Лекция 24.

ЭКСПЕРТНЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ ИССЛЕДОВАНИЯ ВЕЩЕСТВЕННЫХ ДОКАЗАТЕЛЬСТВ БИОЛОГИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ И МЕТОДОМ ГЕНОТИПИРОВАНИЯ ТКАНЕЙ

1. Возможности исследования вещественных доказательств биологическими методами

Цель биологического исследования вещественных доказательств заключается в установлении наличия на них различных биологичес-

ких объектов, происходящих от человека, установление их группо-

вой и половой принадлежности, возможности происхождения от конк-

ретного лица. Современная судебная биология располагает большим набором высоко чувствительных биохимических, биофизических и се-

рологических методов для решения поставленных следствием задач.

Кровь. Для установления наличия крови используются микрос-

пектральные, хроматографические и люминесцентные методы (после-

пленке, реакция иммунофлюоресценции). Последний метод позволяет установить видовую принадлежность крови, белков в разведении

1:10-8. С применением этого метода стало возможным устанавливать видовую принадлежность крови на выстиранных вещественных доказа-

тельствах, где обнаруживаются ничтожные следы крови.

После этапа определения видовой принадлежности следует оп-

ределение групповой принадлежности крови по системе АВО. При совпадении крови потерпевших и подозреваемых по системе АВО, до-

полнительно проводится дифференцирование пятен крови по другим эритроцитарным системам и сывороточным системам: MN, P, Нр, Gм, Le, D. В тех случаях, когда подэкспертные лица оказываются раз-

ногруппными по какой-либо системе, становится возможным выска-

заться о происхождении крови от одного и исключить ее принадлеж-

ность другому. Если преступник и потерпевший разного пола, то

556

есть дополнительная возможность конкретизировать происхождение крови: от мужчины или женщины, проведя цитологическое исследова-

ние и обнаружив полоспецифические признаки в клетках крови спе-

циальными окрасками. Следует отметить, что этот вид исследования в некоторых случаях позволяет установить региональную принадлеж-

ность крови, то есть из какого органа происходит кровь. Как пра-

вило, это редкие случаи исследования орудий травм (ножи, топоры,

металлические трубы), где обнаруживаются клетки каких-либо внут-

ренних органов: лёгкого, печени, мозга и др.

Нередко начинающие следователи задают вопросы о региональ-

ном происхождении крови, подразумевая её происхождение из руки или ноги, головы или спины. Это неверно, так как вся перифери-

ческая кровь одинакова, в ней нет никаких специфических клеточых элементов. Теоретически правомерен вопрос о носовом кровотече-

нии, но на практике клетки эпителия носа выявляются крайне редко

(могут не встретиться эксперту за 10-15 лет его деятельности).

Часто следователей интересует вопрос о давности следов кро-

ви. До недавнего времени не существовало достоверных методик для решения этого вопроса. В 90-х годах Туребаевым был предложен комплекс методик, которые в своей совокупности позволяет решать и вопрос о давности образования следов крови. Практическое апро-

бирование этих методик показало, что при наличии необходимого оборудования такие исследования могут проводиться.

С помощью серологических методов исследования можно, в не-

обходимых случаях, дифференцировать кровь плода, новорожденного от крови взрослого человека, а также кровь беременной женщины от небеременной. Такие исследования необходимы в случаях детоубийс-

тва, криминальных абортов, убийства беременной женщины.

