3 курс / Фармакология / Миронов_А_Н_,_Бунатян_Н_Д_и_др_Руководство_по_проведению_доклинических

нять» действие препаратов на двигательную и исследовательскую активность. По окончании сессии иглы извлекают и животных возвращают в общую клетку.

Заключение о положительно-подкрепляющем эффекте исследуемого соединения основывают на расхождении количества выглядываний (КВ) АМ и КМ. Если за период сессии выработки РВС КВ АМ превышает КВ КМ, то делают заключение о мотивационнопозитивном (положительно-подкрепляющем) эффекте соединения. Если КВ АМ меньше КВ ПМ, то эффект соединения расценивают как «аверсивный» («наказующий»).

2.3.1. Возможности и ограничения метода, его прогностическое значение

Метод отличается высокой чувствительностью и позволяет выявить положительноподкрепляющие свойства не только опиатов, кокаина, амфетамина, но и таких веществ, как этанол, никотин, кофеин и даже растворители (толуол). При этом метод достаточно специфичен, так как вещества, лишенные аддиктивного потенциала (негативный контроль), не способствуют инициации РВС на этой модели. При наличии многоканальной установки метод позволяет провести полноценное исследование зависимости «доза–эф- фект» в течение нескольких рабочих дней. Ограничения метода связаны с невыполнимостью исследования поддержания РВС из-за невозможности проведения более 2–3 повторных венопункций.

2.3.2 Продолжительность эксперимента

Метод может быть отнесен к категории экспресс-методов. Учитывая то, что инициация РВС выявляется в течение 30-минутной экспериментальной сессии, при соответствующем техническом обеспечении (многоканальная установка) в пределах 1–2 дней может быть оценен эффект 6–8 разовых доз исследуемого вещества.

2.3.3. Рекомендации по объему экспериментальных исследований и обработке экспериментальных данных.

Формы представления экспериментальных данных

Группы животных для оценки эффекта каждой разовой дозы (концентрации) исследуемого вещества должны содержать не менее 6–8 пар мышей. Эффект исследуемой разовой дозы вычисляют по разности КВ АМ и КМ за экспериментальную сессию. Данные представляют в форме кривых «разовая доза–эффект». Кривая зависимости «разовая доза–эффект» при инициации РВС имеет характерную для данной модели куполообразную форму с максимальным значением показателя при определенной разовой дозе(ах), характеризующей(их) наиболее активный мотивационный эффект соединений.

3.Лекарственная дифференцировка

3.1.Цели и задачи эксперимента

Целью является оценка дифференцировочных стимульных свойств исследуемого вещества. Для этого животным, предварительно обученным различать интероцептивные эффекты различных аддиктивных веществ, вводят исследуемое вещество и оценивают вероятность поведенческой реакции, характерной для введения «тренировочного» аддиктивного вещества. Основной задачей эксперимента является выявление общих дифференцировочных стимульных свойств исследуемого аддиктивного вещества и аддиктивного вещества сравнения.

3.2. Оборудование, инструменты и реактивы

Выработку и анализ лекарственной дифференцировки проводят в оперантных камерах Скиннера, оборудованных двумя педалями (или двумя отверстиями для регистрации выглядываний) и устройством автоматической подачи пищевых пеллет (или питьевой жидкости — воды или молока).

301

3.3. Описание метода

Изначально крыс (возможно также использование мышей), у которых было ограничено потребление пищи (или воды), обучают нажимать на каждую из двух имеющихся в оперантной камере педалей (или выглядывать в отверстия) для получения пищевых пеллет в соответствии с режимом подкрепления «фиксированное соотношение 10» (ФС 10). После выработки оперантного навыка начинают выработку дифференцировки. Перед началом ежедневной сессии животные получают инъекцию аддиктивного вещества (например, 3,2 мг/кг морфина, 10 мг/кг кокаина5 и т.д.) или его растворителя. Тренировочные сессии с введениями аддиктивного вещества или растворителя чередуют в случайном порядке. Во время тренировочных сессий только одна из двух педалей «активна», т.е. нажатия на нее приводят к получению подкрепления. Для каждой крысы нажатия на одну из педалей подкрепляют после инъекции растворителя, а нажатия на другую педаль — после инъекции «тренировочного» вещества. Экспериментальные сессии отличаются от тренировочных только тем, что во время этих сессий обе педали «активные», т.е. животным предоставляют возможность выбора педали для получения подкрепления. Исследуемое вещество вводят не чаще чем 2 раза в неделю перед началом экспериментальных сессий. Минимальный интервал между последовательными экспериментальными сессиями должен составлять не менее 72 ч (определяется на основании данных о фармакокинетике исследуемого вещества). Тестирование фармакологических агентов проводят только при условии соблюдения следующих критериев во время последних двух тренировочных сессий каждого типа: 1) выбор педали соответствовал инъекции; 2) процент нажатий на «правильную» педаль превышал 90% от общего количества нажатий на обе педали за сессию; 3) общая частота оперантной реакции превышает заранее оговоренный пороговый уровень (например, 0,4 нажатия в секунду).

