- •Раздел 3. Частная вирусология
- •Тема 3.1. Микробиологическая диагностика стафило- и стрептокок-
- •Тема 3.2. Микробиологическая диагностика рожи свиней и листериоза. 149
- •Введение
- •Требования к уровню освоения дициплины
- •Раздел 1. Общая микробиология
- •Устройство бактериологической лаборатории
- •Устройство микроскопа
- •Правила работы с микроскопом
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.2. Основные формы бактерий. Бактериологические краски. Приго-
- •Формы бактерий
- •Бактериологические краски
- •Техника приготовлениябактериологических препаратов (мазков)
- •Методы фиксации мазков:
- •Простые методы окраски бактерий
- •Сложные методы окраски
- •Окраска по Граму
- •Окраска по Циль-Нильсену
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.3. Окраска спор, капсул бактерий, методы определения подвижно- сти бактерий.
- •Метод Пешкова:
- •Метод Виртца:
- •Ные капсулы.
- •Метод Михина:
- •Метод Ольта:
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.4. Изучение морфологии грибов и актиномицетов.
- •Классификация
- •Тофтора).
- •Культивирование грибов
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.5. Лабораторная аппаратура. Методы стерилизации.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.6.Приготовление питательных сред.
- •Классификация питательных сред
- •По назначению:
- •Специальные питательные среды
- •Методы создания анаэробных условий
- •Дифференциально-диагностические среды
- •Висмут-сульфит агар (среда Вильсон-Блера).
- •Среды накопления (обогащения)
- •Синтетические среды
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.7.Посев и культивирование микроорганизмов. Методы выделения чистых культур микробов.
- •Техника посева на поверхность плотной питательной среды в чашках Петри
- •Техника посева на скошенный агар
- •Техника посева на жидкую
- •Техника пересевов культур микробов
- •Ной среды на другую.
- •Методы механического разделения микробов
- •Методы использования биологических особенностей микроорганизмов
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.8.Изучение культуральных и биохимических (ферментативных)
- •Определение протеолитических ферментов
- •Определение сахаролитических свойств микробов
- •Определение окислительно-восстановительных ферментов
- •Определение редуцирующих свойств
- •Определение гемолитических свойств
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.9.Изучение действия антибиотиков,антисептиков и бактерио-
- •Метод диффузии антибиотиков в агар с применением дисков
- •Метод серийных разведений антибиотика
- •Контрольные вопросы:
- •Способы заражения лабораторных животных
- •Вскрытие трупов лабораторных животных
- •Определение токсигенности микробов
- •Определение токсичности микробов
- •Методы лабораторных исследований
- •Отбор патматериала
- •Принципы организации и оборудование бактериологических лабораторий
- •Правила взятия, консервирования и транспортировки патологического материала
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.11.Санитарно-бактериологическое исследование воды.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.12.Санитарно-бактериологическое исследование воздуха и почвы.
- •Санитарно-микробиологическое исследование почвы
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.13.Изучение микрофлоры кормов. Коллоквиум №1 «Общая микро-
- •Контрольные вопросы:
- •Раздел 2. Инфекция и иммунитет Тема 2.1.Серологические реакции. Реакция агглютинации (ра).
- •Метод ра.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 2.2.Реакция преципитации (рп).
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 2.3.Реакция связывания комплемента (рск).
- •Компоненты реакции:
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 2.4.Реакция нейтрализации (рн), метод флуоресцирующих антител
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 2.5.Биопрепараты. Коллоквиум № 2 «Серологические реакции в мик- робиологии».
- •Лиофилизация микроорганизмов
- •Правила использования и хранения биопрепаратов, их транспортировка
- •Контрольные вопросы:
- •Раздел 3. Частнаямикробиология Тема 3.1.Микробиологическая диагностика стафило- и стрептококкозов
- •Стафилококки.
- •Специфическая терапия и профилактика.
