- •2. Анатомия, физиология и патология половой системы производителей
- •3. Методы получения спермы от производителей
- •4. Сперма с/х животных. Видовые особенности
- •5. Химический состав и физические свойства спермы. Строение спермиев
- •6. Энергетика спермиев. Гликолиз, дыхание, распад атф
- •7. Макроскопическая (санитарная) оценка спермы
- •8. Оценка густоты и активности спермы
- •9. Определение резистентности
- •10. Определение процента живых и мертвых спермиев и их патологических форм
- •11. Способы определения концентрации спермы
- •12. Биологические свойства спермы
- •13. Способы определения изотоничности растворов
- •14. Агглютинация спермиев
- •15. Определение дегидрогеназной активности спермиев
- •16. Состав и виды искусственных сред для разбавления спермы
- •17. Требования к качеству спермы, допускаемой к разбавлению и осеменению самок
- •18. Техника приготовления разбавителей, роль входящих в них компонентов. Методика и степень разбавления спермы
- •19. Разбавители спермы быка
- •20. 21. 22. Разбавители спермы жеребца, хряка, барана
- •23. Биоконтроль разбавителей. Определение абсолютного показателя переживаемости
- •24. Оценка спермы по микробной загрязнённости
- •25. Длительное хранение спермы при температуре -196 ºС в жидком азоте. Теоретические и практические основы замораживания спермы.
- •26. Режимы охлаждения и техника замораживания спермы быка, барана, хряка и жеребца
- •27. Оборудование для замораживания, хранения и транспортировки спермы
- •28. Техника безопасности при работе с сосудами Дьюара
- •29. Порядок оттаивания спермы
- •30. Трансплантация эмбрионов. Значение и основные этапы
- •31. Подбор доноров и реципиентов
- •32. Синхронизация половых циклов
- •33. Суперовуляция
- •34. Извлечение эмбрионов и их культивирование
- •35. Оценка качества эмбрионов
- •36. Пересадка эмбрионов
- •37. Замораживание эмбрионов
- •38. Способы определения оптимального времени для ио самок
- •39. Визо-цервикальное осеменение коров и тёлок
- •40. Мано-цервикальный способ осеменения коров
- •41. Цервикальное осеменение коров и тёлок с ректальной фиксацией шейки матки
- •42. Дозы спермы для осеменения самок разных видов животных
- •43. Организация осеменения овец. Циклический метод
- •44 Организация осеменения кобыл
- •45. Организация осеменения свиней
- •46. 48. Права и обязанности технологов по ио животных. Работа с календарём беременности и по ио животных. Организация работы племпредптиятия
- •47. Стимуляция половой функции у коров, овец, свиней и кобыл
- •49. Анатомия и физиология молочной железы
- •50. Классификация и патогенез мастита
- •51. Дифференциация клинических форм мастита
- •52. Диагностика раздражения вымени и субклинического мастита
- •53. 54. Профилактика мастита. Лечение мастита.