3.3.1. Возможности и ограничения метода, его прогностическое значение

Метод лекарственной дифференцировки имеет ряд характерных особенностей. Поведение дифференцировки легко вырабатывается и остается стабильным в течение очень длительного периода времени (не менее одного года). Метод позволяет оценивать зависимость эффекта от дозы, которая практически всегда носит очень четкий характер. Стимульные свойства веществ, оцениваемые с помощью этого метода, отличаются высокой степенью специфичности, что сводит до минимума вероятность ложноположительных результатов. Основным недостатком метода является ограниченный набор «тренировочных» веществ, т.е. веществ сравнения. Иными словами, метод может быть мало пригоден для анализа интероцептивных свойств новых веществ, не похожих на уже известные. Однако на данный момент экспериментальных обоснований ограниченного прогностического значения этого метода довольно мало, что определяет его актуальность и востребованность.

3.3.2. Продолжительность эксперимента

Исследования с использованием метода лекарственной дифференцировки подразумевают однократные введения исследуемых веществ. Однако ввиду того, что различные дозы веществ исследуют на одних и тех же животных, а также необходимости ограничивать частоту повторных тестирований, длительность таких экспериментов достигает 4–6 недель (без учета времени, требуемого для выработки дифференцировки и проведения контрольных тестирований).

3.3.3. Рекомендации по объему экспериментальных исследований и обработке экспериментальных данных.

Формы представления экспериментальных данных

На основании данных, полученных во время экспериментальных сессий, рассчитывают количество нажатий на педаль, ассоциированную с введениями тренировочного

5 В соответствии с ФЗ от 08.01.1998 г. № 3-ФЗ (ред. от 03.12.2011) «О наркотических средствах и психотропных веществах».

302

аддиктивного вещества (в процентах), и частоту оперантной реакции (нажатия/сек). Частота реакции является ключевым параметром, подтверждающим корректность выбора диапазона исследуемых доз в том случае, если исследуемое вещество не обладает стимульными свойствами, близкими к таковым у тренировочного вещества. В этих случаях исследуемое вещество следует тестировать до тех пор, пока не будет достигнуты дозы, введение которых значительно снижает частоту оперантной реакции. Хотя требуемый объем исследования устанавливается индивидуально для каждого тестируемого вещества, как правило, должно быть протестировано не менее 3 доз вещества, с наивысшей дозой, превышающей минимальную не менее чем в 10 раз, с использованием как минимум шести животных.

Если после введения исследуемого вещества, животные выбирают поведенческую реакцию (нажатия на определенную педаль), соответствующую введению тренировочного вещества, как минимум в 80% случаев, делают заключение о близости интероцептивных свойств исследуемого и тренировочного веществ. В таких случаях обязателен расчет доз ЭД50 для исследуемого вещества (по методу Литчфильда-Вилкоксона или с помощью пробит-анализа). Анализ зависимостей «доза–эффект» и «время–эффект» проводят с помощью одно- и двухфакторного дисперсионного анализа для повторных измерений. Полное описание полученных результатов может быть представлено как в виде таблиц, так и графиков, отражающих процент нажатий на педаль, ассоциированную с введениями тренировочного аддиктивного вещества, и частоту оперантной реакции после введения каждой дозы исследуемого вещества.