Еще совсем недавно значительное место в биологических исс-

ледованиях занимали экспертизы спорного отцовства, что составля-

ло до 10% всех выполненных экспертиз. В настоящее время этот процент снизился до 0,2%. По данному виду экспертиз проводятся исследования крови по 9 системам и устанавливается категория вы-

делительства по слюне. Для большей достоверности таких экспертиз используют метод генетико-статистического анализа. Учитывая час-

тоту встречаемости одинаковых групп крови у разных лиц, вероят-

ность исключения по системам составляет от 1,99% до 45%. В про-

557

веденных нами экспертизах вероятность исключения ложноуказанного отца составляла от 50% до 99,99% при наличии в крови редких фак-

условиях изымаются образцы крови, слюны, волос, а иногда и спер-

мы. Производится исследование крови из трупов. Но в некоторых случаях получить кровь из трупа невозможно из-за далеко зашедших гнилостных изменений. В таких случаях экспертам приходится исс-

ледовать любой наиболее сохранившийся трупный материал. Это мо-

гут быть участки мышц, ногти, кости, волосы и даже гистологичес-

кие препараты. По таким материалам, применяя высокочувствитель-

ные методы, можно установить групповую принадлежность трупа только по системе АВО.

Выделения. Большую часть такого рода исследований составля-

ют экспертизы и исследования по изнасилованиям. Наличие спермы устанавливают микроскопически морфологическим методом. Спермато-

зоиды человека имеют характерное строение, что делает ненужным определение их видовой принадлежности, за исключением тех случа-

ев, когда обнаруживается что-то нетипичное. Примером может пос-

лужить экспертиза, когда в качестве вещественного доказательства был представлен матрац с чердака. Заостренная форма головок сперматозоидов вызвала сомнение, было произведено исследование по определению видовой принадлежности белка и выявлен белок кош-

ки.

Для установления наличия спермы при азооспермии, олигоспер-

мии существуют: хроматографический метод определения холина спермина аминокислот (который на практике постепенно перестал применяться из-за трудоёмкости); картофельная проба на тестосте-

рон; определение кислой фосфатазы спермы электрофоретическим ме-

тодом, являющимся наиболее достоверным.

Основную информацию дает установление наличия спермы на ве-

щах потерпевших и предметах, изъятых с места происшествия, что может подтвердить показания той или иной стороны. Например, об-

наружение сперматозоидов в доставленных с места происшествия

558

рвотных массах и на свитере потерпевшей явилось свидетельством возможности совершения полового акта в рот и полностью подтвер-

дило показания потерпевших.

Групповую принадлежность спермы, также как и крови, уста-

навливают количественной реакцией абсорбции агглютининов и реак-

цией абсорбции-элюции. Кроме этого, групповую принадлежность спермы можно более конкретно определять реакцией иммунофлюорес-

ценции (РИФ), которая позволяет устанавливать группу в самих сперматозоидах. С помощью этого исследования можно категорично высказываться о группе спермы в объектах, смешанных с кровью,

слюной, влагалищным секретом, калом. Нередко в экспертизах по половым преступлениям биолог встречается с находками, когда из-

начальная фабула упускает момент полового преступления. Так, в

одном случае убийства, в следах крови на очках, в другом случае

-в заднем кармане джинсов (на внутренней поверхности) при ци-

тологическом исследовании были неожиданно найдены сперматозоиды.

РИФ позволила определить их групповую принадлежность и следствие получило дополнительную информацию для поиска преступника.

Слюна. Исследование слюны на объектах, доставленных с мест происшествия: окурках, жевательной резинке, кусочках бумаги,

изъятых с глазков дверей, - также дает следствию доказательную объективную информацию для поиска подозреваемого лица конкретной группы.

Следы слюны в смывах с полового члена могут подтведить из-

насилование в рот. Наличие слюны в объектах, где предполагается ее присутствие, устанавливается реакцией на амилазу в растворе крахмала. Групповая принадлежность устанавливается методами,

указанными выше.

Пот. Исследования этого выделения имеют смысл только в тех случаях, когда необходимо установить принадлежность предмета одежды конкретному лицу (рубашки, шапки).Исследование отпечатков пальцев и ладоней рук, а также предметов, к которым они прикаса-

лись, нецелесообразно, потому, что проведенные исследования до-

казали: наряду со свойственным владельцу отпечатка антигеном вы-

является "чужой", не присущий этому человеку антиген (от 13,3%

559

Полученные результаты подтверждают и дополняют существующие в литературе данные о возможности привнесения чужого антигена на кожу рук. Обнаружение чужого антигена может быть обусловлено и неспецифическим действием кремов и других веществ. Вследствие чего, возможно получение ложноположительных результатов, что приводит к неправильным выводам и получению судебно-следственны-

ми органами ложной информации.

