- •Раздел 3. Частная вирусология
- •Тема 3.1. Микробиологическая диагностика стафило- и стрептокок-
- •Тема 3.2. Микробиологическая диагностика рожи свиней и листериоза. 149
- •Введение
- •Требования к уровню освоения дициплины
- •Раздел 1. Общая микробиология
- •Устройство бактериологической лаборатории
- •Устройство микроскопа
- •Правила работы с микроскопом
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.2. Основные формы бактерий. Бактериологические краски. Приго-
- •Формы бактерий
- •Бактериологические краски
- •Техника приготовлениябактериологических препаратов (мазков)
- •Методы фиксации мазков:
- •Простые методы окраски бактерий
- •Сложные методы окраски
- •Окраска по Граму
- •Окраска по Циль-Нильсену
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.3. Окраска спор, капсул бактерий, методы определения подвижно- сти бактерий.
- •Метод Пешкова:
- •Метод Виртца:
- •Ные капсулы.
- •Метод Михина:
- •Метод Ольта:
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.4. Изучение морфологии грибов и актиномицетов.
- •Классификация
- •Тофтора).
- •Культивирование грибов
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.5. Лабораторная аппаратура. Методы стерилизации.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.6.Приготовление питательных сред.
- •Классификация питательных сред
- •По назначению:
- •Специальные питательные среды
- •Методы создания анаэробных условий
- •Дифференциально-диагностические среды
- •Висмут-сульфит агар (среда Вильсон-Блера).
- •Среды накопления (обогащения)
- •Синтетические среды
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.7.Посев и культивирование микроорганизмов. Методы выделения чистых культур микробов.
- •Техника посева на поверхность плотной питательной среды в чашках Петри
- •Техника посева на скошенный агар
- •Техника посева на жидкую
- •Техника пересевов культур микробов
- •Ной среды на другую.
- •Методы механического разделения микробов
- •Методы использования биологических особенностей микроорганизмов
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.8.Изучение культуральных и биохимических (ферментативных)
- •Определение протеолитических ферментов
- •Определение сахаролитических свойств микробов
- •Определение окислительно-восстановительных ферментов
- •Определение редуцирующих свойств
- •Определение гемолитических свойств
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.9.Изучение действия антибиотиков,антисептиков и бактерио-
- •Метод диффузии антибиотиков в агар с применением дисков
- •Метод серийных разведений антибиотика
- •Контрольные вопросы:
- •Способы заражения лабораторных животных
- •Вскрытие трупов лабораторных животных
- •Определение токсигенности микробов
- •Определение токсичности микробов
- •Методы лабораторных исследований
- •Отбор патматериала
- •Принципы организации и оборудование бактериологических лабораторий
- •Правила взятия, консервирования и транспортировки патологического материала
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.11.Санитарно-бактериологическое исследование воды.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.12.Санитарно-бактериологическое исследование воздуха и почвы.
- •Санитарно-микробиологическое исследование почвы
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.13.Изучение микрофлоры кормов. Коллоквиум №1 «Общая микро-
- •Контрольные вопросы:
- •Раздел 2. Инфекция и иммунитет Тема 2.1.Серологические реакции. Реакция агглютинации (ра).
- •Метод ра.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 2.2.Реакция преципитации (рп).
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 2.3.Реакция связывания комплемента (рск).
- •Компоненты реакции:
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 2.4.Реакция нейтрализации (рн), метод флуоресцирующих антител
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 2.5.Биопрепараты. Коллоквиум № 2 «Серологические реакции в мик- робиологии».
- •Лиофилизация микроорганизмов
- •Правила использования и хранения биопрепаратов, их транспортировка
- •Контрольные вопросы:
- •Раздел 3. Частнаямикробиология Тема 3.1.Микробиологическая диагностика стафило- и стрептококкозов
- •Стафилококки.
- •Специфическая терапия и профилактика.
- •Стрептококкоза молодняка.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.2.Микробиологическая диагностика рожи свиней и листериоза Цель занятия: ознакомить студентов с возбудителями рожи свиней и листе-
- •Содержание:
- •Слева: гладкие s-формы (колонии возбудителя на пита- тельной среде и мазок под микроскопом); Справа: шероховатые r-формы (колонии возбудителя на питательной среде и мазок под микроскопом).
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.3.Микробиологическая диагностика сибирской язвы.
- •Ная» дорожка.
- •Специфическая профилактика.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.4.Микробиологическая диагностика клостридиозов.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.5. Микробиологическая диагностика некробактериоза и копытной гнили овец.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.6. Коллоквиум № 3 «Грамположительные микроорганизмы». Цель занятия: выявить у студентов остаточные знания по пройденному ма-
- •Содержание:
- •Тема 3.7. Микробиологическая диагностика туберкулеза.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.8. Микробиологическая диагностика паратуберкулеза.
- •Тема 3.9. Микробиологическая диагностика эшерихиозов и сальмонелле-
- •Мпа; 2. Среда Эндо; 3. Среда Левина; 4. Среда Плоскирева.
- •Специфическая профилактика.
- •Специфическая профилактика.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.10. Микробиологическая диагностика бруцеллеза и туляремии.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.11.Микробиологическая диагностика пастереллеза и гемофилезов свиней.