4. Внутривенное самовведение у крыс (поддержание)

4.1. Цели и задачи эксперимента

Традиционно считается, что первым шагом в анализе любой формы лекарственной и нелекарственной зависимости служит изучение первично-подкрепляющих свойств стимулов, наиболее вероятно связанных с формированием и поддержанием зависимости. Для большинства аддиктивных веществ, таких как героин, кокаин, алкоголь, наличие положительных первично-подкрепляющих свойств является необходимым и достаточным условием для формирования устойчивого аддиктивного поведения, о чем свидетельствует большое количество данных, как клинических, так и экспериментальных, полученных на различных видах лабораторных животных (обезьяны, крысы, мыши и др.).

Одной из наиболее используемых процедур, позволяющих обнаружить наличие положительных первично-подкрепляющих свойств, является процедура, при которой оценивается способность исследуемого вещества замещать эталонные аддиктивные соединения (кокаина, морфина, этанола и др.), поддерживая уже прежде выработанную реакцию самовведения.

4.2. Оборудование, инструменты и реактивы

Установка для проведения эксперимента представляет собой стандартные оперантные камеры Скиннера, снабженные двумя педалями или отверстиями для выглядывания. Одна педаль (или отверстие) является «активной», т.е. нажатие (или выглядывание) ведет к инфузии раствора вещества. Вторая педаль (или отверстие) необходима для контроля неспецифической активности животного.

Для инфузий растворов веществ используют микродозаторы с регулируемой скоростью подачи растворов (от долей секунды до 10–20 с) и объемом разовых инфузий (10–400 мкл/кг). Оптимальные параметры (объем инфузии и доза вещества/инфузию) подбираются индивидуально для каждого препарата. Обычно внутривенные инфузии сочетают с предъявлением световых стимулов, сигнализирующих о фармакологическом подкреплении оперантной реакции. В течение периода срабатывания инъектора оперантные реакции фиксируются, но не приводят к активации инъектора. Для обеспечения

303

свободы перемещения животного в оперантной камере применяют шарнирное соединительное устройство, предупреждающее перекручивание соединительных трубок от катетера к инъектору.

4.3. Описание метода

Одним из важных условий выработки внутривенного самовведения веществ служит предварительное обучение животных определенной оперантной реакции (например, нажатиям на педаль или выглядываниям в отверстие) для получения пищевого или водного подкрепления с последующим его замещением на внутривенное введение вещества. Следует отметить, что оперантный ответ типа выглядывания является более естественным для крыс, чем нажатие на педаль, и вырабатывается быстрее. Дополнительным условием самовведения некоторых веществ считается пищевая депривация (точнее ограничение свободного доступа животных к пище вне эксперимента). Например, было показано, что у крыс, получающих пищу ad libitum, не вырабатывается реакция самовведения никотина, тогда как животные в условиях пищевой депривации самовводили никотин.

В рамках данной процедуры крысам (220–270 г), прежде обученным оперантной реакции за получение пищевого (или водного) подкрепления, имплантируют в яремную вену силиконовые катетеры, фиксируя их на спине животных. С целью профилактики послеоперационных осложнений животным назначают антибиотик (в течение 5 дней после операции). Во время ежедневного осмотра имплантированные катетеры промывают 0.05 мл раствора гепарина (20 ЕД/мл). Через 7 дней после операции животных помещают в оперантные камеры и приступают к выработке реакции внутривенного самовведения. Регистрируют количество полученных инфузий, а также количество нажатий на «активную» и «неактивную» педали (или выглядываний в отверстия).

Протокол исследования предусматривает ежедневные экспериментальные сессии, ограниченные во времени (1–3 ч). Обычно период выработки реакции самовведения эталонных аддиктивных соединений занимает 5–8 дней, за которые большинство животных (60–80%) обучаются. В дальнейших исследованиях по поддержанию самовведения при замещении эталонного вещества исследуемым используют только животных со стабильным уровнем потребления эталонного аддиктивного соединения (колебания регистрируемых параметров не более 15% от среднего уровня на протяжении трех последовательных экспериментальных сессий). Тесты замещения исследуемым веществом эталонного аддиктивного вещества обычно проводят в течение 4–5 последовательных дней или так долго, сколько потребуется для угашения прежде выработанной реакции у контрольной группы животных, получающих растворитель вместо исследуемого вещества.