При проведении экспертиз по пото-жировым выделениям, нали-

чие их определяется методом тонкослойной хроматографии - по вы-

явлению аминокислоты серина. Групповая принадлежность устанавли-

вается ранее изложенными методами.

Моча. В судебно-медицинской практике иногда встречается не-

обходимость в установлении наличия и групповой принадлежности мочи и её следов.

Объектом экспертизы может служить как жидкость, в которой подозревают наличие мочи, так и следы на вещественных доказа-

тельствах. Поводы для исследования мочи могут быть различны: бы-

товые конфликты (когда возникает необходимость искать мочу в пи-

ще, кухонной посуде и проч.), половые преступления (исследуются пятна на одежде) и др.

Кроме того, исследования мочи и её следов используют в су-

дебно-медицинской практике для установления наличия беременнос-

ти или принадлежности мочи беременной женщине. Последний вопрос может возникнуть, например, в связи с делами о криминальных абортах. Исследование основано на выявлении гормона - хорионго-

надотропина, вырабатываемого ворсинками плодной оболочки (а в последствии плацентой). Он постоянно присутствует в крови и моче беременных женщин. Начиная с 5-9 дня беременности хорионгонадот-

ропинный гормон сохраняется в моче женщины в течение 3-6 суток после аборта и в течение 1-3 суток - после родов.

Видовую принадлежность мочи установить сложно - для этого необходим белок. Наличие же белка в моче, как известно, бывает лишь при заболевании почек.

Наличие мочи устанавливается методом тонкослойной хроматог-

560

рафии путём выявления креатинина. В нормальной моче он содержит-

ся в довольно значительной концентрации (около 0,1%). Опыт про-

ведения исследований и оценки получаемых результатов позволяет расценивать креатинин, как специфическую составную часть мочи.

Её групповая принадлежность устанавливается аналогично предыду-

щим объектам.

Кал. Косвенное подтверждение показаний подследственных име-

ет обнаружение элементов кала в мазках-отпечатках и смывах с по-

лового члена. Это может указывать на возможность совершения по-

лового акта в прямую кишку. Элементы кала выявляются при цитоло-

гическом исследовании.

Волосы. Экспертиза волос отвечает на следующие вопросы следствия: являются ли присланные объекты волосами; какова их видовая принадлежность (от человека или животного); региональное происхождение (с лица, головы, тела, конечностей); механизм от-

деления (вырваны волосы или выпали, отделены каким-либо предме-

том); наличие повреждений волос; подвергались ли они окраске,

завивке; имеются ли признаки заболеваний волос; могут ли они произойти от определенного лица (сходство); какова их групповая принадлежность.

Эти исследования проводят морфологическим методом с помощью микроскопа. С целью определения принадлежности волос животному или человеку сначала делаются их отпечатки, а затем изучаются особенности рисунка кутикулы. Групповая принадлежность волос ус-

танавливается реакцией абсорбции-элюции. Для определения плот-

ности, электрической сопротивляемости и др. свойств волос разра-

ботан и успешно применяется ряд физико-химических методов иссле-

дования. Региональная принадлежность волос устанавливается по результатам изучения их поперечных срезов.

Цитологическое исследование. Значительную долю в биологи-

ческих исследованиях составляют цитологические методы изучения вещественных доказательств на клеточном уровне. Они позволяют ответить на вопрос не только о половой принадлежности крови,

слюны, волос, но и установить региональную природу клеток, а

561

также их групповую принадлежность. Кроме этих вопросов, цитоло-

гические методы позволяют определить половую зрелость потерпев-

шей, давность происшедших родов, абортов. Обнаружение в пятнах крови клеток влагалищного эпителия может свидетельствовать о

кровотечении из половых органов, клеток децидуального слоя матки

- о менструальном происхождении крови.

