Определение протеолитических ферментов

Некоторые микроорганизмы при осте на питательных средах выделяют про- теазы, под действием которых молекулы белка расщепляются до промежуточных продуктов распада – пептонов, альбумоз, полипептидов. Под действием других ферментов эти продукты распадаются на отдельные аминокислоты. Некоторые па- тогенные виды микробов с выраженной протеолитической активностью расщеп- ляют белки до конечных продуктов – индола, сероводорода, аммиака. Индол и се- роводород имеют наибольшее значение при определении вида микроорганизма.

Для изучения протеолитических свойств микробов иссле- дуемую культуру высевают на питательные среды, содер- жащие тот или иной белок.

Определение сероводорода. Под пробку пробирки с МПБ и исследуемой культурой помещают полоску индика- торной бумаги, пропитанной ацетатом свинца (уксусно- кислым свинцом). Индикаторная бумага не должна касать- ся питательной среды. В положительных случаях обра- зующийся сероводород вступает в соединение с бесцвет- ным ацетатом свинца. Образуется сульфид свинца, кото- рый придает индикаторной бумаге черно-бурое окрашива- ние(рисунок 55).

Определение сероводорода можно также проводить, учитывая рост культуры на комбинированных плотных

Рисунок 55 - Опреде- ление сероводорода.

средах Клиглера, Олькеницкого. Если выделяется сероводород, то в этих средах он взаимодействует сернокислым железом (соль Мора).Образуется сульфид желе- за черного цвета, столбик среды чернеет.

Определение индола.Индол можно обнаружить раз- личными методами. Наиболее доступным и удобным счи- тают метод с использованием индикаторных бумажек.

При использовании бумажек с щавелевой кислотой их по- мещают под пробку пробирки с МПБ. При наличии индо- ла нижняя часть бумажки окрашивается в бледно-розовый цвет (рисунок 56).

Индол можно определить с помощью реактива Эрли- ха, не пользуясь индикаторными бумажками. С этой це- лью к 1 мл двухдневной бульонной культуры добавляют равный объем эфира и интенсивно встряхивают, затем в

пробирку наливают каплями по стенке реактив Эрлиха. При наличии индола на границе между эфиром и бульон- ной культурой образуется яркое малиновое кольцо.

Определение аммиака проводят с помощью красной лакмусовой бумажки, которая в присутствии аммиака си- неет, из-за образовавшегося нашатырного спирта (рисунок 57).

Рисунок 56 - Опре- деление индола.

Определение гидролиза мочевины ферментом уреазой проводят на специальных дифференциально- диагностических средах, содержащих мочевину и индика- тор (среда Кристенсена с индикатором фенол-рот, 3-х са- харный агар Олькеницкого). При расщеплении мочевины среды окрашиваются в малиновый цвет (Proteusvulgaris, Pseudomonasaeruginosa).

Рисунок 57 - Опре- деление аммиака.

Мясо-пептонный желатин используют для изучения протеолитических свойств микроорганизмов. Культуры микробов, обладающих ферментом желатиназой, вызывают разжижение питательной среды.При этом микробы с аэробным типом дыхания разжижают МПЖ сверху, факуль- тативные – по линии укола «чулком», анаэробы – на дне пробирки. Микробы со слабовыраженными протеоли- тическими свойствами в МПЖ образуют от линии посева едва заметные боковые отростки. При этом такой рост у аэ- робов характеризуют как «елочка верхушкой вниз», у фа- культативных анаэробов – рост в виде «ламповой щетки», а анаэробы растут в виде «елочки верхушкой вверх». Микро-

бы с отсутствием протеолитических ферментов растут в МПЖ, не изменяя ее: аэробы – в виде кнопки на поверх-

Рисунок 58 - Разжи- жение желатина.

ности среды, факультативные – растут по укол, анаэробы – на дне пробирки. Культивирование проводят при 22 °С (рисунок 58).

Посев в молоко позволяет определить у микроба наличие фермента казеазы. При наличие казеазы происходит гидролиз казеина до образования пептонов. Это вызывает просветление среды и носит название пептонизация молока.

Протеолитические свойства у анаэробов определяют по почернению мозго- вой среды.