4.3.1. Возможности и ограничения метода, его прогностическое значение

Согласно классическому определению феномена подкрепления, положительные первично-подкрепляющие стимулы характеризуются в первую очередь способностью увеличивать вероятность повторения поведенческой реакции, которая предшествовала их предъявлению. На этом принципе основаны практически все экспериментальные модели самовведения наркотиков, в которых получение наркотика (путем парентеральной инфузии, предъявлением жидкой или твердой формы для орального приема или газообразной формы для ингаляционного введения) следует практически сразу же за выполнением определенной поведенческой реакции (например, нажатия на педаль в экспериментах на крысах или обезьянах). Очевидно, что подобное описание приблизительно соответствует поведению потребления наркотиков человеком в «естественных» условиях. Благодаря этому считается, что модели самовведения обладают максимальной валидностью («внешнее соответствие»), а принцип положительного подкрепления применим к анализу различных форм аддиктивного поведения. Действительно, лабораторные животные, а также люди в условиях эксперимента легко обучаются выполнению заранее заданной поведенческой реакции и поддерживают ее в соответствии с законами поло-

304

жительного подкрепления. Практически все фармакологические агенты, для которых установлен аддиктивный потенциал и которые вызывают лекарственную зависимость у человека (опиаты, психостимуляторы, седативные и снотворные, некоторые галлюциногены, алкоголь и т.д.), самовводятся в условиях эксперимента.

Следует особо отметить, что наличие положительных первично-подкрепляющих свойств неэквивалентно способности вещества вызывать эйфорию или другие эмоции положительной модальности. Единственным более или менее обобщающим свойством всех положительно-подкрепляющих стимулов (включая аддиктивные вещества) является активация мезокортиколимбической системы «награды» мозга, что проявляется, например, повышением высвобождения дофамина в вентральных отделах полосатого тела и снижением порогов электрической самостимуляции мозга.

Временнáя структура самовведения аддиктивного вещества определяется в первую очередь его фармакокинетическими свойствами. Например, период полувыведения никотина у лабораторных крыс составляет около 40 мин, в то время как для кокаина около 10 мин. Поэтому для поддержания определенной концентрации кокаина в плазме крови и мозге требуются более частые инъекции, чем для поддержания стабильной концентрации никотина. Более того, введение никотина запускает процессы десенситизации никотиновых рецепторов, что также увеличивает «рефрактерный» период, отделяющий последовательные реакции самовведения никотина, и определяет такую отличительную черту самовведения никотина, как низкая частота оперантной реакции и, соответственно, получения инъекций никотина. Такое объяснение низкой частоты самовведения никотина полностью согласуется с классическими представлениями о применимости методов самовведения для исследования аддиктивного потенциала веществ только с относительно коротким периодом полувыведения. Например, ранее были неоднократно отмечены трудности выработки самовведения бензодиазепиновых седативных средств с длительным периодом полувыведения. Все это определяет также одно из главных ограничений метода, такое как невозможность сравнительной оценки степени выраженности аддиктивного потенциала различных веществ, так как уровень поддерживаемой аддиктивными веществами реакции в большей степени отражает фармакокинетические особенности их действия.

4.3.2. Продолжительность эксперимента

Общая продолжительность эксперимента для каждого животного составляет около 30 дней.

4.3.3.Рекомендации по объему экспериментальных исследований

иобработке экспериментальных данных.

Формы представления экспериментальных данных

Самовведение обычно поддерживается при использовании определенного диапазона «разовых» доз аддиктивных веществ, кривая зависимости «доза–эффект» имеет куполообразную форму. Восходящая часть этой кривой отражает прогрессивное нарастание и достижение максимальной пороговой дозы вещества, требуемой для активации зон «награды» мозга, в результате чего оперантная реакция подкрепляется. Появление нисходящей части кривой «доза–эффект» имеет несколько объяснений. Считается, что дозы, превышающие пороговую дозу, поддерживающую самовведение, обладают либо неспецифическим действием, препятствующим совершению оперантной реакции, либо вызывают состояние интоксикации, что не позволяет животным выполнять действия с той же частотой, с которой они это делали в «трезвом» состоянии. Если уровень оперантной реакции у животных, самовводящих вещество в исследуемом диапазоне доз, не превышает таковой у контрольной группы, животные которой самовводят растворитель, максимальной исследуемой дозой будет та, при которой уровень оперантного ответа ниже такового у контрольной группы. В таком случае делается вывод о том, что данная

305

доза исследуемого вещества уже достаточно высока для того, чтобы вызвать поведенческий ответ. Иногда уровень оперантной реакции у животных, получающих инфузии растворителя, слишком низок для проведения подобного рода сравнений, тогда при выборе максимальной дозы для исследования ориентируются на появление изменений в поведении, таких как, например, увеличение двигательной активности, или способность вещества оказывать в данной дозе анестезирующее действие.