- •Стрептококкоза молодняка.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.2.Микробиологическая диагностика рожи свиней и листериоза Цель занятия: ознакомить студентов с возбудителями рожи свиней и листе-
- •Содержание:
- •Слева: гладкие s-формы (колонии возбудителя на пита- тельной среде и мазок под микроскопом); Справа: шероховатые r-формы (колонии возбудителя на питательной среде и мазок под микроскопом).
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.3.Микробиологическая диагностика сибирской язвы.
- •Ная» дорожка.
- •Специфическая профилактика.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.4.Микробиологическая диагностика клостридиозов.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.5. Микробиологическая диагностика некробактериоза и копытной гнили овец.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.6. Коллоквиум № 3 «Грамположительные микроорганизмы». Цель занятия: выявить у студентов остаточные знания по пройденному ма-
- •Содержание:
- •Тема 3.7. Микробиологическая диагностика туберкулеза.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.8. Микробиологическая диагностика паратуберкулеза.
- •Тема 3.9. Микробиологическая диагностика эшерихиозов и сальмонелле-
- •Мпа; 2. Среда Эндо; 3. Среда Левина; 4. Среда Плоскирева.
- •Специфическая профилактика.
- •Специфическая профилактика.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.10. Микробиологическая диагностика бруцеллеза и туляремии.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.11.Микробиологическая диагностика пастереллеза и гемофилезов свиней.
- •Специфическая терапия.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.12. Микробиологическая диагностика сапа лошадей и мелиоидоза.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.13. Коллоквиум № 4 «Грамотрицательные микроорганизмы». Цель занятия: выявить у студентов остаточные знания по пройденному ма-
- •Содержание:
- •Тема 3.14. Микробиологическая диагностика лептоспироза и кампило-
- •Вакцины импортные для собак:
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.15. Патогенные микоплазмы.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.16. Хламидии, риккетсии.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.17. Лабораторная диагностика микозов.
- •Лабораторная диагностика, специфическая терапия и профилактика.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.18. Лабораторная диагностика микотоксикозов.
- •Контрольные вопросы:
- •Форма промежуточного контроля знаний студентов
- •Список рекомендованной литературы
- •Дополнительная литература
- •Периодические издания
- •Перечень ресурсов информационно-телекоммуникационной сети «Интернет»
Техника посева на скошенный агар
Рисунок 50 - Техника посева на скошенный агар.
в пробирку. Петлю с исследуемым материалом опускают на поверхность пита- тельной среды у дна пробирки и скользящими движениями делаю посев штрихом снизу вверх. После пересева горлышко пробирки обжигают в пламени и пробирку закрывают пробкой (рисунок 50).
Техника посева на жидкую
среду
Петлю с находящимся на ней материалом погружают в пита- тельную среду. Если материал
вязкий и с петли не снимается, его растирают по стенки пробирки (рисунок 51).
Рисунок 51 - Техника посева микроорганиз- мов на жидкую питательную среду.
Техника пересевов культур микробов
Культуру микроорганизма, выращенную на питательной среде, с целью изу- чения культурально-биохимических свойств пересевают на другие среды. При этом в левую руку берут две пробирки: с культурой микроба, из которой произво- дится пересев и со стерильной питательной средой. Пересев делают бактериаль- ной петлей, которую держат в правой руке. Мизинцем и безымянным пальцем правой руки, извлекают одновременно две пробки из пробирок. Горлышки проби- рок обжигают в пламени горелки. Обожженную петлю охлаждают
Рисунок 52 - Техника пересевов культур микробов с оной питатель-
Ной среды на другую.
прикосновением к внутренней стенки пробирки и погружают в культуру микроба, материал на петле переносят в стерильную среду. Затем обжигают горлышки про- бирок, одновременно закрывают их пробками и ставят в штатив (рисунок 52).
Все посевы подписывают и помещают в термостат при температуре 37° С на сутки, за исключением посевов в МПЖ, который выдерживают при комнатной температуре или в термостате при 22°С в течение трех и более суток.