- •60. Акушерско-гинекологическая диспансеризация
- •55-59. Бесплодие и яловость
26. Режимы охлаждения и техника замораживания спермы быка, барана, хряка и жеребца
Замораживание спермы быка в полипропиленовых соломинках (пайетах). Технология была разработана в 1975 году во Франции ученым Л. Кассу. Соломинки объемом 0,5 мл, диаметр 3мм. Для разбавления спермы быка в настоящее время используют среду ЛГЦЖ (лактозо-глицерино-цитратно-желточная среда). В зависимости от активности и концентрации полученной спермы её разбавляют от 20 до 50 раз, с таким расчетом, чтобы в 1 дозе было не менее 15 млн. половых клеток. После предварительной оценки сперму переливают в смеситель с емкостью 100-200мл и измеряют объем, разбавитель при температуре +25-30ёС небольшими порциями приливают по стеночке, перемешивают. В последующем, прежде чем приступить к фасовке, заполнению соломинок. Прежде чем в специальной машине под действием вакуума происходит заполнение соломинок, концентрация половых клеток должна быть равномерной (магнитные мешалки). Машина маркирует соломинки: название предприятия, кличка быка, инвентарный номер, дата получения спермы, номер серии. Чтобы сперма не вытекла: 1) укупоривание концов с помощью стеклянных шариков; 2) укупоривание с одной стороны пробкой из нетоксического для спермиев волокна, с другой стороны склеивают. После наполнения соломинок между спермой и одним из шариков или пробкой остается воздушный пузырек. Чтобы воспрепятствовать попаданию жидкого азота внутрь соломинок, пузырек перемещают в середину соломинки путем энергичного встряхивания. После чего пайету помещают в штатив и ставят в холодильник при температуре 2-4 ̊С на 3-4 часа. Прием называется «эквилибрация». Замораживают сперму по этой технологии на специальном железном щите в стационарном хранилище в газообразном азоте при температуре -150 ̊С, время – 7 минут. Пайеты выпускаются объемом 0,33 мл и 0,25 мл. одновременно замораживают до 750 соломинок. После замораживания пайеты со спермой перемещают в пластмассовые стаканы, предварительно наполненные жидким азотом. Для сбора соломинок используют специальный собиратель с деревянной ручкой. Хранят замороженную сперму в стационарных хранилищах в пластмассовых стаканах, полностью погруженных в жидкий азот.
Замораживание спермы быка в виде облицованных гранул. Для разбавления спермы используются два устройства. Которые заполняются средой №1 и средой №2. Среда №1 включает 11% раствор сахарозы или лактозы, глицерин, желток куриного яйца, используется при температуре +35 ̊С. Среда №2 – бидистиллированная вода, глицерин, трехзамещенный пятиводный лимоннокислый натрий (цитрат натрия), сахароза или лактоза; используется при комнатной температуре (+20-+24 ̊С). После получения спермы измеряется объем, концентрация, активность. По специальной таблице определяют объем разбавления. Сначала разбавляют 1:1 средой № 1, выдерживают 50 минут при комнатной температуре, затем дополнительно полученный эякулят разбавляют средой №2 до нужной концентрации (15 млн. половых клеток). Фасовка разбавленной спермы в стерильную тонкостенную полимерную трубу диаметром 3,8-4 мм осуществляется через спермоприемник, где были выполнены разбавления. Спермоприемник подсоединяют концу трубки, давят на стенки, по трубке разбавленная сперма выходит в прибор ПРЖ, который протаскивает трубку, производит отсечение гранул (0,25-0,33мл) путем спайки двух поверхностей. В последующем полученные таким способом гранулы собираются в специальный контейнер, который подписывается (предприятия, бык, номер, дата). Затем осуществляется эквилибрация при температуре +2-+5 градусов в течение 4-6 часов и при постоянном вращении барабана с контейнерами (2-10 оборотов в минуту). После эквилибрации сперму замораживают в жидком азоте в течение 8-10 минут. Из этого контейнера сперму забирают в специально подготовленные марлевые мешочки.
Замораживание спермы быка в виде необлицованных гранул на фторопластовой пластине. Порядок работы: используется искусственная среда как при первой технологии(ЛГЦЖ), разбавление осуществляется сразу до нужной концентрации, эквилибрация осуществляется в стеклянном сосуде в течение 3-4 часов при температуре +2-+4 ̊С. С помощью специальной установки сперма фасуется в лунки фторопластовой пластины (либо стерильным шприцом с длинной иглой). Объем гранул 0,5 мл или 0,2 мл. сначала пластина охлаждается в парах жидкого азота, затем погружается втолщу жидкого азота, затем приподнимается, разливается сперма, замораживается 9опускают обратно в жидкий азот на 3-4 минуты), поднимается, гранулы собираются в подписанные полиэтиленовые мешочки.