При обработке данных результаты первой сессии замещения не учитываются, так как уровень оперантной реакции животного еще очень зависим от прежнего уровня реакции, поддерживаемой эталонным аддиктивным веществом. Если количество нажатий на «активную» педаль (выглядываний в «активное» отверстие) и полученных за сессию инфузий раствора исследуемого вещества превышает таковые показатели при замещении эталонного вещества на растворитель исследуемого вещества, то делается вывод о том, что данное исследуемое вещество может обладать первично-подкреплящим действием и, соответственно, аддиктивным потенциалом. С другой стороны, если были проведены тесты замещения на исследуемое вещество в значительном диапазоне доз, ни одна из которых не поддерживала бóльшее количество оперантных реакций, чем растворитель, делается вывод о том, что данное вещество не может служить подкрепляющим агентом и маловероятно, что оно обладает аддиктивным потенциалом.

5. Реакция электрической самостимуляции (РСС) системы «награды» мозга

5.1. Цели и задачи эксперимента

Активация реакции самостимуляции (РСС) при введении аддиктивного вещества является неотъемлемым звеном доказательств единой мишени для электрической (РСС) и фармакологической (исследуемое вещество) стимуляции и рассматривается как экспериментальное доказательство того, что фармакологическое вещество способно активировать эндогенные системы «награды». Существует большое количество модификаций метода электрического самораздражения мозга, основанных как на особенностях оперантного (инструментального) поведения, так и на требованиях, диктуемых необходимостью исследования конкретного фармакологического агента. Несмотря на многообразие экспериментальных подходов, для обычных скрининговых целей при исследовании аддиктивного потенциала фармакологических агентов с помощью РСС наиболее информативным и корректным признано использование методик, позволяющих оценивать возбудимость нервного субстрата системы «награды» по минимальной (пороговой) интенсивности «награждающей» стимуляции, достаточной для поддержания условной инструментальной реакции.

5.2. Оборудование, инструменты и реактивы

Исследования проводят на самцах крыс массой 150–300 г в зависимости от используемого атласа мозга крыс. РСС исследуют в оперантной камере Скиннера, оборудованной как минимум одной педалью (количество педалей зависит от используемой методики). Для РСС необходим источник электрических импульсов (например, стимулятор ЭС-51), который позволяет осуществлять стимуляцию по постоянному току в широком амплитудном и/или частотном диапазоне. Электроды имплантируют по стереотаксическим координатам в медиальный переднемозговой пучок или вентральную тегментальную область (вентральная покрышка) среднего мозга. Имплантация электродов в вентральную тегментальную область рекомендуется в связи с низкой вероятностью возникновения аверсивных реакций при электрическом раздражении этой структуры. Могут использоваться моноили биполярные электроды. Последние предпочтительны из-за более высокой селективности стимуляции. При использовании монополярных электродов устанавливают дополнительный индифферентный электрод в несквозном отверстии в лобной кости.

306

5.3. Описание метода

Через 5–7 дней после операции приступают к выработке и стабилизации РСС при следующих параметрах раздражения: прямоугольные биполярные импульсы частотой 100 Гц, длительность импульса 0,1 мсек, продолжительность серии импульсов 500 мсек, амплитуда импульсов в примерном диапазоне 70–300 мкА для монополярной стимуляции или 10–100 мкА для биполярной стимуляции. Выработка реакции РСС осуществляется с помощью методов «последовательного приближения» к необходимой поведенческой реакции (например, нажатие на педаль). Например, после помещения животного в оперантную камеру последовательно подкрепляют «награждающей» стимуляцией сначала нахождение

вчасти камеры, наиболее близкой к «подкрепляющей» педали затем каждое движение по направлению к педали, исследование педали, касание педали, и т.д. После выработки навыка нажатия на педаль (1–2 сессии), на протяжении 3–4 ежедневных сессий определяют амплитуду стимуляции, которая поддерживает частоту оперантной реакции 40–60 нажатий

вмин. Как правило, при удачной имплантации электродов на выработку и стабилизацию РСС требуется 4–6 экспериментальных сессий длительностью 30–40 мин.

