16 Лабораторная работа

Подсчет количества эритроцитов камерой Горяева

Эритроциты - красные клетки крови. В ветеринарной практике их количество в единице объема крови используется как клинический показатель. Отмечают эритроцитоз (крайне редко) и эритропинию – уменьшение количества как наиболее частую реакцию организма на изменения его состояния.

16.1 Цель работы: с помощью счетной камеры Горяева определить количество эритроцитов в 1 л крови.

16.2 Материалы и оборудование: животные, иглы для взятия крови, камера Горяева, смеситель для эритроцитов, микроскоп, 3 %-ный раствор NaCl, вата, спирт этиловый, йод.

Счетная камера представляет собой толстостенное стекло, в средней части которого имеется четыре поперечных желоба, между ними находятся 3 узкие площадки. Средняя площадка ниже боковых на 0,1 мм и разделена пополам продольным желобом, по обе стороны которого на стекло нанесены сетки Горяева Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов, 25 из них разделены поперечными и продольными линиями на 16 маленьких. Сторона маленького квадрата равняется 1/20 мм, а площадь его - 1/400 мм². Если наложить на боковые площадки покровное стекло, то над сеткой образуется камера глубиной 0,1 мм. Объем пространства над маленьким квадратом будет составлять 1/400 мм² · 1/10 = 1/4000 мм³.

Рисунок 16.1 Счетная камера Горяева. А - вид сверху; Б - вид сбоку; В - сетка Горяева: 1 - маленький квадрат; 2 - большой квадрат.

Под малым увеличением микроскопа рассмотреть счетную сетку камеры.

16.3 Ход работы

Готовят камеру к работе. Для этого протирают покровное стекло, боковые и среднюю площадки камеры ваткой, смоченный водой, а затем для удаления жирных пятен ваткой, смоченный спиртом, в заключение насухо вытирают марлей. На камеру накладывают покровное стекло и большими пальцами плотно притирают его к боковым площадкам до появления радужных колец.

После прокола кожи и вены ушной раковины животного первую каплю крови снимают ваткой. Во вторую каплю погружают кончик смесителя для эритроцитов, который держат горизонтально. Берут в рот стеклянный наконечник соединенный резиновой трубкой с коротким отростком ампулы смесителя и осторожно насасывают кровь в капилляр смесителя до метки 0,5 (или 1,0) без пузырьков воздуха.

Рисунок 16.2 Смеситель крови для подсчета эритроцитов:

1 - капилляр, 2 - ампула, 3 - наконечник.

Приставшую к кончику смесителя кровь осторожно удаляют ваткой. Затем погружают кончик смесителя в 3 % раствор NaCl и насасывают его до метки 101, при этом кровь разбавляется в 200 (или в 100) раз. Снимают резиновую трубку и зажав концы смесителя между большим и средним пальцами тщательно перемешивают содержимое. Выпустив предварительно 2 - 3 капли на ватный тампон, очередную чуть выступившую каплю подносят к краю покровного стекла и средней площадки счетной камеры. В силу капиллярности капля жидкости заполнят камеру.

Заполнив камеру, ставят ее на предметный столик микроскопа и, если эритроциты расположены равномерно над счетной сеткой, приступают к их подсчету. Подсчитывают эритроциты при малом увеличении (окуляр 15х) по диагонали сетки в 5 больших квадратах, каждый из которых разделен на 16 малых (16 · 5 = 80) квадратов. Во избежание двукратного подсчета клеток, лежащих на границе малых квадратов, руководствуются правилом Егорова: "Относящимися к данному квадрату считаются эритроциты, лежащие как внутри квадратика, так и на его левой и верхней границах. Эритроциты, лежащие на правой и нежней границах в данном квадратике не считаются". Подсчитав общую сумму эритроцитов в 5 больших (80 малых) квадратах, вычисляют количество эритроцитов в 1 мм³ по следующей формуле:

где Х - искомое число эритроцитов в 1 мм³ крови, А - число эритроцитов в 5 больших (в 80 малых) квадратах, 200 (или 100) - степень разведения крови, 4000 - фактор пересчета для определения количества эритроцитов в 1 мм³.

Найденное количество эритроцитов переводят в единицы СИ (Международная система единиц), т.е. на 1 л крови, умножая на 10⁶.

Записать результат, сравнить его с нормой и сделать выводы.

Контрольные вопросы

1. Где образуются эритроциты у плода, молодых и взрослых животных?

2. Почему у птиц эритроциты имеют ядро?

3. Укажите основные особенности и функции эритроцитов.

4. Рассчитайте количество эритроцитов в организме коровы с живым весом 400 кг, если в 1 мм³ их 6 млн.

5. Укажите количество эритроцитов в норме в 1 л крови у следующий животных: лошади, крупного рогатого скота, овцы, свиньи, собаки, кролика, курицы.

6. Имеется ли зависимость между объемом эритроцита и величиной животного?

7. Какие факторы влияют на количество эритроцитов в организме?

8. За счет какой энергии происходит функционирование ионных насосов мембраны эритроцитов?

9. Длительность жизни эритроцитов. Где происходит их разрушение?