Ход исследований при выявлении возбудителя ботулизма.

1 День исследования

1. Взятие материала от больного :

промывные воды (растирают);

рвотные массы (растирают);

кровь (разводят цитратом натрия 1:3)

2 .Приготовление мазков из опытного материала:

окраска по Граму;

выявление капсул методом Йоне

3. Посев на:

среду Китта-Тароцци;

стерильное лакмусовое молоко;

среду Вильсон-Блера;

среду Врублевського;

желточную среду,

5% кровяной МПА

Культивирование в анаэростате.

4. Выявление ботулинического токсина с помощью биопробы.

Материал от больного экстрагируют в 0,9% р-ре NaСl, фильтруют, центрифугируют. Подготовленный материал разливают по 1 мл в 5 пробирок. В пробирки добавляют по 1 мл протиботулиничних сывороток разных сероваров. Затем проводят заражение пяти лабораторных животных (белых мышей). Вводят по 0,5-1,0 мл каждой смеси внутрибрюшинно или подкожно.

2 День исследования

1 Учет и описание результатов роста микроорганизмов на жидких и плотных питательных средах.

2. Приготовление мазков из образовавшихся колоний, окраска по Граму, выявление типичных "теннисных ракеток" со спорами.

3. Посев чистой культуры на среду Врублевського

3 День исследования

1. Изучение роста микроорганизмов на среде Врублевського.

2. Окраска по методу Грама.

3. Идентификация возбудителя :

по морфологии (подвижность);

в РНГА;

определение биохимической активности (ферментация глюкозы; гидролиз желатина; ферментация липазы; пептонизация молока);

по антигенной структуре в РА на стекле.

4. Учет выявления ботулинического токсина. Если в опытном материале был ботулинический токсин, выживет лишь животное, которому ввели токсин, нейтрализованный соответствующей сывороткой. У остальных животных развивается парез конечностей, поражения внутренних органов.

Ход исследования для выявления возбудителя столбняка.

1 День исследования

1. Взятие материала от больного:

раневое отделяемое;

кусочки тканей

2. Приготовление мазков из взятого материала:

окраска по Граму;

выявление спор методом Циля-Нильсена

3. Посев:

на среду Китта-Тароцци,

5% кровяной МПА

Культивирование в анаэростате.

4. Биопроба:

Материал от больного экстрагируют в 9% растворе NaCl. С целью идентификации токсина вводят экстрагированный материал экспериментальным животным (белым мышам).

2-3 день исследование

1. Учет и описание результатов роста микроорганизмов на питательных средах:

характеристика колоний;

приготовление мазков из колоний и окраска по Граму

посев чистой культуры на среду Врублевського

2. Учет биопробы:

У экспериментальных животных развивается клиническая картина столбняка.

3. Постановка реакции нейтрализации:

Культуру, выращенную на среде Китта-Тароцци центрифугируют. Надосадочную жидкость смешивают с антитоксической противостолбнячной сывороткой (и с NaCl 9% для положительного контроля). Вводят двум белым мышам внутримышечно у корня хвоста.

4-5 день исследование

1. Изучение роста микроорганизмов на среде Врублевського

2. Окраска колоний по методу Грама.

3 Учет реакции нейтрализации.

У первого животного в результате нейтрализации токсина антитоксином визуальные проявления отсутствуют. У второго - развивается ригидность хвоста и мышц в месте введения токсина, животное погибает.