- •Специфическая терапия.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.12. Микробиологическая диагностика сапа лошадей и мелиоидоза.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.13. Коллоквиум № 4 «Грамотрицательные микроорганизмы». Цель занятия: выявить у студентов остаточные знания по пройденному ма-
- •Содержание:
- •Тема 3.14. Микробиологическая диагностика лептоспироза и кампило-
- •Вакцины импортные для собак:
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.15. Патогенные микоплазмы.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.16. Хламидии, риккетсии.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.17. Лабораторная диагностика микозов.
- •Лабораторная диагностика, специфическая терапия и профилактика.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.18. Лабораторная диагностика микотоксикозов.
- •Контрольные вопросы:
- •Форма промежуточного контроля знаний студентов
- •Список рекомендованной литературы
- •Дополнительная литература
- •Периодические издания
- •Перечень ресурсов информационно-телекоммуникационной сети «Интернет»
Метод Пешкова:
Мазок фиксируют, красят метиленовой синькой с подогреванием до кипе- ния, смывают.
Докрашивают 1 % водным раствором фуксина Пфейффера в течение 10 се- кунд, смывают, высушивают.
В результате споры окрашиваются в синий цвет, а бактериальные клетки – в красный.
Метод Виртца:
На фиксированный мазок помещают фильтровальную бумагу, смачивают малахитовой зеленью при подогревании над пламенем горелки до появления па- ров в течение 5 минут.
Фильтровальную бумагу убирают, мазок остужают, промывают водой, до- крашивают водным раствором сафранина 2 минуты, промывают водой, высуши- вают на воздухе и изучают под иммерсионной сис-
темой.
В результате споры окрашиваются в зеленый цвет, а вегетативные клетки - в красный.
Капсула – это непостоянный структурный элемент бактериальной клетки, она не является обязательной структурой бактериальной клетки:
потеря её не приводит к гибели клетки (рисунок Рисунок 23 - Бактериаль-
Ные капсулы.
В природе известны бескапсульные штаммы бактерий.
Представляет из себя слизистый слой над клеточной стенкой бактерии. Капсула может окружать как одну так и несколько бактериальных клеток.
Существуют бактерии,синтезирующие слизь на поверхности клеточной стенки в виде бесструктурного слоя полисахаридной природы. Слизистое вещество, окру- жающее клетку, по толщине часто превосходят толщину последней. Например, у сапрофитной бактерииLeiconostoc наблюдается образование одной капсулы для многих особей. Такие скопления бактерий, заключённые в общую капсулу назы- вают зооглеями.
Капсулы обеспечивают выживание бактерий, защищая их от механических повреждений, высыхания, токсических веществ, заражения фагами, а у патоген- ных форм от действия фагоцитов. У некоторых видов бактерий, в том числе и па- тогенных, капсула способствует прикреплению клеток к субстрату.
В зависимости от толщины слоя и прочности соединения с бактериальной клеткой различают видимую макрокапсулу (толщина 0,2 мкм) и микрокапсулу (толщина менее 0,2 мкм), обнаруживаемую лишь при электронной микроскопии или химическими и иммунологическими методами.
Макрокапсулу (истинную капсулу) образуют B.anthracis,Cl.perfringens, мик- рокапсулу– некоторые штаммыEscherichiacoli.
Вещество капсулы – муциноподобное, состоит из высокогидрофильных фиб- рилл, которые по химической структуре представляют из себя:
высокомолекулярные полисахариды, являющиеся производными наруж- ного слоя оболочки (гомо-или гетерополисахаридыу энтеробактерий);
полипептиды (B.anthracis);
гликопептиды (корд-фактор у M.tuberculosis);
рыхлый слизистый слой.
Капсулы образуются в организме хозяина и на питательных средах, содержа- щих белки. Капсулообразованию кроме нативного белка способствует щелочная среда и наличие углекислого газа. При попадании в иммунный организм капсулы, по-видимому, образуются очень медленно и довольно редко.
Синтез капсулы – сложный видоспецифический процесс у различных прока- риот. Биополимеры капсулы синтезируются на наружной поверхности цитоплаз- матической мембраны и выделяются на поверхность клеточной стенки в опреде- лённых специфических её участках.
Капсула – полифункциональный органоид, выполняющий важную биологи- ческую роль. Служит местом локализации капсульных антигенов, определяющих вирулентность, антигенную специфичность и иммуногенность бактерий. У пато- генных бактерий при утрате капсулы резко снижается вирулентность, например у бескапсульных штаммов B.anthracis.
В ветеринарной микробиологии выявление капсулы используют в качестве дифференциального морфологического признака.
Микрокапсулу и слизистый слой определяют серологическими реакциями: реакцией агглютинации (РА), антигенные компоненты капсулы идентифицируют при помощи реакции иммунной флюоресценции (РИФ) и реакции диффузной преципитации (РДП).
Капсулы легко окрашиваются и также легко обесцвечиваются, поэтому для ее выявления выделяют методы окраски, основанные на явлении метахромазии (это свойство клеток и тканей окрашиваться в цветовой тон, отличающийся от цвета самого красителя, а также свойство изменённых клеток и тканей окрашиваться в иной цвет по сравнению с нормальными клетками и тканями). Для окрашивания бактерий на наличие капсулы необходимо исследовать только свежий материал, так как капсулы быстро лизируются.
Для обнаружения капсул применяют специальные методы – Романовского- Гимзы, Гинзы-Бурри, Ольта, Михина и др., рассмотрим два из них: по Ольту и по Михину.