1. Матеріали методичного забезпечення теми

1.1. Завдання для перевірки вихідного рівня знань,вмінь

1. Хімічна будова лактата і пірувата.

2. Хімічна будова деяких вітамінів (В₂, В₆, РР, ліпоєвої кислоти).

3. Біохімічні шляхи утворення лактату.

4. Поняття про аеробні та анаеробні процеси окислення.

5. Головні молекулярні механізми глікогенолізу.

6. Реакції та ферменти глікогенолізу.

7. Реакції та ферменти окислювального декарбоксилування пірувату.

1.2 Зміст лабораторної работи

1. Визначення вмісту пірувата в сироватці крові.

Принцип методу :

Після осадження білків сироватки крові піровиноградна кислота без білкового фільтрату реагує в кислому середовищі з 2,4-ДФГ, утворюючи відповідний гідразон. Після додавання до інкубаційного середовища лугу розвивається характерне забарвлення, інтенсивність якого пропорційна концентрації пірувата, що оцінюється по стандартному розчину, який містить 5,0 мкг пірувата в 1 мл. Метод недостатньо специфічний, так як гідрозон утворюють і інші кето-сполуки, але оскільки підвищення рівня забарнення гідразонів може проходити головним чином за рахунок пірувату, його можна застосовувати з діагностичною метою.

Ход работи. 1. Одержання досліджувального матеріалу:

До 0,3 мл сироватки крові доливають 0,7 мл Н₂О, перемішують, додають 1 мл 10% ТХО. Перемішують і через 2-3 хвилини центрифугують при 1500 об/хв., 15 хвилин. Беруть дві пробірки, на одній відмічають дослід, на другій контроль.

Дослід Контроль

1 мл центрифугату 1 мл пірувату №-а

0,5 мл розчину 2,4-ДФГ 0,5 мл розчину 2,4-ДФГ

залишають на 20 хвилин при кімнатній температурі в темному місці

Через 10 хвилин колориметрують проти води. Вимірювання проводять з дослідною і контрольною пробами. Отримані виміри заносять в протокол досліду і проводять розрахунок за формулою:

Сх = Сст х Ест

Е проби

ВИСНОВОК ТА МЕДИКО-БІОЛОГІЧНА ОЦІНКА РЕЗУЛЬТАТІВ ДОСЛІДЖЕННЯ

Зведена таблиця даних по лактату і пірувату

Метаболічний	Лактат ммоль/л		Піруват ммоль/л		Артеріально-венозна різниця
Стан	Артерія	вена	артерія	Вена
НОРМА	0,55	0,80	50,0	70,0	Лактат-0,3 ммоль/л; Піруват-20,0 ммоль/л
ГІПОКСІЯ Легка	0,70	1,20	150,0	120,0	Лактат-0,50 ммоль/л; Піруват-30 ммоль/л
Середня	2,15	1,70	200,0	160,0	Лактат-0,65 ммоль/л Піруват-0,40 ммоль/л
Важка	3,60 і більше (смертель- ний випадок)	2,50 і більше	240,0 і більше	200,0 і більше	Лактат-1,10 ммоль/л Піруват-0,40 ммоль/л

1.3. Запитання для перевірки кінцевого рівня знань

1. Які ви знаєте види декарбоксилювання піровиноградної кислоти?

2. У чому полягає суть піруватдегідрогеназної реакції?

3. Які коферменти та ферменти приїмають участь у процесі окислювального декарбоксилювання пірувату?

4. У яких тканинах організму інтенсивно утворюється лактат?

5. Чому опасно накопичення лактату?

6. Що таке “киснева заборгованість” організму?

7. Чому у нетренованих людей може з’явитися задуха?

8. Чим відрізняється процес глікогеноліза від гліколізу.

9. В яких тканинах організму відбувається гліколіз, а в яких глікогеноліз

10. У чому полагяє суть методів визначення пірувата в сироватці крові?

11.Для чого проводять визначення лактата і пірувата в сироватці крові?

1.4 Тестові завдання до теми (вибрати з тестових завдань до модульного контролю)

Наступна тема 14. Альтернативні шляхи обміну моносахаридів. Пентозофосфатний шлях окислення глюкози: схема,біологічне значення,особливості функціонування в зізних тканинах. Метаболічні шляхи перетворення фруктози та галактози: спадкові ензимопатії їх обміну.(2год).

Лабораторна работа Визначення фруктози реакцією Селіванова

Мета заняття:

Студент повинен знати:

- основні напрямки біохімічних перетворень вуглеводів в тканинах організму

- пентозофосфатний шлях обміну вуглеводів

- реакції метаболічних перетворень галактози та фруктози

- хімічну будову, ізомерію та номенклатуру головних представників вуглеводів

- принцип методу визначення фруктози реакцією Селіванова

Студент повинен вміти :

- Визначити фруктозу реакцією Селіванова