Техника приготовлениябактериологических препаратов (мазков)
Мазки готовят на предметном стекле. В качестве материала применяют взвесь бактерий, бактериальную культуру, молоко, кровь, мазки отпечатки.
Из жидкой микробной культуры для приготовления мазка в левой руке дер- жат пробирку, в правой бактериологическую петлю. Тщательно прожигают ее в пламени горелки. Пробирку открывают у пламени горелки. Петлей захватывают каплю материала, пробирку закрывают и ставят в штатив. Наносят на предметное стекло каплю и растирают до размера рубля. Препарат выдерживают на воздухе, петлю прожигают. Препарат фиксируют – над пламенем горелки либо смесь Ни- кифорова.
Методы фиксации мазков:
Физический способ. Для фиксации используют мазки, приготовленные из бульонных или агаровых культур. С обратной стороны мазка карандашом по стек- лу или маркером обводят его границы. Стекло с мазком, обращенным вверх, мед-
ленно проводят 3-4 раза над верхней частью пламени горелки, нагревая стекло не выше 60 °С.
Химический способ используют для фиксации мазков из крови, мазков- отпечатков,и в некоторых случаях,мазков и патологического материала,т.к.вы- сокие температуры разрушают клеточные элементы. Для этих целей мазки погру- жают в фиксирующие жидкости: метиловый спирт – 5 мин, ацетон – 5 мин, этило- вый спирт – 10 мин, смесь Никифорова – 15-20 мин.
Целью фиксации является закрепление микроорганизмов на стекле, обезвре- живание микробных клеток, коагуляция белков микробных клеток, после чего они легко воспринимают окраску.
Для приготовления мазков из культуры, выращенной на плотной питательной среде, на обезжиренное предметное стекло бактериологической петлей, предвари- тельно прокаленной до красна (профламбированной) наносят небольшую каплю стерильного физиологического раствора. Затем петлю фламбируют повторно, вно- ся ее в пламя горелки в вертикальном положении, после чего в пробирку (чашку Петри) с культурой вносят бактериологическую петлю, предварительно охладив ее о поверхность стекла. Петлю с культурой осторожно вынимают и вносят в при- готовленную заранее на предметном стекле каплю физиологического раствора, тщательно размешивают, равномерно распределяя по стеклу в виде небольшого круга, овала (2 см в диаметре). После окончания приготовления мазка петлю вновь прокаливают (рисунок 15).
Рисунок 15 - Этапы приготовления бактериологического препарата.
Простые методы окраски бактерий
При простых методах окраски применяют только один краситель, чаще всего фуксин Пфейффера, метиленовый синий. Раствор красителя наносят на препарат и
выдерживают 2-3 мин, затем краску смывают водой, препарат высушивают фильтровальной бумагой и рассматривают под иммерсией. Простая окраска по- зволяет обнаружить в материале бактерии, быстро определить их морфологию и иметь представление о разнообразии видов.
Сложные методы окраски
Сложные методы окраски основаны на физико-химических различиях состава микробных клеток, их применяют для дифференциации одних бактерий от др.
Сущность этих методов заключается в последовательном воздействии на мазок двух красящих растворов, из которых один является основным, а другой – контра- стным. Кроме красящих растворов, применяют различные обесцвечивающие ве- щества: спирт, кислоты. В результате разные виды микробов или отдельные структуры внутри микробной клетки окрашиваются в контрастные и разные веще- ства.
Окрашенные препараты имеют следующие преимущества:
они неопасны, т.к. все манипуляции проводят с фиксированным и обезвре- женным материалом;
в них легко различимы отдельные детали, структуры микробной клетки, не выявляющиеся в неокрашенном препарате;
могут храниться длительное время. Недостатки:
невозможность изучения физиологии микробов (подвижность, характер де- ления и т.д.);
деформация микробных клеток после фиксации физическим методом и воз- действия красящих растворов.