Для анализа подкрепляющих свойств РСС используют процедуру определения пороговой интенсивности электрической стимуляции (по амплитуде или частоте импульсов) с помощью методик аутотитрования или психофизического определения порогов.

5.3.1.Возможности и ограничения метода, его прогностическое значение

Кнастоящему времени практически для всех известных веществ с аддиктивным потенциалом доказана способность активировать РСС. Список изученных аддиктивных средств включает опиаты (морфин, героин), психостимулянты (кокаин, амфетамины), галлюциногены (фенциклидин), барбитураты, бензодиазепины, этанол, никотин и др. Под влиянием фармакологических агентов принципиально возможно несколько вариантов изменения параметров реакции электрической самостимуляции. После введения различных аддиктивных средств наблюдается снижение пороговой интенсивности реакции РСС, что отражает повышение возбудимости нейронального субстрата. В то же время другие параметры реакции РСС, такие как частота самораздражений за экспериментальную сессию, могут как повышаться (психостимулянты, низкие дозы опиатов), так и снижаться (этанол, барбитураты).

Результаты экспериментов по РСС позволяют провести анализ зависимостей «доза– эффект» и «время–эффект» для исследуемых веществ, а также сравнить эффективности веществ в особенности по отношению к эталонным препаратам.

Ввиду того что вживление электродов для исследования РСС производится в строго контролируемых условиях (стереотаксическая методика, гистологическая верификация положения электрода после эксперимента), данная методика позволяет интепретировать эффекты исследуемого вещества как способность активировать нейроанатомический субстрат, общий для всех известных наркотиков.

5.3.2. Продолжительность эксперимента

Исследования с использованием метода РСС подразумевают однократные введения исследуемых веществ. Однако ввиду того, что различные дозы веществ исследуют с помощью одних и тех же животных, а также необходимости ограничивать частоту повторных тестирований, длительность таких экспериментов достигает 4–6 недель (без учета времени, требуемого для выработки РСС и проведения контрольных тестирований).

5.3.3. Рекомендации по объему экспериментальных исследований и обработке экспериментальных данных.

Формы представления экспериментальных данных

Изменение пороговой интенсивности стимуляции под действием фармакологического средства или его растворителя выражают в процентах к значению пороговой интен-

307

сивности, определенной во время первого блока экспериментальной сессии. При расчете среднеэффективных доз фармакологических средств используется такой параметр, как количество животных в группе (в процентах), у которых снижение пороговой интенсивности стимуляции выходит за пределы нижней границы доверительного интервала колебаний пороговой интенсивности в контроле, т.е. после введения индифферентного растворителя. ЭД50 определяют по методу Литчфильда-Вилкоксона или с помощью пробит-анализа. Анализ зависимостей «доза–эффект» и «время–эффект» проводят с помощью одно- и двухфакторного дисперсионного анализа для повторных измерений. Для получения достаточного объема данных для анализа зависимостей «доза–эффект» и «время–эффект» достаточны группы из 5–6 животных (при введении различных доз препаратов по схеме «латинский квадрат»).

6. Интерпретация результатов

Анализ аддиктивного потенциала нового фармакологического вещества целесообразно разделить на три фазы.

В первую фазу главной задачей является определение вероятности аддиктивного потенциала на основании уже имеющихся данных об исследуемом веществе (рецепторные системы, с которым взаимодействует данное вещество; доступность и простота химического синтеза; влияние на различные нейрохимические системы, наличие психотропной активности; предполагаемая область терапевтического применения). Если на данном этапе факторы риска выявлены не были, то дальнейшая исследовательская программа может быть сведена до минимума и включать только экспресс-методы второй фазы. Напротив, наличие факторов риска может потребовать перехода к третьей фазе исследований, минуя вторую фазу.