В жидкой средерост микроорганизмов проявляется либо равномерным по- мутнением за счет увеличения числа бактериальных клеток, в основном подвиж- ных или продуктов обмена бактерий; либо образующимся осадком (в этом случае среда остается прозрачной). Осадок может быть рыхлый, легко разбивающийся при встряхивании пробирки, или слизистый, поднимающийся в виде «косички»,
«смерчика», а также в виде сплошной массы на дне пробирки или мелких крупи- нок, располагающихся на стекле пробирки. Есть виды микроорганизмов, которые в силу особой потребности в кислороде воздуха растут на поверхности жидкой среды, образуя пленку и не вызывая помутнения бульона. Пленка может быть су- хой и слизистой, гладкой и складчатой. В ряде случаев бактериальные культуры дают одновременно помутнение среды, обильный осадок и пристеночное кольцо на поверхности.
На плотной средекультуральные свойства определяют по характеру разви- вающихся колоний. При внесении на поверхность среды большого количества бактериальных клеток наблюдают сплошной рост микробной массы. При высеве небольшого количества клеток на среду с большой поверхностью из каждой бак- териальной клетки в результате ее деления (размножения) формируется колония.
Колонией называют изолированное скопление клеток одного вида, выросших из одной клетки (клон клеток). В зависимости от того, где растет микроорганизм (на поверхности плотной питательной среды, в толще ее), различают поверхност- ные, глубинные и донные колонии.
Колонии в диаметре могут быть мелкие (1-2 мм), крупные (более 4 мм) или совсем маленькие в виде мельчайших росинок. Различают колонии сухие, влаж- ные (сочные) или слизистые; гладкие, глянцевые, шероховатые с неровной по- верхностью, с ровными или неровными краями, выпуклые, плоские и с углубле- нием посередине,прозрачные и матовые, бесцветные или пигментированные.
При описании колоний учитывают следующие признаки (рисунок 53):
форму - округлая, амебовидная, неправильная и т.д.;
размер - очень мелкие (точечные) (0,1-0,5 мм), мелкие (0,5-3 мм), средних размеров (3-5 мм) и крупные (более 5 мм в диаметре);
-поверхность –гладкая(S-форма) –микробные клетки располагаются,со- прикасаясь своими боковыми поверхностями, шероховатая (R-форма) - микроб- ные клетки располагаются цепочками,которые, накладываясь друг на друга, обу- славливают шероховатую поверхность и неровный край колоний, складчатая, морщинистая, с концентрическими кругами или радиально исчерченная;
профиль - плоский, выпуклый, конусовидный, кратерообразный и т.д.;
прозрачность - тусклая, матовая, блестящая, прозрачная, мучнистая;
цвет (пигмент) - бесцветная или пигментированная (белая, желтая, золоти- стая, красная, черная), особо отмечают выделение пигмента в среду с ее окраши- ванием;
край - ровный, волнистый, зубчатый, бахромчатый и т.д.;
Рисунок 53 - Разнообразные формы колоний микроорганизмов.
структура - однородная, мелко или крупнозернистая, струйчатая; край и структуру колонии определяют с помощью лупы или на малом увеличении микро- скопа, поместив чашку Петри с посевом на столик микроскопа крышкой вниз;
-консистенция -определяют прикасаясь к поверхности петлей,колония мо- жет быть плотной, мягкой, врастающей в агар, слизистой (тянется за петлей), хрупкой (легко ломается при соприкосновении с петлей).
МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР
Чистая культура – это микроорганизмы одного вида, выросшие на пита- тельной среде. Выделение чистой культуры является важным этапом бактериоло- гического исследования. Чистая культура необходима для изучения морфологиче- ских, культуральных, биохимических и антигенных свойств, по их совокупности устанавливается видовая принадлежность микроорганизма.
Микробная колония – это потомство или популяция одной микробной клетки при росте на плотных питательных средах.