- •Раздел 3. Частная вирусология
- •Тема 3.1. Микробиологическая диагностика стафило- и стрептокок-
- •Тема 3.2. Микробиологическая диагностика рожи свиней и листериоза. 149
- •Введение
- •Требования к уровню освоения дициплины
- •Раздел 1. Общая микробиология
- •Устройство бактериологической лаборатории
- •Устройство микроскопа
- •Правила работы с микроскопом
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.2. Основные формы бактерий. Бактериологические краски. Приго-
- •Формы бактерий
- •Бактериологические краски
- •Техника приготовлениябактериологических препаратов (мазков)
- •Методы фиксации мазков:
- •Простые методы окраски бактерий
- •Сложные методы окраски
- •Окраска по Граму
- •Окраска по Циль-Нильсену
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.3. Окраска спор, капсул бактерий, методы определения подвижно- сти бактерий.
- •Метод Пешкова:
- •Метод Виртца:
- •Ные капсулы.
- •Метод Михина:
- •Метод Ольта:
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.4. Изучение морфологии грибов и актиномицетов.
- •Классификация
- •Тофтора).
- •Культивирование грибов
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.5. Лабораторная аппаратура. Методы стерилизации.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.6.Приготовление питательных сред.
- •Классификация питательных сред
- •По назначению:
- •Специальные питательные среды
- •Методы создания анаэробных условий
- •Дифференциально-диагностические среды
- •Висмут-сульфит агар (среда Вильсон-Блера).
- •Среды накопления (обогащения)
- •Синтетические среды
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.7.Посев и культивирование микроорганизмов. Методы выделения чистых культур микробов.
- •Техника посева на поверхность плотной питательной среды в чашках Петри
- •Техника посева на скошенный агар
- •Техника посева на жидкую
- •Техника пересевов культур микробов
- •Ной среды на другую.
- •Методы механического разделения микробов
- •Методы использования биологических особенностей микроорганизмов
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.8.Изучение культуральных и биохимических (ферментативных)
- •Определение протеолитических ферментов
- •Определение сахаролитических свойств микробов
- •Определение окислительно-восстановительных ферментов
- •Определение редуцирующих свойств
- •Определение гемолитических свойств
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.9.Изучение действия антибиотиков,антисептиков и бактерио-
- •Метод диффузии антибиотиков в агар с применением дисков
- •Метод серийных разведений антибиотика
- •Контрольные вопросы:
- •Способы заражения лабораторных животных
- •Вскрытие трупов лабораторных животных
- •Определение токсигенности микробов
- •Определение токсичности микробов
- •Методы лабораторных исследований
- •Отбор патматериала
- •Принципы организации и оборудование бактериологических лабораторий
- •Правила взятия, консервирования и транспортировки патологического материала
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.11.Санитарно-бактериологическое исследование воды.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.12.Санитарно-бактериологическое исследование воздуха и почвы.
- •Санитарно-микробиологическое исследование почвы
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.13.Изучение микрофлоры кормов. Коллоквиум №1 «Общая микро-
- •Контрольные вопросы:
- •Раздел 2. Инфекция и иммунитет Тема 2.1.Серологические реакции. Реакция агглютинации (ра).
- •Метод ра.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 2.2.Реакция преципитации (рп).
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 2.3.Реакция связывания комплемента (рск).
- •Компоненты реакции:
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 2.4.Реакция нейтрализации (рн), метод флуоресцирующих антител
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 2.5.Биопрепараты. Коллоквиум № 2 «Серологические реакции в мик- робиологии».
- •Лиофилизация микроорганизмов
- •Правила использования и хранения биопрепаратов, их транспортировка
- •Контрольные вопросы:
- •Раздел 3. Частнаямикробиология Тема 3.1.Микробиологическая диагностика стафило- и стрептококкозов
- •Стафилококки.
- •Специфическая терапия и профилактика.
- •Стрептококкоза молодняка.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.2.Микробиологическая диагностика рожи свиней и листериоза Цель занятия: ознакомить студентов с возбудителями рожи свиней и листе-
- •Содержание:
- •Слева: гладкие s-формы (колонии возбудителя на пита- тельной среде и мазок под микроскопом); Справа: шероховатые r-формы (колонии возбудителя на питательной среде и мазок под микроскопом).
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.3.Микробиологическая диагностика сибирской язвы.
- •Ная» дорожка.
- •Специфическая профилактика.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.4.Микробиологическая диагностика клостридиозов.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.5. Микробиологическая диагностика некробактериоза и копытной гнили овец.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.6. Коллоквиум № 3 «Грамположительные микроорганизмы». Цель занятия: выявить у студентов остаточные знания по пройденному ма-
- •Содержание:
- •Тема 3.7. Микробиологическая диагностика туберкулеза.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.8. Микробиологическая диагностика паратуберкулеза.