При половых преступлениях бывает важно определить вариант изнасилования. В этих случаях цитолог отвечает на вопросы о на-

личии в следах и мазках влагалищного, буккального или прямоки-

шечного эпителия. Для ответов на эти вопросы применяются цитохи-

мические методы.

Примером может служить следующая экспертиза: на стройке ве-

чером была изнасилована женщина. С места происшествия доставлен

носовой платок, который принадлежал преступнику. Им женщина вы-

тирала слёзы. Следствие интересовал вопрос о наличии следов слёз

платке женские эпителиальные клетки, которые с помощью цитохими-

ческого метода были диагносцированы как клетки буккального эпи-

телия, а при установлении групповой принадлежности совпадали по группе с потерпевшей (групповая принадлежность изолированных клеток определяется реакцией смешанной агглютинации). Эта инфор-

мация дала возможность следователю установить, что имело место изнасилование в рот, а платком потерпевшая вытирала слюну.

Следует упомянуть об использовании в последние годы иммуно-

ферментного анализа в судебно-медицинской биологии - при иссле-

довании жидкой крови на наличие инфекций: СПИД, вирусов гепати-

тов.

Всё вышесказанное показывает, какую важную роль судебно-би-

ологическая экспертиза занимает в расследовании уголовных дел.

Возможности такой экспертизы многогранны, а, исследования, по-

рой, дают неожиданные результаты, не вытекающие из имеющихся на момент экспертизы обстоятельств дела. Это даёт следствию допол-

нительную информацию, способствующую розыску преступников.

562

2. Возможности исследования вещественных доказательств

методом генотипирования тканей.

Современный уровень знаний о молекулярной биологии и, в

частности, о ДНК, обусловлен теоретическими и экспериментальными достижениями в трех фундаментальных областях науки: классической генетике, биохимии и молекулярной физике.

ДНК, как сложное химическое соединение, была открыта в ядре

клетки еще в 1869 г., но её генетическая функция, как хранителя наследственной информации, оставалась неизвестной. И только с

1953 г., когда Уотсон и Крик постулировали для ДНК двухспираль-

ную структуру ее 3-х мерную модель, появилась и стала бурно раз-

виваться новая самостоятельная наука - молекулярная биология.

Её возникновение, по значимости, сравнимо с возникновением

ядерной физики, т.к. появились способы познания природы на суб-

молекулярном уровне. Несмотря на свою "молодость", молекулярная

биология занимает уже почетное место во многих областях естест-

вознания. Ее методы применяются в вирусологии, микробиологии,

селекции животных и, конечно, в медицине, в том числе и в судеб-

ной медицине.

В начале 80-х годов в геноме человека были обнаружены пос-

ледовательности ДНК, обладающие структурным полиморфизмом. Эти участки ДНК содержат набор сравнительно коротких (от 11 до 70

пар нуклеотидов) тандемно повторенных нуклеотидных блоков, число которых уникально для каждого человека. Такие участки генома бы-

ваний разработан метод генной идентификации личности, в последс-

563

твии названный им ДНК-фингерпринтом (анг. finqerprint -- отпеча-

ток пальца) или генной "дактилоскопией". Но, в отличие от "отпе-

чатка пальца" в понятии криминалистическом, метод ДНК-фингерп-

ринта (отпечатка ДНК) позволяет не только установить личность.

Джеффрис обратил внимание на свойства ВТП, которые позволили ис-

пользовать эти последовательности в судебной медицине:

1. Прямое наследование ВТП по законам Менделя - использует-

ся для установления кровного родства.

2. Соматическая стабильность (абсолютное тождество ВТП во всех клетках одного и того же человека) - используется при ус-

тановлении принадлежности частей тела одному трупу.

3. Уникальность ВТП используется для идентификации личнос-

ти, т.к. практически невозможно встретить двух человек, кроме монозиготных близнецов, имеющих одинаковый генотип.