Во второй фазе целесообразно использовать тесты первичного скрининга, т.е. позволяющие получить максимально быстрый ответ и наиболее простые по выполнению. Этим требованиям удовлетворяет экспресс-метод инициации РВС у мышей. Задачей исследования является получение кривых зависимости «доза–эффект» для 5–6 доз вещества в сравнении с эффектом растворителя и (или) препарата сравнения. Нерастворимость вещества ограничивает возможность использования метода внутривенного самовведения, что может потребовать использования альтернативных методов.

Третья фаза исследований позволяет провести углубленный анализ подкрепляющих (внутривенное самовведение у крыс) и дискриминативных стимульных свойств исследуемого соединения. Оценка влияния вещества на РСС мозга дает также возможность исследовать зависимость «время–эффект» по влиянию вещества на возбудимость нервного субстрата системы «награды».

Следует подчеркнуть, что выявление предикторов потенциала пристрастия во всех тестах позволяет сделать вывод только о подкрепляющем эффекте соединения и его влиянии на мозговой субстрат системы «награды», но не о его непосредственной способности вызывать наркоманию, токсикоманию или психологическую зависимость. Данные нозологические единицы и синдромы являются сложным клиническим феноменом, который формируется в течение достаточно продолжительного времени и при участии не только биологических, но и других, в том числе социальных факторов. Вместе с тем, как показывает клинический опыт, подкрепляющее действие является «общим знаменателем» аддиктивных соединений, и его выявление в эксперименте на животных действительно является предиктором, т.е. позволяет предсказать, что на основе этого подкрепляющего эффекта может сформироваться патологическое влечение к данному веществу.

Заключение

Методические рекомендации предлагают эффективную и технологически простую программу доклинических экспериментальных исследований для оценки аддиктивного потенциала (потенциала пристрастия) фармакологических средств. Программа вклю-

308

ГЛАВА 19

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИЗУЧЕНИЮ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ АЛКОГОЛИЗМА

Составители: академик РАМН И.П. Анохина; к. б. н. Л.Г. Колик

Введение

Алкоголизм — заболевание, характеризующееся комплексом взаимосвязанных проявлений, обусловленных хроническим действием этанола, которому присуща стадийность нарастания разнородных по своим механизмам патофизиологических процессов.

По современным научным представлениям, воздействие этанола у млекопитающих приводит к однотипным реакциям как в ЦНС на уровне нейрохимических, гормональных и ферментативных процессов, так и в других органах и системах.

Общие биологические закономерности влияния этанола на человека и животных обосновывают экспериментальное моделирование состояний алкоголизма. Соответственно, эти модели могут рассматриваться в качестве адекватных для поиска потенциальных средств лечения алкоголизма и экстраполяции полученных данных на человека.

В настоящее время лечебные мероприятия при состояниях, связанных с острой алкогольной интоксикацией и абстиненцией, направлены на нормализацию водно-солевого равновесия, на проведение дезинтоксикационных процедур, применяются дегидратационные средства, спазмолитики, стандартные психостимуляторы и аналептики, гепатопротекторы, стимуляторы внутриклеточного катаболизма этанола — ноотропы и ряд других психотропных средств. Данная терапия в полном обьеме проводится преимущественно в клинических условиях и не всегда является достаточно продуктивной.

Для ослабления алкогольной мотивации используют дисульфирам (ингибитор АЛДГ), предотвращающий появление «алкогольных срывов», налтрексон (конкурентный антагонист опиоидных рецепторов), снижающий потребление алкоголя у больных алкоголизмом, акампросат (частичный агонист NMDA-рецепторов и антагонист mGluR5), способствующий длительной ремиссии [1]. Существующие препараты во многих случаях оказываются недостаточно эффективными и/или вызывают множество нежелательных побочных эффектов. Поиск новых эффективных средств, влияющих на основное патогенетическое звено алкоголизма — влечение к этанолу — остается актуальной задачей фармакологии.

1.Общие положения

1.1.Цели и задачи исследования

Основной целью исследования является выявление и оценка спектра специфической активности новых веществ, перспективных для лечения алкоголизма.

Продуктивность поиска новых фармакологических средств для воздействия на патологические процессы при остром и хроническом действии алкоголя определяется степенью изученности молекулярных механизмов действия алкоголя с учетом возможных фенотипических различий, выбором химических соединений для фармакологических исследований и оптимизацией схемы исследований, позволяющей проводить широкий

310