- •Тема 3.9. Микробиологическая диагностика эшерихиозов и сальмонелле-
- •Мпа; 2. Среда Эндо; 3. Среда Левина; 4. Среда Плоскирева.
- •Специфическая профилактика.
- •Специфическая профилактика.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.10. Микробиологическая диагностика бруцеллеза и туляремии.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.11.Микробиологическая диагностика пастереллеза и гемофилезов свиней.
- •Специфическая терапия.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.12. Микробиологическая диагностика сапа лошадей и мелиоидоза.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.13. Коллоквиум № 4 «Грамотрицательные микроорганизмы». Цель занятия: выявить у студентов остаточные знания по пройденному ма-
- •Содержание:
- •Тема 3.14. Микробиологическая диагностика лептоспироза и кампило-
- •Вакцины импортные для собак:
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.15. Патогенные микоплазмы.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.16. Хламидии, риккетсии.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.17. Лабораторная диагностика микозов.
- •Лабораторная диагностика, специфическая терапия и профилактика.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.18. Лабораторная диагностика микотоксикозов.
- •Контрольные вопросы:
- •Форма промежуточного контроля знаний студентов
- •Список рекомендованной литературы
- •Дополнительная литература
- •Периодические издания
- •Перечень ресурсов информационно-телекоммуникационной сети «Интернет»
Тема 1.11.Санитарно-бактериологическое исследование воды.
Цель занятия: ознакомить студентов с правилами отбора проб из различных водоемов; изучить методы определения общей загрязненности воды.
Содержание:
Отбор проб воды.
Микробное число.
Коли-титр.
Коли-индекс.
Для отбора проб воды используют специальную одноразовую посуду или ем- кости многократного применения, изготовленные из нетоксичных материалов.
Емкости должны быть оснащены плотно закрывающимися (силиконовыми, рези-
новыми) пробками и защитным колпачком (из алюминиевой фольги, плотной бу- маги). Многоразовая посуда должна выдерживать стерилизацию сухим жаром или автоклавированием.
Пробу отбирают в стерильные емкости с соблюдением правил асептики.Ем- кость открывают непосредственно перед отбором. Во время отбора пробка и края емкости не должны чего-либо касаться. Ополаскивать посуду запрещается.
С поверхности водоема или из крана водопровода пробу берут в стерильные флаконы с притертой пробкой емкостью 0,5 л, а с глубины - привязанным к шесту батометром или стеклянным сосудом с притертой пробкой, к которой прикреплен шнур. Водопроводную воду наливают после предварительного обжигания крана и стекания первых порций воды из него в течение 10-15 мин. Вода из колодца долж- на быть взята до начала пользования им или через 10-12 ч после прекращения пользования.
После наполнения емкость закрывают стерильной пробкой. Отобранную про- бу маркируют и сопровождают актом отбора проб воды с указанием названия пробы, места забора, даты, цели исследования, куда направляется проба для ис- следования, подпись лица, взявшего пробу.
К исследованию проб в лаборатории необходимо приступить как можно бы- стрее (через 2 часа после забора). Доставка проб осуществляется в контейнерах- холодильниках при температуре 4-10 °С. В холодный период года необходимо предохранить пробы от промерзания и срок исследования увеличивается до 6 ча- сов с момента забора.
Лабораторная посуда должна быть тщательно вымыта, ополоснута дистилли- рованной водой и высушена. Пробирки, колбы, бутылки, флаконы должны быть заткнуты силиконовыми или ватно-марлевыми пробками и упакованы так, чтобы исключить загрязнение после стерилизации в процессе работы и хранения. Новые резиновые пробки кипятят в 2 % растворе соды 30 минут и 5 раз промывают водо- проводной водой (кипячение и промывание повторяют дважды). Затем пробки 30 минут кипятят в дистиллированной воде, высушивают, заворачивают в бумагу или фольгу и стерилизуют в паровом стерилизаторе. Резиновые пробки, использован-
ные ранее, обеззараживают, кипятят 30 минут в водопроводной воде с нейтраль- ным моющим средством, промывают в водопроводной воде, высушивают, монти- руют и стерилизуют. Пипетки со вставленными тампонами из ваты, чашки Петри должны быть уложены в металлические пеналы или завернуты в бумагу.Подго- товленную посуду стерилизуют в сушильном шкафу или автоклаве.
После выполнения анализа всю посуду обеззараживают в автоклаве при 130
°С 1 час. Пипетки кипятят в 2 % растворе соды. После ополаскивают дистиллиро- ванной водой.
