Это - клеточные яды. CuSO₄ и IKI - это ферментные яды. Они инактивируют ферменты.

Опишите результаты опыта.

Реактивы и оборудование: раствор амилазы, пробирки, 1% крахмальный клейстер, толуол, бензоаты, тимол, салицилат, раствор IKI, пипетка, градуированная на 1 мл.

9.2. Определение активности каталазы в семенах злаков и листьях элодеи

Процессы окислительного превращения органических веществ в растениях часто приводят к образованию перекиси водорода в качестве побочного продукта. Например гликолатоксидаза катализирует окисление гликолевой кислоты до глиоксилевой в соответствии с уравнением:

НОСН₂СООН + О₂  НОССООН + Н₂О₂

Н₂О₂ в определённых концентрациях ядовита для клеток. Накоплению перекиси водорода препятствует каталаза, фермент, разлагающий Н₂О₂ на воду и молекулярный кислород:

2Н₂О₂  2Н₂О + О₂

Таким образом, существуют ферменты, способные противостоять действию ядов, образующихся в самом организме.

ХОД РАБОТЫ

1. Для работы отобрать 20 проросших семян злаков. Ещё 20 таких же семян опустить в стеклянный стаканчик с кипящей водой на 5 минут.

2. В пробирку помещают 20 штук проросших семян пшеницы, овса или ячменя и вносят 5 мл 3%-ного раствора Н₂О₂. Через некоторое время наблюдают выделение пузырьков газа. Аналогичный опыт ставят с семенами, предварительно убитыми кипячением. Сравнить результаты опытов и объяснить выявленные различия.

3. Каждому студенту на предметное стекло поместить лист элодеи, нанести на него 3-4 капли 3%-ного раствора Н₂О₂ и наблюдать препарат под микроскопом. Повторить опыт с листом, предварительно убитым кипячением и с живым листом, но помещенным в каплю Н₂О. По какому признаку можно судить о наличии в тканях растений активной каталазы?

Реактивы и оборудование: 3%-ный раствор Н₂О₂, вода дистиллированная, штатив с пробирками, предметные и покровные стёкла, микроскоп, стеклянный стаканчик, плитка, пинцет, недавно проросшие семена злаков, свежий побег элодеи.