- •2. Анатомия, физиология и патология половой системы производителей
- •3. Методы получения спермы от производителей
- •4. Сперма с/х животных. Видовые особенности
- •5. Химический состав и физические свойства спермы. Строение спермиев
- •6. Энергетика спермиев. Гликолиз, дыхание, распад атф
- •7. Макроскопическая (санитарная) оценка спермы
- •8. Оценка густоты и активности спермы
- •9. Определение резистентности
- •10. Определение процента живых и мертвых спермиев и их патологических форм
- •11. Способы определения концентрации спермы
- •12. Биологические свойства спермы
- •13. Способы определения изотоничности растворов
- •14. Агглютинация спермиев
- •15. Определение дегидрогеназной активности спермиев
- •16. Состав и виды искусственных сред для разбавления спермы
- •17. Требования к качеству спермы, допускаемой к разбавлению и осеменению самок
- •18. Техника приготовления разбавителей, роль входящих в них компонентов. Методика и степень разбавления спермы
- •19. Разбавители спермы быка
- •20. 21. 22. Разбавители спермы жеребца, хряка, барана
- •23. Биоконтроль разбавителей. Определение абсолютного показателя переживаемости
- •24. Оценка спермы по микробной загрязнённости
- •25. Длительное хранение спермы при температуре -196 ºС в жидком азоте. Теоретические и практические основы замораживания спермы.
- •26. Режимы охлаждения и техника замораживания спермы быка, барана, хряка и жеребца
- •27. Оборудование для замораживания, хранения и транспортировки спермы
- •28. Техника безопасности при работе с сосудами Дьюара
- •29. Порядок оттаивания спермы
- •30. Трансплантация эмбрионов. Значение и основные этапы
- •31. Подбор доноров и реципиентов
- •32. Синхронизация половых циклов
- •33. Суперовуляция
- •34. Извлечение эмбрионов и их культивирование
- •35. Оценка качества эмбрионов
- •36. Пересадка эмбрионов
- •37. Замораживание эмбрионов
- •38. Способы определения оптимального времени для ио самок
- •39. Визо-цервикальное осеменение коров и тёлок
- •40. Мано-цервикальный способ осеменения коров
- •41. Цервикальное осеменение коров и тёлок с ректальной фиксацией шейки матки
- •42. Дозы спермы для осеменения самок разных видов животных
- •43. Организация осеменения овец. Циклический метод
- •44 Организация осеменения кобыл
- •45. Организация осеменения свиней
- •46. 48. Права и обязанности технологов по ио животных. Работа с календарём беременности и по ио животных. Организация работы племпредптиятия
- •47. Стимуляция половой функции у коров, овец, свиней и кобыл
- •49. Анатомия и физиология молочной железы
- •50. Классификация и патогенез мастита
- •51. Дифференциация клинических форм мастита
- •52. Диагностика раздражения вымени и субклинического мастита
- •53. 54. Профилактика мастита. Лечение мастита.
- •60. Акушерско-гинекологическая диспансеризация
- •55-59. Бесплодие и яловость
35. Оценка качества эмбрионов
Оценка качества эмбрионов
Морула (6 день); Ранняя бластоциста (7 день), бластоциста (8-9 дней).
В лаборатории или отдельном помещении ветеринарного пункта температура в пределах 20-25 ̊С. За 3 часа до работы помещение обрабатывают при помощи УФ ламп (1Вт на 1 м3).
После промывания каждого из рогов матки цилиндры тс эмбрионами переносят в стерильный бокс. Осаждение эмбрионов в течение 20 минут. Работу проводят в термостате при температуре 37 ̊С. Верхнюю часть жидкости из сосуда удаляют шприцом, оставляют 60-100 мл. Оставшуюся жидкость с эмбрионами переносят в 2-3 чашки Петри.
Каждый отдельный эмбрион с помощью специального микрошприца переносят в часовое стекло (миниатюрная чашка Петри), для кратковременного хранения используют 1 мл питательной жидкости.
Чтобы оценить целостность морфологических структур, используют микроскоп с увеличением 160-180 или увеличительное стекло. Обращают внимание на форму зиготы (морула, ранняя или поздняя бластоциста), состояние зоны пеллюцида, число блатомеров, равномерность их дробления, выраженность эмбриобласта и трофобласта. Полноценные: шарообразная форма, неповрежденная прозрачная оболочка (зона пеллюцида), одинаковыебластомеры с четкой плазматической оболочкой, светлая гомогенная цитоплазма. Экспресс-метод определения жизнеспособности.
Классификация эмбрионов
Отличные – идеально соответствуют стадиям развития. Округлая форма. Нет видимых нарушений морфологии. зародышевые клетки однородные по цвету.
Хорошие – незначительные отклонения. Неравномерное увеличение 2-3 бластомеров, до 5 клеток мертвые, форма яйцевидная.
Посредственные (сомнительные) – используют, когда возникает дефицит отличных и хороших. Степень их приживаемости не больше 10-12%. Эмбрионы подвержены дегенеративным изменениям, отстают в своем развитии. В зародышевых клетках имеет место просветление зародышевой массы. 20 и более мертвых клеток. Разрастание отдельных бластомеров в 3 и более раз.
Плохие – приживаемость не более 1-3 %. Отстают в развитии, дробление бластомеров заторможено, 50% клеток дегенерировано.
Метод флуоресцентных красителей
Основан на различной степени проницаемости красок через прозрачную оболочку живых и мертвых эмбрионов.
Эмбрион помещают на предметное стекло, добавляют какой-то из красителей (синька Эванса, акридин-оранж, краска FDA, ДАР). Требуется не более 1,5 минут.
Метод культивирования (биологический метод оценки). Основывается на тех изменениях биологических процессов, которые возникают в структурах эмбрионов. Для культивирования применяют различные питательные среды. Самый простой: культивирование в пробирках или соломинках. Эмбрион переносят в пробирку с 1 мл питательной среды + 2-3 мл вазелинового масла (среда Дюльбекко с добавлением 20% фетальной сыворотки теленка).
0,25 мл переносят в соломинку или пробирку, ставят в термостат при температуре 37 ºС в шприце. Эмбрионы в культуре продолжают развитие в 90% случаев. Стельность более 50% на разных стадиях. При работе с эмбрионами шприцы инсулиновые.