Питьевая вода не должна иметь постороннего вкуса, запаха, несвойственной ей окраски, содержать ядовитые вещества и патогенные микроорганизмы. Обна- ружить патогенные микроорганизмы в воде ввиду их малой концентрации трудно. О безопасности воды в эпидемиологическом отношении судят по результатам ее санитарно-бактериологического исследования, которое включает определение двух микробиологических показателей: общего микробного числа и количества БГКП (определение коли-титра и коли-индекса).
Определение микробного числа. Это общее количество микробов, выросших на МПА при 37 °С за 24-48 часов. Пробу воды из артезианских колодцев центри- фугируют (для концентрирования бактерий); из открытых водоемов - делают 5 – 7 последовательных разведений 1:10. Из каждой пробирки берут по 1 мл и вносят в стерильную чашку Петри, заливают расплавленным МПА (45-50 °С). Осторожным вращением чашки равномерно перемешивают смесь и ставят в термостат (37 °С) на 24-48 ч. Подсчитывают колонии через лупу. Общее количество бактерий в 1 мл водопроводной воды не должно превышать 100, а открытых водоемов - не более 1000.
Определение титра кишечной палочки (коли-титра) воды. Это наименьшее количество воды, в котором при посеве обнаруживают хотя бы одну кишечную палочку. Для определения коли-титра используют бродильную пробу и метод мембранных фильтров. При бродильном методе пробу исследуемой воды в опре- деленных разведениях высевают на среду накопления, затем при наличии роста,
характерного для кишечной палочки, пересевают на дифференциально- диагностические среды и выявляют кишечную палочку.
Если коли-титр выше установленных норм, исследование повторяют. Для ус- тановления фекального загрязнения,посевы культивируют при43 °С для исклю- чения кишечной палочки холоднокровных, не растущей при этой температуре.
Метод мембранных фильтров. Мембранные фильтры № 2 или № 3, изготов- ленные из нитроклетчатки или нитрохлорвинила, хорошо промывают горячей во- дой. Исследуемую воду под давлением пропускают через фильтр не менее 333 мл для водопроводной, воды из открытых водоемов 0,1; 1,0 и 10 мл. Затем фильтры с соблюдением правил асептики переносят на плотную среду Эндо и помещают в термостат при 37 °С. Через 18-24 ч подсчитывают колонии кишечной палочки, их количество множают на 1000, полученный результат делят на объем профильтро- ванной воды, то есть определяют число кишечных палочек в 1 л воды - коли- индекс.
Микробиологические показатели для питьевой (водопроводной воды) норми- рованы ГОСТ 2874-73. Микробное число должно быть не более 100, коли-титр - не менее 300, коли-индекс – не более 3. Количество патогенов в чистой водопро- водной воде не допускается.
Вода артезианских скважин, распределяемая по водопроводам без очистки и дезинфекции, должна соответствовать следующим нормам: микробное число не более 100, коли-титр не менее 500, коли-индекс не более 2.
Вода открытых водоемов считается доброкачественной, если микробное чис- ло не более 1000, коли-титр не менее 111, коли-индекс не более 9.
В системе санитарно-микробиологического контроля качества питьевой воды различают текущий контроль, экстренный и контроль по эпидпоказаниям.
Текущий контроль питьевой воды по микробиологическим и паразитологиче- ским показателям осуществляется в рамках государственного и ведомственного санитарно-эпидемиологического надзора за качеством питьевой воды в соответст- вии с разработанными региональными программами на соответствующих терри- ториях.
Экстренный санитарно-микробиологический контроль питьевой воды осуще- ствляется ведомственными и производственными лабораториями в случае каких- либо внезапных нарушений или аварий в системе водоснабжения, в результате ко- торых происходит микробное загрязнение водопроводной воды в распределитель- ной сети.
Контроль воды по эпидпоказаниям производят лаборатории учреждений СЭН и ведомственных служб в случае возникновения подъема заболеваемости населе- ния кишечными бактериальными и вирусными инфекциями, уровень которой пре- вышает среднесезонные показатели, а также при вспышке или эпидемии водного происхождения.
Экстренный контроль питьевой воды, а также контроль по эпидпоказаниям предполагают более частые микробиологические исследования, чем установлено по программе.
Анализ результатов санитарно-микробиологического контроля проводится регулярно, а также по представлении месячных, квартальных, годовых отчетов ор- ганизациями, ответственными за подготовку питьевой воды.
При анализе вод источника и по этапам очистки исследуемый объем воды выбирают исходя из предполагаемого загрязнения для получения изолированных колоний и, соответственно, количественного результата. При обнаружении иско- мых бактерий их число пересчитывают на объем воды и выражают в числе коло- ниеобразующих единиц (КОЕ) бактерий или бляшкообразующих единиц (БОЕ) колифагов. При наличии показаний к исследованию питьевой воды на патогенные бактерии или вирусы поиск возбудителя определяется эпидемической ситуацией и его циркуляцией в объектах окружающей среды данного региона.