Благодаря своей точности метод сразу приобрел сенсационный успех и, несмотря на свою трудоемкость, был быстро внедрен в судебно-медицинскую практику. Уже в 1987 г. британский суд впер-

вые принял генетическую экспертизу в качестве доказательства при установлении спорного отцовства. В том же году рассматривалось уголовное дело по изнасилованию и убийству двух девушек, где экспертом выступал сам А.Джеффрис.

В 1988 г. в США (Штат Колорадо) принят закон о ДНК-тестиро-

вании рецидивистов и сексуальных маньяков перед освобождением из тюрьмы.

Внашей стране внедрение этого метода велось с 1988 г. на базе НИИ молекулярной биологии в Москве. Первая экспертиза по уголовному делу была проведена уже в 1989 г.

В1990 г. метод был внедрен в практику Бюро судебно-меди-

цинской экспертизы Ленинграда.

Почти одновременно подобные работы были начаты в Новоси-

бирске, Минске, Вильнюсе. В настоящее время для судебно-медицин-

ких целей генетический метод применяется в 8-10 лабораториях различных регионов России.

Ранее типирование ВТП было основано на использовании

ДНК-ДНК гибридизации со специфическим радиоактивным, меченым изотопом 32P, а позднее - нерадиоактивным, меченым биотином или дигоксигенином, зондом. Эта методика была трудоемкой, т.к. сос-

564

тояла более чем из десяти этапов:

1.Выделение ДНК.

2.Определение количества и качества полученной ДНК с по-

мощью спектрофотометрии и электрофореза в геле агарозы.

3.Гидролиз ДНК эндонуклеазами рестрикции, в результате че-

го образуется сумма индивидуальных фрагментов различной длины.

4.Разделение этих фрагментов ДНК в геле агарозы с помощью электрофореза.

5.Окрашивание разделенных фрагментов ДНК бромистым этидием и фотографирование в УФ-лучах.

6.Перенос фрагментов ДНК из геля на капроновую мембрану,

т.н. блотинг ДНК.

7.Приготовление специфического ДНК-зонда (генная инжене-

рия).

8.Радиоактивное или нерадиоактивное мечение полученного зонда в реакции мультипраймирования или ник-трансляции.

9.Гибридизация фрагментов ДНК на мембране с этим меченным зондом.

10.Выявление гибридов с помощью авторадиографии на рентге-

новской пленке или с помощью иммунологических реакций.

11.Анализ результатов.

Недостатки метода ДНК-фингерпринта.

1. Одним из недостатков метода ДНК-фингерпринта является необходимость в сравнительно большом количестве биоматериала.

Трупные ткани - около 1 г, жидкая кровь - около 5 мл. Пятна кро-

ви или спермы - диаметр пятна не менее 3 см.

2. Высокие требования к сохранности ДНК в биоматериала.

Из-за своей морфологии, а это - длинная и тонкая нить, молекула ДНК столь хрупка, что даже при выделении ее из ядер клеток она легко разрушается. Но разрывы ДНК возникают не только под воз-

действием механических факторов, но и под воздействием химичес-

ких факторов - кислоты, щелочи; физических факторов - нагрева-

ние, действие прямых солнечных лучей; биологических факторов -

действие различных ферментов, бактерий, плесневых грибов, а так же ферментов, образующихся в результате гниения самих биообъек-

тов.

3. Сроки давности следов так же имеют существенное значе-

ние. Правда, устойчивость ДНК во внешней среде трудно ограничить строгими временными рамками. Она определяется составом биологи-

ческого субстрата, с которым соприкасается. Имеет значение и ха-

рактер предмета-носителя (синтетические ткани, джинсовая ткань),

скорость высушивания пятна, воздействие факторов внешней среды

565

Таблица 24.2

Алгоритм выполнения экспертизы по идентификации личности генетическими методами

Установленные наличия крови,

спермы

571

Таблица 24.3

Алгоритм исследование тампонов со спермой генетическими методами

Вагинальные (ректальные) тампоны

572