Санитарно-микробиологическое исследование почвы

Краткий санитарно-микробиологический анализ почвы включает определе- ние количества МАФАнМ в 1 г; коли-титра почвы; в отдельных случаях в почве определяют наличие возбудителей сибирской язвы, для исключения старых сиби- реязвенных захоронений. Например, при строительстве детских оздоровительных лагерей, новых животноводческих помещений и т. д.

Отбор проб почвы. На обследуемой территории до 1 тыс. м³ выделяют два участка по 25 м² каждый: один участок выбирают вблизи, другой - вдали от ис- точника загрязнения. С каждого отбирают среднюю пробу, составленную из 5 об- разцов, взятых по диагонали. Образцы берут на глубине до 20 см, при исследова- нии почвы скотомогильников - ниже глубины захоронения не менее чем на 25 см.

Пробы отбирают стерильной железной лопатой или специальным буром в сте- рильные широкогорлые банки, которые закрывают ватными пробками. К банке приклеивают этикетку с датой и номером образца.

Масса каждого образца должна быть 200-300 г,а смешанного-не менее1 кг. Отобранные пробы почвы направляют в лабораторию и исследуют сразу же или не позднее 12-18 ч при обязательном хранении в холодильнике.

Определение количества МАФАнМ в 1 г почвы методом серийных разве- дений. В производственных лабораториях в колбу емкостью 500 мл наливают 270 мл стерильной водопроводной воды и вносят 30 г исследуемой почвы, затем кол- бу с содержимым встряхивают в течение 10 мин. Из полученного разведения поч- вы 1:10^-1 готовят последующие 10-кратные разведения: для чистых почв от 1:10 ^-2 до 1:10^-4, для загрязненных - до 1:10^-6 и больше.

Из двух последних разведений почвы (10^-5 и 10^-6) берут по 1 мл и переносят в стерильные чашки Петри (не менее двух чашек на каждое разведение), которые заливают 13-15 мл расплавленного и охлажденного до температуры 50 °С МПА, тщательно перемешивают (метод горячей заливки). Посевы культивируют в тер- мостате 24-48 ч при температуре 30 °С.

Учету подлежат чашки Петри, в которых выросло от 30 до 300 колоний. Ко- лонии считают в каждой чашке отдельно, определяют среднеарифметическое чис- ло по двум чашкам. Полученное число умножают на степень разведения иссле- дуемой почвы и получают число бактерий в 1 г почвы.

Результаты выражают в «колонии образующих единицах» - КОЕ/мл, г.

Определение коли-титра почвы методом бродильных проб и использо- ванием среды Кесслера. Исследования проводят в три этапа.

1. Готовят следующие разведения: для чистых почв - от 1:10 ^-1 до 1:10^-4; для загрязненных - от 1:10^-3 до 1:10^-6. После тщательного перемешивания 1 г почвы по 1 мл получен ной суспензии из различных разведений переносят в пробирки со средой Кесслера с поплавками. Посевы культивируют при температуре 43 °С в те- чение 48 ч (при такой температуре дает рост Е.coli только теплокровных).

2. Просматривают посевы на среде Кесслера. Для установления показателя коли-титра почвы находя г пробирку с наибольшим разведением почвы, в резуль- тате посева которой появились признаки брожения.Из пробирок с помутнением и газом делают высев на агар Эндо штрихом. Посевы сутки культивируют при 37

°С.

3. Исследуют колонии, выросшие на среде Эндо. Для этого выбирают изо- лированные колонии, типичные для бактерий БГКП, готовят из них мазки, красят по Граму, микроскопируют. При обнаружении в мазках коротких грамотрица- тельных палочек проводят высев на среду Кесслера для подтверждения газообра- зования в чистой культуре.

Почва	Микробное число, млн. в 1 г	Титр кишеч- ной палочки	Титр анаэробов (титр Cl. perfringens)
Сильно загрязненная С	выше 3-5 0,001 и вы	ше 0,0001 и вы	ше
Умеренно загрязнен- ная	2,5-3	0,01-0,001	0,001-0,0001
Слабо загрязненная	2	0,1-0,01	0,01-0,001
Чистая	1-1,5 1,0 и выше	0,1 и выше

Особую трудность представляет выделение сибиреязвенных спор из почвы, т.к. в ней находится огромное количество различных микроорганизмов, в том числе спорообразующих сапрофитных аэробов. Существующие бактериологиче- ские методы не всегда позволяют выделить возбудителя сибирской язвы из почвы. Основная трудность состоит в отделении спор от частиц почвы.

Из многих известных методов более надежным является метод предвари- тельной подготовки пробы почвы по следующей технологии:

1. 100 г исследуемой почвы заливают 5-10-кратным объемом стерильного фосфатного буфера или воды;

2. шуттелируют взвесь в течение 20-30 мин, с последующим 5-8-минутным отстаиванием;

3. проводят фильтрование через 2-3 слоя марли;

4. прогревают полученную суспензию в водяной бане в течение 30 мин при температуре 70 °С для уничтожения сопутствующей вегетативной микрофлоры;

5. переносят суспензию на поверхность МПА в чашках Петри для получе- ния изолированных колоний,а из них чистой культуры;

6. полученной культурой заражают 5-10 белых мышей подкожно в дозе 0,1-

0,2 мл;

проводят вскрытие павших мышей и выделяют чистую культуру возбудителя сибирской язвы из органов трупа.