15 Лабораторная работа

Получение крови у животных, отделение плазмы, сыворотки,

дефибинированная кровь

Кровь является жидкой тканью организма, в которой, как в зеркале, отражается его физиологическое состояние. При нарушениях функций каких-либо органов и тканей, отравлениях, инфекционных заболеваниях, облучении, развитии местных или общих патологических состояний изменяется морфологический и биохимический состав крови. В случае выздоровления картина крови нормализуется. По этой причине различные исследования крови приобрели важное диагностическое значение.

15.1 Цель работы: познакомится с основными правилами взятия крови; получить кровь у разных видов животных изучить соотношение составных частей крови, установить отличия в получении плазмы, сыворотки и дефибринированной крови.

15.2 Приборы, оборудование реактивы: стерильные кровобрательные и инъекционные иглы, скарификаторы, ножницы, спирт этиловый, эфир, 5%-ный спиртовой раствор йода, скальпели, стеклянные колбочки, бусинки из оргстекла, кисточка из тонкой проволоки, пробирки центрифужные, центрифуга, антикоагулянты.

15.3 Ход работы

15.3.1. Небольшое количество крови (для морфологического анализа) у домашних животных получают из ушной вены путем ее надреза или прокола с наружной стороны уха инъекционной иглой или скарификатором. У крыс и мышей кровь получают из хвоста, отрезая его кончик. Предварительно выстригают шерсть и протирают кожу этиловым спиртом и эфиром.

У кур кровь берут из прокола или надреза кожи гребешка или сережек. У гусей и уток делают прокол мякоти ступни. При взятии крови место укола нельзя сжимать и сдавливать, в противном случае в вытекающую кровь попадает тканевая жидкость, влияющая на показания исследования. Не рекомендуется повторное взятие крови из ранее бравшегося места.

Большое количество крови (для получения сыворотки, плазмы, переливания крови) у лошадей, рогатого скота, верблюдов берут пункцией яремной вены на границе верхней и средней трети шеи. Для этого животное фиксируют. Место пункции выстригают и дезинфицируют 5%-ным спиртовым раствором йода. Большим пальцем левой руки сдавливают яремную вену ниже укола, она наполняется кровью, становится заметной в яремном желобе. Пункцию вены производят стерильной кровобрательной иглой. Укол делают под углом 40-45° против тока крови скосом иглы вниз. Если игла введена в просвет сосуда, кровь вытекает струей. Кровь набирают по стенке пробирки. После взятия нужного объема крови вену отпускают, она спадает, а затем извлекают иглу.

У свиней для получения больших порций крови отсекают ножницами или скальпелем отрезок хвоста длиной 1 - 1,5 см, а по окончании кровопускания рану дезинфицируют, а кончик хвоста сдавливают резиновым кольцом или перетягивают бинтом на 1 - 2 сутки. У собак производят пункцию передненаружной плюсневой вены, расположенной на наружной поверхности голени, для чего животное кладут на бок или фиксируют в станке, конечности сдавливают руками или жгутом ниже коленного сустава, иглой прокалывают кожу, а затем стенку вены и кровь насасывают в шприц. Волосяной покров на месте взятия крови выстригают, кожу протирают этиловым спиртом, а затем эфиром. После взятия крови кожную ранку обрабатывают спиртовым раствором йода. Иглу предварительно стерилизуют кипячением и высушивают.

У птиц кровь получают проколом подкожной подкрыльцовой вены, расположенной на внутренней поверхности крыла. Место прокола протирают противосвертывающей жидкостью, т.к. у птиц кровь быстро свертывается.

При проведении хронических опытов, когда кровь из сосудов берут неоднократно, применяется метод ангиостомии Е. С. Лондона и методы катетеризации с помощью нейлоновых или тефлоновых катетеров (А. А. Алиев).

Для предотвращения свертывания крови в нее добавляют антикоагулянт. В качестве антикоагулянта можно использовать порошок лимоннокислого или щавелевокислого натрия (20 - 30 мг на 10 мл крови), фтористый натрий (на 10 мл крови 60 мг), гепарин (100 ед. на 1 мл крови).

Лучше всего применять цитрат в виде 20%-ного или фтористый натрий - 10%-ного растворов.

15.3.2 Получение плазмы. В пробирку вносят антикоагулянт. Набирают в пробирку по стенке 10 мл крови из яремной вены и тщательно перемешивают. Пробирку с кровью центрифугируют в течение 20 - 30 мин при 3000 об./мин. Отмечают послойное разделение крови.

Описать, что собой представляет каждый слой содержимого пробирки.

Получение сыворотки крови. В пробирку без антикоагулянта выпускают 10 мл крови животного и ставят в термостат при 38⁰ С на 2-3 часа. Образуется кровяной сгусток и начинается его стягивание (ретракция). Если края кровяного сгустка прилипли к стенке пробирке, то производят его обводку тонкой стерильной проволокой. Ретракция лучше протекает при 8 – 10⁰ С и длится 12 - 18 ч. Из пробирки с полной ретракцией кровяного сгустка сливают или отсасывают сыворотку.

Сравнить сыворотку с плазмой. Описать, что собой представляет сыворотка и кровяной сгусток.

Получение дефибринированной крови. В стеклянную колбочку кладут 10 - 12 стеклянных бусинок и выпускают в нее из вены животного 20 - 30 мл крови. Взбалтывают кровь вращательными движениями в течение 10 - 15 мин. При вращении нити фибрина наматываются на бусинки. Профильтровывают содержимое колбы через два слоя марли. Фильтрат представляет собой дефибринированную кровь.

Дефибринированную кровь можно так же получить, сбивая кисточкой свежую кровь.

Промыть прилипшие на бусинках нити фибрина в теплой воде. Описать его цвет, консистенцию.

Проанализировать разницу между плазмой, сывороткой и дефибринированной кровью.

Контрольные вопросы

1. Что такое кровь?

2. Какой процент занимает масса крови от массы животного?

3. Перечислите депо крови.

4. Функции крови.

5. Чем объяснить, что для получения большого количества кровь берут не из артерий, а из яремной вены?

6. При какой величине максимальной кровопотери возможно сохранение жизни: 20, 30, 50, или 75 % от общего количества крови животного?

7. Перечислите основные правила при взятии крови.

8. Как получить плазму, сыворотку крови и фибрин?

9. В чем отличие плазмы от сыворотки крови?

10.Механизм действия лимоннокислого натрия и гепарина.

11. Что произойдет с плазмой, если в нее прибавить 5% - ный раствор CaCl2?