11. Способы определения концентрации спермы

Густота – косвенный показатель концентрации, ошибка может составлять 30%.

Концентрация – степень насыщенности спермы половыми клетками. Выражается в млрд/мл. Обозначается Буквой С.

Способы определения концентрации:

1. Определение концентрации с помощью счетных камер (например, Горяева).

2. Определение концентрации с помощью фотоэлектрокалориметра. Принцип: определение разницы величины оптической плотности между исследуемой жидкостью и образцом.

3. Использование фотоэлектрического электрогемометра.

4. Метод стандартов.

Счетные камеры

Зарядка счетной камеры (подготовка её к работе).

Разбавление исследуемой спермы в соответствующем меланжере. Требования к жидкости: она должна вызывать некроспермию, не должна изменять форму половых клеток. Варианты: гипотоническая среда (например, вода), либо 3% раствор NaCl. Меланжер: эритроцитарный и лейкоцитарный. У барана, козла, быка используются эритроцитарные меланжеры, у всех остальных лейкоцитарные. У барана и козла сперму добирают до отметки 0,5, разбавляющую жидкость до отметки 101 (разбавление в 200 раз). У быка сперму набирают до отметки 0,5, жидкость до отметки 101 (разбавление в 100 раз). У остальных сперму набирают до отметки 0,5, разбавляющую жидкость до отметки 11. Разбавление в 20 раз.

Зарядка сеток счетной камеры. Первые 5 капель из меланжера убирают, 6й и 7й каплями заряжают счетную камеру. Не должно быть пузырьков воздуха, должна быть заполнена вся сетка.

Подсчет количества спермиев в сетках счетной камеры. В поле зрения сетки выбирают 5 больших квадратов. В сумму одного большого квадрата включаются те, сперматозоиды, которые попали в правую и верхнюю боковые грани. Используют две сетки. Если сумма спермиев в одной сетке отличается от суммы спермиев в другой сетке отличается больше, чем на 10%, что-то сделано неправильно, и работу прекращают. Вычисляют средний показатель.

Вычисление концентрации с помощью специальной формулы. Для барана, козла: . Для быка. Для остальных С.

Фотоэлектрокалориметр

Включить в сеть. За 15-20 минут до работы, потому что лампы должны прогреться. Устанавливают красные или зеленые светофильтры. Кюветы используют на 10 мм.

Построение градуированной кривой. Она строится на каждое животное 1 раз в месяц. Выполняют разбавление спермы 1:1, 1:2, 1:3,... 1:15. Используют 3,5% раствор цитрата натрия. Определяют концентрацию в каждом из образцов. Полученные числа вписывают в нижнюю горизонталь градуированной кривой. Параллельно с этой работой образцы помещают на кюветодержатель прибора. В качестве образца берут 3,5% раствор цитрата натрия. Исследуют 15 образцов, записывают числа вертикально. Строят кривую. В дальнейшем пользуются ей месяц.

Показатель	Концентрация спермы в млрд/мл, пригодная для разбавления	Активность (подвижность), баллы
Баран	Не менее 1	Не менее 8
Бык	Не менее 0,7	Не менее 8
Хряк	Не менее 0,1	Не менее 7
Жеребец	Не менее 0,15	Не менее 6 баллов
Кобель	0,2
Кот	1,4
Крол	0,2

Стандарты

Для различных видов животных разработаны свои стандарты для определения концентрации спермы. Они представляют собой запаянные с 2 сторон пробирки с жидкостью, имитирующей сперму различной концентрации. В комплект входит также чистая пробирка (без какой-либо жидкости).

Стандарты для быка 400, 600, 800, 1000, 1200 млн./мл. если полученная концентрация больше 1200, сперму разбавляют 1:5 при помощи 3,5% раствора цитрата натрия, полученный показатель умножают на 5.

Для жеребца 10, 50, 100, 200, 300, 500 млн./мл. Если полученная сперма по концентрации бывает больше, чем 500 млн./мл у жеребца, её растворяют 1:1 7% раствором глюкозы, в дальнейшем полученный показатель умножают на 2.

Сравнивают исследуемую сперму с запаянными пробирками.